Informe TINCION GRAM

UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRIÓN
FACULTAD DE INGENIERÍA
PROGRAMA DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA AMBIENTAL
- FILIAL OXAPAMPA
INFORME DE LABOTATORIO
PRACTICA Nº 03: “Técnicas de tinción simple y Gram”
Integrantes:
ARRIETA QUISPE, Xionmy Mishely
CASTRO CUCHO, Fiorella
ORIZANO MESIAS, Dayana Scolly
ORTIZ BERROSPI, Sheila Leticia
VEGA PAREDES, Deysi Isabel
Docente:
Blgo.Victor Stive Flores Gómez
Curso:
Biotecnología ambiental
Semestre:
X
Oxapampa, setiembre del 2023
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Universidad Nacional Daniel Alcides
Carrión Facultad de Ingeniería
Programa de Estudios de Ingeniería
INDICE
I. RESUMEN.................................................................................................................3
II. OBJETIVOS..............................................................................................................4
2.1. Objetivo General.................................................................................................4
2.2. Objetivo especifico.............................................................................................4
III. FUNDAMENTO TEÓRICO..................................................................................5
3.1. Tinción Gram......................................................................................................5
3.2. Tipos de tinciones bacterianas............................................................................5
3.2.1. Tinción simple.............................................................................................5
3.2.2. Tinción negativa..........................................................................................6
3.2.3. Tinciones diferenciales................................................................................6
IV. FUNDAMENTO PRÁCTICO..................................................................................7
4.1. Materiales e instrumentos...................................................................................7
4.2. Procedimiento experimental...............................................................................7
4.2.1. Procedimiento experimental epidermis cebolla...........................................8
4.2.2. Procedimiento experimental de la técnica de tinción de Gram.................11
V. ANÁLISIS O DISCUSIÓN DE RESULTADOS...................................................16
VI. CONCLUSIÓN.......................................................................................................17
VII. BIBLIOGRAFÍA..................................................................................................18
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I. RESUMEN
La tinción de Gram es una prueba de laboratorio el cual consiste en la detección de
bacterias de una determinada muestra. Este método también se utiliza para
detectar bacterias en la sangre o la orina.
Ya conociendo ello el siguiente informe va enfocado a la realización del método de
tinción de Gram para conocer el procedimiento y el resultado que obtenemos.
Asimismo, también se realizó una tinción simple y la comparamos.
En la tinción simple observamos las paredes celulares de una catafilo de cebolla y luego
lo observamos en el microscopio óptico.
En la tinción de Gram utilizamos una muestra de suelo y se colocó sobre una porta
objeto para realizar el procedimiento de Gram el cual se detallará en el informe. Luego
al igual que la primera muestra, se observó por el microscopio las bacterias presentes
en la muestra de suelo.
El informe presenta análisis teórico que fue recopilado de fuentes confiables y citadas
respectivamente. También se realiza el fundamento práctico el cual esta detallado y
evidenciado con fotografías.
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II. OBJETIVOS
2.1. Objetivo General
 Observar las diferentes tinciones, tanto la tinción simple y la tinción de Gram.
2.2. Objetivo especifico
 Aprender a realizar una tinción simple.
 Aprender a realizar la tinción de Gram.
 Observar la muestra de tinción simple por el microscopio y analizarla.
 Observar la muestra de tinción Gram por el microscopio y analizarla.
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III. FUNDAMENTO TEÓRICO
3.1. Tinción Gram
Esta tinción es un procedimiento muy útil utilizado en laboratorios donde pruebas
microbiológicas. Se define como tinte diferencia porque utiliza y clasifica a las bacterias
en dos grupos principales: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
(Jácome, y otros, 2014)
Las que conservan la coloración azul violeta se llaman bacterias gram positivas, y las
que decoloran y luego se tiñen con safranina se llaman bacterias gram negativas.
Esta diferencia de coloración se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos
tipos de bacterias. Las bacterias gram positivas tienen una pared gruesa e impermeable
de peptidoglicanos y polímeros que las hace resistentes a las manchas. Por el contrario,
las bacterias gram negativas tienen una fina capa de peptidoglicano y una bicapa de
lipoproteínas que puede degradarse mediante blanqueamiento.
(Rodríguez & Arenas, 2018)
3.2. Tipos de tinciones bacterianas
3.2.1. Tinción simple
Se aplica un único tinte a la muestra. Esto debe hacerse después de la fijación para
permitir la visualización de la morfología bacteriana. Uno de los tintes más adecuados
es el azul de metileno, que actúa rápida y suavemente sobre todas las células bacterianas
y no oscurece los detalles de las células. Además, es particularmente útil para detectar la
presencia de bacterias en muestras naturales porque la mayor parte del material no
celular no está teñido. (Revista Sanitaria de Investigación, 2021)
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3.2.2. Tinción negativa
Este es un tipo de tinción simple, pero con algunas diferencias, ya que permite observar
no solo la morfología, sino también las características estructurales de las bacterias, no
requiere fijación preliminar y permite visualizar no solo la forma de la bacterias, sino
también otra forma sobre un fondo oscuro, una característica estructural, como la
presencia de cápsulas.
(Revista Sanitaria de Investigación, 2021)
3.2.3. Tinciones diferenciales
Será necesaria una fijación previa, generalmente con calor, y también se utilizarán dos
tintes, siendo este último un tinte de contraste. Una de sus características más
importantes es que además de visualizar la morfología, también nos permite observar la
composición de la pared bacteriana, su resistencia a la decoloración ácida, etc.; como
ocurre en la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen.
(Revista Sanitaria de Investigación, 2021)
Ilustración 1: Esquema de las diferencias estructurales entre bacterias Gram negativas y Gram positivas.
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IV. FUNDAMENTO PRÁCTICO
4.1. Materiales e instrumentos
• Cebolla • Portaobjetos
• Cubreobjetos • Pinza
• Cutter • Cubreobjetos de microscopio
• Microscopio • Cuentagotas
• Azul de metileno • Agua
• Tierra • Asa de colle
• Lugol • Safranina
• Enstel violeta • Vasito para el desperdicio
4.2. Procedimiento experimental
En primera instancia, se siguió las reglas antes del ingreso al laboratorio, como el
colocarse el guardapolvo, recogerse el cabello, no traer consigo ningún alimento,
evitar el uso de anillos y percatarse de no llevar prendas escotadas, pantalones
cortos, y zapatos calados.
La práctica del laboratorio consistió en ver la epidermis de la cebolla y realizar la
técnica de tinción de Gram. A continuación, se describirá el procedimiento de ello:
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4.2.1. Procedimiento experimental epidermis cebolla
Paso 1. Sacamos medio centímetro de catáfila de la cebolla, utilizamos unas pinzas
para separar la membrana que se pega a la parte inferior cebolla de una de sus capas.
Paso 2. Luego llevamos al portaobjetos para humedecerla con un poco de agua
destilada y evitamos que se seque.
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Paso 3. Añadimos unas gotas de azul de metileno en el portaobjetos, junto con la
muestra de cebolla previamente escurrida.
Paso 4. Dejamos reposar por 2 minutos para que la muestra absorba el tinte, luego
enjuagar con un poco de agua destilada para eliminar el exceso de tinte.
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Paso 5. Dejamos por unos segundos para que se seque la muestra. En seguida
colocamos al portaobjetos en la platina del microscopio a baja potencia para
observar. Ajustamos el enfoque para mayor claridad al observar.
A continuación, la visualización de bacterias en distintas ampliaciones
Página 10 de
4.2.2. Procedimiento experimental de la técnica de tinción de Gram
Paso 1. En primer lugar, para realizar una tinción, lo que debemos tener es
la muestra. Luego cogemos el asa de colle para sacar un poco de tierra.
Paso 2. Hacemos el frotis de manera regula
Página 11 de
Paso 3. Cubrimos el portaobjetos con la con cristal violeta durante 1 minuto, y
déjelo durante 1 min.
Paso 4. Luego lavamos ligeramente con agua.
Página 12 de
Paso 5. En seguida vertemos unas gotas de Lugol durante 1 minuto.
Paso 6. Lavamos con agua la muestra.
Paso 7. Mechamos alcohol-acetona a la muestra.
Página 13 de
Paso 9. Cubrimos con safranina durante 30 segundos.
Página 14 de
Paso 11. Dejamos secar por unos minutos la muestra. En seguida observamos al
microscopio.
Página 15 de
V. ANÁLISIS O DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Una tinción simple es un procedimiento de tinción básica utilizada en la microscopía
para resaltar la morfología y la estructura general de las células y tejidos presentes en
una muestra; este proceso de tinción utiliza un único tinte para teñir las células, lo que
los hace más fáciles de identificar bajo el microscopio; dentro de las tinciones simples
más empleadas son el violeta cristal, el azul de metileno y la fucsina básica. Por otro
lado, la tinción de Gram también es un método sencillo basado en el uso de colorantes
para observar mejor las bacterias bajo el microscopio, además esta tinción diferencia
a las bacterias en dos grandes grupos, las Gram positivas y Gram negativas.
En ese sentido, la práctica de laboratorio consistió en la utilización de ambas técnicas,
en cuanto a la simple fue para observar el tejido vegetal de la cebolla, visualizándose
de esta manera celdas alargadas organizadas en forma lineal, mientras que la técnica
Gram se utilizó para ver las bacterias presentes en el suelo.
En resumen, gracias a estas dos técnicas es posible hacer visible las estructuras internas
y externas de objetos microscópicos y transparentes, de tal manera que posterior a ello
se pueda utilizar para el diagnóstico de enfermedades.
Página 16 de
VI. CONCLUSIÓN
• Se concluye que el grupo de trabajo logró observar cada una de las muestras a
través de la técnica de tinción simple (tejido vegetal de cebolla) y tinción Gram
(microorganismos presentes en el suelo). Se utilizó el microscopio óptico para
observar en diferentes tamaños y así poder identificar con precisión los
microorganismos presentes en las muestras.
• Ambas tinciones son fundamentales para el diagnóstico microbiológico y
juegan un papel importante en la toma de decisiones para el tratamiento de
enfermedades infecciosas.
Página 17 de
VII. BIBLIOGRAFÍA
Jácome, L. E., Durán, M. H., Castro, C. A., Peña, S. O., González, G. C., & Cendejas,
R. F. (Marzo de 2014). Las tinciones básicas en el laboratorio. Obtenido de
https://www.medigraphic.com/cgi-bin/new/resumen.cgi?IDARTICULO=48632
Revista Sanitaria de Investigación. (11 de Setiembre de 2021). Obtenido de
https://revistasanitariadeinvestigacion.com/examen-microscopico-tipos-de-
tinciones-bacterianas/
Rodríguez, P., & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Dermatología
Cosmética, Médica y Quirúrgica Vol 16/ Número 2, 166.
Página 18 de

Informe TINCION GRAM

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UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRIÓN

PRACTICA Nº 03: “Técnicas de tinción simple y Gram”

Oxapampa, setiembre del 2023

2.1. Objetivo General.................................................................................................4

2.2. Objetivo especifico.............................................................................................4

III. FUNDAMENTO TEÓRICO..................................................................................5

3.1. Tinción Gram......................................................................................................5

3.2. Tipos de tinciones bacterianas............................................................................5

3.2.1. Tinción simple.............................................................................................5

3.2.2. Tinción negativa..........................................................................................6

3.2.3. Tinciones diferenciales................................................................................6

IV. FUNDAMENTO PRÁCTICO..................................................................................7

4.1. Materiales e instrumentos...................................................................................7

4.2. Procedimiento experimental...............................................................................7

4.2.1. Procedimiento experimental epidermis cebolla...........................................8

4.2.2. Procedimiento experimental de la técnica de tinción de Gram.................11

V. ANÁLISIS O DISCUSIÓN DE RESULTADOS...................................................16

La tinción de Gram es una prueba de laboratorio el cual consiste en la detección de

bacterias de una determinada muestra. Este método también se utiliza para

detectar bacterias en la sangre o la orina.

Ya conociendo ello el siguiente informe va enfocado a la realización del método de

tinción de Gram para conocer el procedimiento y el resultado que obtenemos.

Asimismo, también se realizó una tinción simple y la comparamos.

lo observamos en el microscopio óptico.

objeto para realizar el procedimiento de Gram el cual se detallará en el informe. Luego

respectivamente. También se realiza el fundamento práctico el cual esta detallado y

evidenciado con fotografías.

2.1. Objetivo General

 Observar las diferentes tinciones, tanto la tinción simple y la tinción de Gram.

2.2. Objetivo especifico

 Aprender a realizar una tinción simple.

 Aprender a realizar la tinción de Gram.

 Observar la muestra de tinción simple por el microscopio y analizarla.

 Observar la muestra de tinción Gram por el microscopio y analizarla.

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

3.1. Tinción Gram

Esta tinción es un procedimiento muy útil utilizado en laboratorios donde pruebas

en dos grupos principales: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.

(Jácome, y otros, 2014)

Esta diferencia de coloración se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos

lipoproteínas que puede degradarse mediante blanqueamiento.

(Rodríguez & Arenas, 2018)

3.2. Tipos de tinciones bacterianas

3.2.1. Tinción simple

permitir la visualización de la morfología bacteriana. Uno de los tintes más adecuados

presencia de bacterias en muestras naturales porque la mayor parte del material no

celular no está teñido. (Revista Sanitaria de Investigación, 2021)

3.2.2. Tinción negativa

no solo la morfología, sino también las características estructurales de las bacterias, no

requiere fijación preliminar y permite visualizar no solo la forma de la bacterias, sino

(Revista Sanitaria de Investigación, 2021)

3.2.3. Tinciones diferenciales

importantes es que además de visualizar la morfología, también nos permite observar la

composición de la pared bacteriana, su resistencia a la decoloración ácida, etc.; como

ocurre en la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen.

(Revista Sanitaria de Investigación, 2021)

IV. FUNDAMENTO PRÁCTICO

4.1. Materiales e instrumentos

• Cutter • Cubreobjetos de microscopio

• Azul de metileno • Agua

• Tierra • Asa de colle

• Enstel violeta • Vasito para el desperdicio

4.2. Procedimiento experimental