UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

CENTRO DE BIOLOGÍA

Microscopía y
Técnicas de tinción
Santiago Sánchez, MSc
Isabel Carrillo, MSc
Microscopio Permite observar estructuras
que son poco visibles a simple
vista.
• Microscopio óptico compuesto
- permite la visión ampliada
de cortes finos, montados
como preparaciones
microscópicas, iluminadas por
transparencia
• Estereomicroscopio, permite
la visión ampliada y en relieve
de cuerpos opacos.
Luz como fuente de energía =>
microscopios de campo claro
Parámetros ópticos
• Campo óptico o de visión.- área
circular observada a través del
microscopio
• Aumento total o poder de
magnificación.- capacidad que posee
un instrumento óptico para
proyectar una imagen aumentada de
un objeto con relación a su tamaño
real
Aumento total= lente ocular x lente
objetivo
 Recorrido
de la luz

Aumento
Imagen
visualizada

ojo

Lente ocular

Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)

Lente objetivo

Muestra

Ninguno Condensador

Fuente de luz

Microscopio óptico
PARTES DEL MICROSCOPIO
 SISTEMA ÓPTICO
• Objetivos: Colectar luz y proyectar una imagen nítida,
real, invertida y aumentada hacia el cuerpo del
microscopio.
• Ocular: montados en las extremidades de un cilindro. Va introducido
en la parte superior del tubo.
• El ocular sirve para observar la imagen real e invertida que produce
el objetivo
 TIPOS DE LENTES

• Superficies convexas = positivas = convergentes = recolectoras =

aumento.
• Superficies cóncavas = negativas = divergentes = dispersión = reducida
 SISTEMA MECÁNICO
Tubo del ocular
Brazo
Revolver
Platina
Base
Tornillos: macrométrico y
micrométrico
SISTEMA DE ILUMINACIÓN
Lámpara (Fuente de luz)
Condensador
Diafragma
AJUSTES DEL MICROSCOPIO
• Coloque en la platina una
preparación fija bien
contrastada.
• Gradúe la luminosidad de la
imagen con el regulador de
intensidad
• regular el diafragma de
apertura
• enfocar la preparación
usando el macrométrico y el
micrométrico.
• Gradúe la nitidez de la imagen
para el otro ojo con el ocular
enfocable.
AJUSTES DE LA DISTANCIA INTERPUPILAR
• Cada persona debe realizar este ajuste
alejando o juntando los oculares de tal
manera que al estar observando a través
de ellos se vean los dos círculos
superpuestos de tal manera que solo se
distinga uno solo.
MANEJO DEL MICROSCOPIO
Transporte
• utilizando las dos manos a la vez, una mano se sujeta
por el brazo y con la otra mano se sujeta por la parte
inferior
Lugar de uso
• superficie de uso debe ser firme, plana, estar limpia y
sin otros objetos cercanos
• tomacorriente a distancia adecuada.
Uso del microscopio
• no debe ser movido de su lugar
• Intensidad de la luz debe ser regulada
• Evitar colocar materiales con colorante, solvente,
reactivo, agua
• SIMPLES: Son aquellas que utilizan un solo colorante y tienen como objetivo permitir la observación
morfológica bacteriana.
• DIFERENCIALES: Utilizan más de un colorante y sirven para poner de manifiesto algún carácter propio del
microorganismo.
• ESTRUCTURALES: Utilizan varios colorantes y sirven para poner de manifiesto distintas estructuras
bacterianas
TÉCNICAS PARA REALIZAR UNA PREPARACIÓN
COLOREADA
1. Frotis o película (extensión)

2. La fijación

3. Coloración.
Frotis / película de fijación
TINCIÓN GRAM
Tinción Gram

Las diferencias
estructurales entre las
paredes celulares de
Bacteria grampositivas y
gramnegativas son las
responsables del diferente
comportamiento de las
células en la tinción de
Gram.

N-acetilglucosamina
PEPTIDOGLICANO y ácido N-acetilmurámico
 En dicha tinción, se forma dentro de las células un complejo
insoluble cristal violeta- yodo que en el caso de las gramnegativas
TINCIÓN DE GRAM
puede extraerse con alcohol, pero no en las grampositivas

En las gramnegativas el alcohol penetra rápidamente
en la capa externa que es rica en lípidos y la fina capa
de peptidoglicano no impide el paso del solvente y la
extracción del complejo.
Las bacterias grampositivas tienen paredes celulares muy gruesas
compuestas por varias capas de peptidoglicano estas se
deshidratan por el alcohol, provocando el cierre de los poros de
las paredes e impidiendo la salida del complejo cristal violeta-
yodo.
Que vamos a ver? MORFOLOGÍA CELULAR
Tinción de células para observación
 COLORACIÓN DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER (Tinción de corpúsculos
metacromáticos )

1.- Hacer un frotis con Yogurt/

desengrasar con metanol 2.- Cubrir la preparación con Azul de 3.- Lavar con agua, dejar secar y
Metileno 5’ observar al microscopio

Corpúsculos metacromáticos
Tinción negativa

• Colocar safranina como colorante de contraste por

1min
• Lavar con agua destilada
• Fijar al calor y observar
 Tinción de ácido-alcohol-resistente.

Frotis y fijación
1.-Poner una gota de agua en un porta 2.- Tomar la muestra de un cultivo 3.-Extender sobre el agua y fijar a la llama
del mechero

Tinción
2. Calentar con un hisopo de algodón
empapado en alcohol y prendido con la llama
1. Cubrir la preparación
del mechero hasta la emisión de vapores. 3. Lavar con agua y decolorar
con Fuchina fenicada
Mantener durante 5 minutos. con alcohol ácido

5.-Lavar con agua,

dejar secar y
4.-Teñir con Azul
observar al
de Metileno 1’
microscopio
BACTERIAS ÁCIDO RESISTENTE

Los microorganismos
ácido - resistentes se
caracterizan por tener
una pared celular gruesa
de cera (lipoidal) que
contiene ácido micólico.
 La tinción de flagelos de
Leifson
1.Se fija químicamente la suspensión bacteriana,
mediante formol, y se hace la extensión en un
portaobjetos.

2.Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.

3.Se cubre la preparación con el colorante

Leifson 3 min.

4.Se retira el exceso de colorante con agua.

5. Por último, se deja secar al aire, antes de su

observación al microscopio.

Mobiluncus spp.