MICROSCOPIOS Y

TINCIONES
GRUPO 02
Silvia Jerahmel Eche
Jhackeline Herrada Valdiviezo
Ener Mantilla Horna
Kiara Monzón Pardo
 La microscopía

conjunto de técnicas y métodos

destinados a hacer visible los objetos
de estudio que por su pequeño tamaño
están fuera del rango de resolución del
ojo humano.
 TIPOS DE MICROSCOPIOS

ÓPTICO ELECTRÓNICO DIGITAL

no usa la luz visible, sino que

basado en lentes utiliza una cámara digital
utiliza electrones, que dan
ópticas. También en lugar de un ocular.
se le conoce lugar a una imagen digital.
Los microscopios
como microscopio digitales se conectan a
de luz o un monitor de PC para
microscopio de
la muestra debe prepararse y mostrar los resultados en
campo claro
observarse en una cámara de tiempo real.
vacío, lo que impide la
observación de muestras vivas
en él.
 microscopio óptico

Microscopía óptica simple consta de una única lente

área observada está posibilidad de cambiar de lente y

ampliamente iluminada.
compuesto
con ello el grado de aumento.

El límite útil de este proporciona poca capacidad de

aumento es de 2000 aumento, pero dispone de dos
estereoscópico
mecanismos de magnificación
independientes, uno para cada ojo.

usa un dispositivo propio, el

confocal,
llamado pinhole.

Trabaja emitiendo ondas lumínicas

de fluorescencia.
fosforescentes y fluorescentes
PARTES DE UN MICROSCOPIO
FUNCIONES
Objetivo: lente situada en el
Ocular: lente situada cerca
revólver. Amplía la imagen,
SISTEMA del ojo del observador.
es un elemento vital que
ÓPTICO Capta y amplía la imagen
permite ver a través de los
formada en los objetivos.
oculares.

SISTEMA DE
ILUMINACIÓN

Condensador: lente que Diafragma: regula la Foco: dirige los rayos

concentra los rayos cantidad de luz que llega al luminosos hacia el
luminosos sobre la condensador. condensador
preparación.
 SISTEMA
Revólver: Es el sistema que porta
los objetivos de diferentes MECÁNICO Platina: Es una plataforma horizontal
aumentos, y que rota para poder con un orificio central, sobre el que se
utilizar uno u otro, alineándose con coloca la preparación.
el ocular

Brazo: Es la estructura que Base o pie: Es la parte inferior del

sujeta el tubo, la platina y los microscopio que permite que este
tornillos de enfoque . se mantenga de pie.

Tornillos macro y micrométrico

El macrométrico, permite
desplazamientos amplios para un
enfoque inicial y el micrométrico,
desplazamientos muy cortos, para el
enfoque más preciso
 AUMENTO DEL MICROSCOPIO

Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular

objetivos objetivos de
secos inmersión

● 4x
● 100x
● 10x
● 40x
Para enfocar debemos:

1. Poner la muestra en la platina.

2. Ajustar la distancia interpupilar (separación entre
ambos oculares);
3. Seleccionar el objetivo de mínimo aumento,
4. Con el tornillo macrométrico ajustamos la altura de
la pletina hasta que la muestra esté enfocada.
5. Usamos el tornillo micrométrico para un ajuste fino.
A partir de ahora, cuando cambiamos de objetivo,
casi siempre con un ajuste micrométrico será
suficiente.
 TIPO DE OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

1. Observación en fresco

Son preferibles en las situaciones siguientes:

❏ La morfología de las bacterias se altera cuando se desecan y tiñen.
❏ Cuando las bacterias se observan para determinar movilidad
❏ Para observar los cambios citológicos que ocurren durante la división celular
❏ Por este método se observan fácilmente algunas inclusiones celulares como vacuolas y
materias grasa.

2. Observación con tinciones

● Bacterias: Leptospiras, treponemas
● Parásitos : Trofozoitos, larvas.
● Hongos: Levaduras
❏ Para observar las características morfológicas de
las bacterias
❏ Identificación y diferenciación de microbios entre
especie y dentro de la misma especie (tinción
diferencial o selectiva).
APLICACIÓN DE MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD

● Se inicia con el lavado de manos antes de tocar cualquier

material de laboratorio microbiológico.
● El uso de los métodos de barrera : colocación de mandiles,
guantes estériles o limpios, lentes, botas, etc. Para estar
protegidos durante el trabajo de laboratorio.
● Al término del trabajo se realiza el retiro y la eliminación de
guantes y vestimenta contaminada.
● Nuevamente lavado de manos
 TINCIÓN
● Técnica auxiliar
● Mejorar el contraste
● Para cada tipo de microorganismo, se emplea un
tipo de tinción
● Colorantes más usado son sales

COLORANTES BÁSICOS COLORANTES ÁCIDOS

● cationes teñidos con un anión incoloro ● Catión incoloro con un anión coloreado
● Tienen apetencia por sustancias ácidas
● Ejm: cloruro–, de azul de metileno+ ● Tienen apetencia por sustancias básicaS
● Ejm: eosinato– de sodio+
TINCIÓN La técnica de coloración Gram se basa en las diferencias de
bacterias gram positivas y gram negativas entre sus paredes
DE GRAM
Por último se aplica otro colorante safranina de
forma que las células gramnegativas
decoloradas adquieran un color contrastante
Se inicia este procedimiento con la aplicación
de un colorante básico, violeta de genciana

En la tinción las Gram positivas se observan

Luego se aplica una solución de yodo; todas color azul violeta y las negativas de color rosa
las bacterias se tiñen de color azul

Después la célula se trata con alcohol y

cetona (decloración)
TINCIÓN
ACIDORRESISTENTE

Tienen la característica que las bacterias conservan la

carbolfucsina (tiroxina básica disuelta en una mezcla de
agua-alcohol-fenol)

Las bacterias acidorresistentes (micobacterias y algunos

actinomicetos relacionados) adquieren un color rojizo en tanto
que otras células adquieren el color del segundo colorante.

Procedimiento: Un frotis de células sobre una laminilla se

cubre con carbolfucsina y se calienta en baño María. A
continuación se lleva a cabo la decoloración con la mezcla de
ácido-alcohol y por último se aplica una tinción de contraste
(azul o verde)
 TINCIÓN Consiste en la atención del entorno con
un colorante ácido, dejando a las células
El colorante que más se utiliza es
el negro de nigrosina (tinta negra)
NEGATIVA incoloras

TINCIÓN DE Los flagelos son muy delgados (12 a 30 nm) para observarse en un
microscopio de luz
FLAGELOS

Para visualizar estas células se logra mediante una suspensión

coloidal inestable de sales de ácido tánico,causando precipitación
intensa sobre las paredes celulares

De esta forma el diámetro aumenta de tamaño aparentemente

tanto que permite hacerse visible los flagelos con las tinciones
siguientes con fuscina básica
Tinción de la cápsula
● La presencia de cápsula se
demuestra por Tinción negativa
o modificaciones en ella.
Método de Welch
● Violeta de genciana caliente
seguida de sulfato de cobre
● eliminar el exceso de colorante
porque las técnicas
convencionales de lavado con
agua causarían la disolución de
la cápsula.
● la célula y el fondo adquieren un
color azul oscuro.
● la cápsula tiene un color azul
mucho más pálido.
Tinción de nucleótidos
● Se tiñen con la tinción de Feulgen
● identificar material cromosómico o ADN en
células
Tinción de esporas
● Tiñe selectivamente
las endosporas
● Se cubre la
preparación con
verde de malaquita y
se calienta a emisión
de vapores durante
60 segundos.
● Se lava con agua durante 30 segundos y se tiñe con
safranina.
● Las endosporas retienen el color verde; el resto de la
célula toma el color rosa.