17/11/2023 (Presentación 2)

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Propiedades de las ADN polimerasas.

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Necesidad de la existencia de un ADN molde para sintetizar posteriormente las hijas, una hebra complementaria a
esta molde. Si no hay molde, no hay síntesis ya que las polimerasas no pueden sintetizar ADN sin el molde.
Apareamientos de Watson y Crick. La síntesis siempre se produce en sentido 5´-3´y la hebra molde en 3´-5´, ya que
son antiparalelas.

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Se sintetiza un cebador de RNA que proporciona un extremo 3`OH libre necesario para comenzar la síntesis.

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Procesividad de polimerasas, es una propiedad que hace que sean capaces de mantenerse unidas al DNA molde
durante un espacio grande, por lo que no se disocia el ADN tras catalizar una reacción. Esto aumenta la velocidad
considerablemente. Las polimerasas más importantes son la I y la III. La ADN polimerasa I es capaz de introducir
entre 3 y 200 nucleótidos antes de soltarse. A una velocidad de 10-20 nucleótidos/s. Mientras la polimerasa III es
capaz de introducir más de 500.000 nucleótidos a una velocidad de más de 250-1000 nucleótidos/s. Esto se debe a
que la polimerasa III es la principal encargada de replicar el ADN en E.coli.

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Durante la síntesis de ADN hay muchas proteínas que participan. Una muy importante son las subunidades beta del
proceso de replicación. Esta subunidad beta o 2 unidades sub-beta se ensamblan y forman un anillo que es capaz de
introducir el ADN, encajarse y que se quede el ADN en su interior encajado. Aunque para que todo esto encaje
necesitamos una abrazadera o cargador de la abrazadera, para que este cargador funcione hay que gastar energía
(ATP). Una vez que la abrazadera ha incorporado el ADN en su interior, se incorpora la ADN polimerasa III y la
existencia de esta estructura es lo que hace que la polimerasa III tenga una procesividad tan alta.

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Fidelidad en polimerasas, es la capacidad de replicar el ADN sin errores o la cantidad de errores que se producen
por cada replicación, normalmente solo se introduce un error cada 10^9 o 10^10 nucleótidos. Por lo que la fidelidad
es extraordinaria. Hay 3 mecanismos que nos permiten tener un índice de errores tan bajo.

- Selección de bases: permite que en la propia polimerasa solo exista un apareamiento específico de bases,
lo que introduce un solo error por cada 10^4 bases incoporadas.
- Actividad exonucleasa 3´-5´(correctora adicional): elimina bases mal incorporadas, incrementando la
fidelidad 10^2 o 10^3 veces.
- Sistema de reparación de apareamientos erróneos adicional: actúan tras la replicación y son capaces de
arreglar los errores una vez acabada la replicación.

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Encajes de los centros activos en bases correctas/incorrectas.

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En 2 hay un cambio conformacional al detectar la base incorrecta.

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Las topoisomerasas liberan la tensión de apertura de hebra para poder sintetizar.

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Para encontrar el origen, necesitamos unos requerimientos muy específicos, como 5 secuencias de unión a unas
DNA A.
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Se quita el fragmento de ARN, se sustituye por uno igual pero de ADN. Se forma un enlace fosfodiéster entre el 3´y
el 5´, pero queda un corte o Nick entre dos fragmentos. Ese hueco lo rellena una ligasa que si es capaz de formar
enlace fosfodiéster entre dos nucleótidos.