UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

FISIOPATOLOGÍA: PRÁCTICA 4

Determinación de colesterol
QUIMICO FARMACÉUTICO
BIÓLOGO
602
EDUARDO CARRILLO GODINEZ

Introducción

El colesterol se encuentra presente en la sangre, bilis y tejido cerebral. Es precursor de los

ácidos biliares, esteroides, y vitamina D. Su determinación contribuye al diagnóstico y
clasificación de las dislipidemias. El colesterol es un lípido producido por el hígado a partir
de alimentos ricos en grasa. La sustancia es necesaria para el funcionamiento normal del
organismo, y está presente en las membranas (capas externas) de todas las células del
organismo. El organismo necesita una cantidad adecuada del mismo para funcionar
adecuadamente. Sin embargo, el exceso en la sangre unido a otras moléculas y sustancias
puede provocar que se deposite en las arterias dando lugar a placas. Esto puede provocar
que las arterias se estrechen y/o se obstruyan. Además, si los niveles de colesterol en sangre
son elevados puede aumentar el riesgo de desarrollar enfermedades cardiacas.

El colesterol desempeña un papel imprescindible en el organismo. Sus principales funciones

son: Precursor de las hormonas sexuales, función estructural, precursor de las sales biliares,
precursor de las hormonas corticoides, como la aldosterona y el cortisol, impulsor de la
vitamina D y precursor de las balsas de lípidos de la membrana celular.

La sangre conduce el colesterol desde el intestino o el hígado hasta los órganos que lo
necesitan y lo hace uniéndose a partículas llamadas lipoproteínas que dan lugar a dos tipos
de colesterol: Colesterol HDL, que es una sustancia pequeña, orgánica y densa, por su alto
contenido en proteínas, que transporta el colesterol desde distintos tejidos al hígado. Entre
sus beneficios destaca la capacidad de extraer el colesterol de las placas de depósito arterial
y llevarlo de nuevo al hígado para su posterior eliminación. Colesterol LDL, que es una
molécula que transporta el colesterol a las células para utilizarlas como síntesis de
membranas. Cuando las células son incapaces de absorber todo el colesterol que circula por
la sangre, el sobrante se deposita en la pared de la arteria y contribuye a su progresivo
estrechamiento originando la ateroesclerosis. Cuando está desequilibrado en el organismo,
el colesterol se convierte en un factor de riesgo de enfermedades cardiovasculares,
aumentando la incidencia de ataques al corazón, accidentes cerebrovasculares y muerte
súbita.

Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), estas condiciones son causadas

principalmente por el bloqueo de las arterias y otros vasos sanguíneos, un resultado común
de los altos niveles de acumulación de grasa en la sangre, como el colesterol (LDL o los
triglicéridos).

Objetivo
• Determinar los niveles séricos del colesterol en sangre.
• Aprender el manejo del espectrofotómetro para la realización de parámetros
bioquímicos.

Materiales y reactivos
• Muestra de suero o plasma
• Tubo de ensayo
• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 492 nm.
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Equipamiento habitual de laboratorio.

R1 PIPES pH 6,9 90 mmol/L

Fenol 26 mmol/L
R2 Colesterol esterasa (CHE) 300 U/L
Colesterol Oxiadasa (CHOD) 300 U/L
Peroxidasa (POD) 1250 U/L
4 – Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L
CHOLESTEROL CAL Patrón primario acuoso de colesterol 200 mg/dL
Muestra: Utilizar de preferencia suero o plasma (Heparina o EDTA) libre de hemólisis. La muestra
debe tomarse con el paciente en ayunas.

Equipo: Espectrofotómetro manual o automático o fotocolorímetro de filtros con cubeta

termoestable, capaz de medir absorbancia a 505 nm (rango 500 a 530 nm), baño termorregulado,
cronómetro, pipetas, calibrador y sueros controles.

Preparación de reactivo

• Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( → ) el contenido de un vial de R 2.

• Enzimas en 1 frasco de R 1 Tampón.
 • Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
• Estabilidad (RT): 4 meses en nevera (2-8ºC) o 40 días 15-25ºC.
• Mantener protegido de la luz.

Procedimiento
• Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
• Pipetear en una cubeta:
• Mezclar e incubar 5 minutos a 37° C ó 10 min. A temperatura ambiente.
• Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color
es estable como mínimo 60 minutos.
Cálculos
(𝐴)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝑋 200 (Con. Patrón) = 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
(𝐴)𝑃𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 𝑑𝐿
Factor de conversión: mg/dL x 0,0258= mmol/L

Valores de referencia

Evaluación del riesgo:

Menos de 200 mg/dL Normal

200-239 mg/dL Moderado

240 o más Alto

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
Resultados
Discusión

Los resultados obtenidos durante la practica no fueron anormales la determinación del colesterol
se realizó mediante espectrofotometría durante la obtención de los resultados teníamos que
esperar 90 segundos para determinar el valor de la absorbancia para que nos diera el resultado
Además de que presentamos durante el desarrollo de la práctica problemas por la poca cantidad
de suero pero a pesar de ello obtuvimos resultados de 172 mg/dl que se interpreta como un
resultado bajo que se volvió a realizar para descartar algún error y volvió a arrojar el mismo
resultado y presentamos otra muestra con un resultado de 132 mg/dl lo que nos indica que
estaba muy baja a lo que podemos determinar que el ayuno de nuestros pacientes fue muy
prolongado pero obtuvimos los resultados y discutiendo los resultados se realizó la práctica
conforme a la metodología de manera satisfactoria.

Conclusión

La determinación de colesterol nos ayuda a determinar muertes por infarto al miocardio Mexico es
unos de los países con más mala alimentación por lo que está sobreexpuesto a infartos
constantemente el aprendizaje adquirido fue que aprendimos a determinar el colesterol LDL
mediante absorbancia tener un colesterol balanceado significa una mayor calidad de vida y sobre todo
una mejor expectativa de vida aprendimos que el colesterol es muy importante pero en condiciones
elevada es muy perjudicial también un colesterol muy bajo es indicativo de mala alimentación al igual
que uno muy alto.
Referencias:

• Naito H.K. Cholesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1194-11206 and 437.

• Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic

System. Clin Chem 1978; 24 (12): 2161-2165.
• Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
• Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
• Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
• Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1999.