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OBSERVACIÓN MICROSCOPICA DE HONGOS Y BACTERIAS

INFORME # 4 DE BIOLOGIA GENERAL

DANIEL ARTURO RAMOS BARBOZA

ALEJANDRA SÁNCHEZ TORRES

JAJAIRA SÁNCHEZ TORRES

BRANDON SLEEN VALDELAMAR LAZARO

JORGE ANDRÉS YANES CONTRERAS

YOJANA PATRICIA MANGONES JIMENEZ

FECHA 29/09/2020

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA
MONTERIA
2020
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TABLA DE CONTENIDO

1- Introducción-----------------------------------------------------------------------------------3
2- Objetivos---------------------------------------------------------------------------------------4
3- Marco teórico---------------------------------------------------------------------------------5
4- Materiales y reactivos----------------------------------------------------------------------7
5- Procedimiento--------------------------------------------------------------------------------8
5.1 Procedimiento 1 (frotis bacteriano) ------------------------------------------------8
5.2 Procedimiento 2 (Tinción de Gram) -----------------------------------------------9
5.3Procedimiento 3 (técnica del celo (cinta adhesiva)) -------------------------9
5.4Procedimiento 4 (Tinción de hongos) -----------------------------------------10
6- Observaciones---------------------------------------------------------------------------11
6.1Procedimiento 1 y Procedimiento 2---------------------------------------------11
6.2Procedimiento 3----------------------------------------------------------------------
11
6.3Procedimiento 4----------------------------------------------------------------------
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7- Análisis-------------------------------------------------------------------------------------13
7.1 Procedimiento 1 y procedimiento 2------------------------------------------13
7.2 Procedimiento 3---------------------------------------------------------------------15
7.3Procedimiento 4---------------------------------------------------------------------15
8- Conclusión--------------------------------------------------------------------------------17
9- Cuestionario de bacterias-------------------------------------------------------------18
10-Preguntas complementarias----------------------------------------------------------24
11-Referencias-------------------------------------------------------------------------------26
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PRACTICA #4 OBSERVACIÓN MICROSCOPICA DE HONGOS Y BACTERIAS

1. INTRODUCCION
Los hongos y bacterias son organismos con gran variedad, y se pueden
encontrar en casi todos los lugares y sitios del mundo incluso en el
cuerpo humano, por lo general no suelen ser organismos que
comprometan la salud humana en caso de los hongos, por su parte las
bacterias son las mayores responsables de las infecciones que pueden
presentarse en el cuerpo humano, pero suelen ser pasajeras, por su
parte los hongos tienen una mayor variedad vegetal que animal.
Estos dos tipos de organismos por lo general ocasionan enfermedades
en nuestro provocando alteraciones de parámetros tales como en el
caso de una infección vaginal el PH, cosa que por lo general es mas de
origen bacteriano que por hongos, pero algunas beses los hongos
también pueden provocar infecciones en el cuerpo, como por ejemplo
una infección pulmonar provocado por el hongo aspergillus, o una más
conocida, como lo es la onicomicosis provocada por el grupo de hongos
dermatofitos, como lo son Trichophyton rubrum y Trichophyton
mentagrophytes.
Desde hace siglos los científicos se han desempeñado por su insistente
búsqueda de todo tipo de vida entre estos las bacterias y los hongos,
por esa razón desarrollaron distintos tipos de métodos para exponer la
existencia de estos microorganismos, cabe resaltar que en el reino de
los hongos también existen los microscópicos, en medio de su búsqueda
desarrollaron métodos que son utilizados hoy en día tales como la
tinción de Gram y la tinción de azul de lacto fenol o técnica de tinción de
celo.
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2. OBJETIVOS
2.1 Conocer procesos de preparación en fresco y en cinta adhesiva de
distintas especies de hongos.
2.2 Observar la morfología de los hongos y distinguir las diferentes
estructuras que presenta.
2.3 Implementar algunas técnicas de tinción para observar las diferentes
morfologías bacterianas.
2.4 Comprender y explicar la vitalidad de los colorantes en la identificación
de estructuras celulares.
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3. MARCO TEORICO
Las tinciones o procesos de coloración de láminas portan objetos son
utilizados en el laboratorio para poder apreciar las morfologías
microscópicas de bacterias y hongos, además de otros organismos,
están son de gran utilidad ya que algunas son diferenciales y ayudan al
bacteriólogo a dar un sobre el tipo de bacteria y el tratamiento que el
médico le debe indicar a seguir al paciente, además de eso las tinciones
sirven para la identificación de organismos patógenos.
La tinción de Gram es una de las técnicas de tinción más utilizadas para
colorear laminas, en las cuales se puede apreciar de una mejor forma la
morfología de las bacterias, además de darles un color característico de
Cristal violeta (colorante básico), la tinción de Gram es utilizada debido a
que las bacterias no suelen tener color ya que tienen un índice de
refracción igual al del agua, al colorear la lámina este índice de
refracción se be opacado ya que la tinción colorea la pared celular.
La tinción de Gram fue descrita por primera vez por el patólogo danés
Christian Gram en 1884 y luego ligeramente modificada, la tinción de
gran divide fácilmente las bacterias en dos grupos, Gram-positivas y
Gran-negativas, sobre la base de su pared celular y la permeabilidad de
la membrana celular, el mecanismo aplica a demás que la decoloración
del disolvente causan un daño significativo a las superficies celulares de
las bacterias Gram negativas y solo un daño limitado a las bacterias
Gram positivas, lo cual sugiere que las bacterias Gram-negativas tienen
más “fugas”. Lo cual hace que estas células ricas en lípidos de paredes
delgadas pierdan su tinte cristal violeta y se vean rojas por la
contratación. Las células Gram positivas, de paredes gruesas y pobres
en lípidos, se ven azules al conservar el cristal violeta original.
La tinción de azul de lacto fenol o técnica de tinción de celo es empleada
para observar hongos, es una tinción simple (utiliza un solo colorante) y
está basada en la afinidad del colorante por componentes de las células.
En este caso por las estructuras fúngicas.
El azul de lacto fenol posee tres características que lo hacen especial
para observar dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos
por cultivos en aislamiento:
 El fenol destruye la flora acompañante (en ocasiones, en los cultivos
juntamente con los hongos pueden crecer colonias de bacterias.
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 El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al formar una

película las protege, provocando un cambio degradante osmótico
entre el interior y el exterior de dicha estructura.
 El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas y
conidios de los hongos microscópicos.

Es de vital importancia en la carrera de bacteriología el uso de estas

tinciones debido a que estas se prestan para la identificación de
microorganismos patógenos en cultivos, y son pruebas de rápido
análisis en las cuales se puede detectar un gran número de patologías
causadas por bacterias y hongos.
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4. MATERIALES Y REACTIVOS
 Azul de lacto fenol
 Cinta esterilizada
 Porta objetos
 Cubre objetos
 Microscopio
 Micelio fúngico
 Tijeras
 Beaker
 Asa de siembra
 Mechero bunsen
 Cultivo bacteriano
 Solución salina
 Pinzas de madera
 Pipeta Pasteur
 Cristal violeta
 Lugol
 Alcohol- acetona
 Agua destilada
 Safranina
 Aceite de inmersión
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5. PROCEDIMIENTOS
5.1 Procedimiento 1 (Frotis bacteriano)
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5.2 Procedimiento 2 (Tinción de Gram)

5.3 Procedimiento 3 (técnica del celo (cinta adhesiva))

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5.4 Procedimiento 4 (Tinción de hongos)

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6. O BSERVACIONES
6.1 Procedimiento 1 (Frotis bacteriano) y Procedimiento 2 (Tinción de
Gram
 Se pudo apreciar, la utilización de diferentes soluciones.

 Al observar la placa en el microscopio con el objetivo de 100x,

se nota la aparición de bacterias teñidas, bien sea de violeta o
rosa, esto dependiendo del tipo de bacterias.
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6.2 Procedimiento 3 (técnica del celo (cinta adhesiva))

 Al poner la cinta sobre el cultivo fúngico observamos como los
hongos se adhieren a esta.
 Al observar la placa en el microscopio con el objetivo de 40x,
podemos ver estructuras fúngicas tales como:

Hifas Esporas Hifas vegetativas

reproductivas

6.3 Procedimiento 4 (Tinción de hongos)

Al llevar al microscopio podemos observar aparecen los conidióforos y
los conidios en los Aspergillus sp, también observamos la vesícula y las
hifas en el Aspergillus, todo esto lo observamos gracias a la tinción con
Azul de lactofenol.
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7. ANÁLISIS
7.1 Procedimiento 1 (Frotis bacteriano) y Procedimiento 2 (Tinción de
Gram
 Al aplicarse el cristal violeta, todas las bacterias sobre la placa
adquieren el color del colorante primario, esto se da debido a
que este, penetra y tiene afinidad a los peptidoglucanos de la
pared bacteriana.

 La aplicación del Lugol cumple el papel del mordiente, es decir

que fija el color, por lo tanto, impide la salida del cristal violeta
debido a la formación del complejo cristal violeta-yodo, lo que
incurrirá a que el colorante primario se fije con mayor intensidad
a la pared de las células bacterianas.
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 la mezcla alcohol-acetona, funciona como decolorante, ya que

en esta es soluble el complejo yodo-cristal violeta. Por
consiguiente, los organismos Gram positivos no se decoloran,
mientras que los Gram negativos si lo hacen. Cabe destacar
que las bacterias Gram positivas, al contener una mayor cantidad
de peptidoglucano en comparación a las bacterias Gram
negativas, retiene con mayor fuerza el complejo (yodo-cristal
violeta antes mencionado).

 La safranina es un colorante secundario o de contra tinción el

cual se encarga de teñir las bacterias que no pudieron retener el
complejo cristal violeta-yodo. Esto nos indica que las bacterias
Gram positivas mantiene en un color violeta mientras que las
Gram negativas adquieren un color rosa o fucsia.

 Con base en lo anterior se obtendrán los siguientes resultados.

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Cocos Gram Bacilos Gram

Positivas negativos

Fijación

Cristal violeta

Lugol

Alcohol
acetona

Safranina

7.2Procedimiento 3 (técnica del celo (cinta adhesiva))

 La tinción de Azul lacto fenol, es una tinción simple (un sólo
colorante) y como tal está basada en la afinidad del colorante por
componentes de las células, en este caso por las estructuras
fúngicas.

 El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por

decirlo así, una cutícula que las protege provocado por un
cambio de desnivel osmótico entre el interior y el exterior de
dicha estructura.
 El azul lacto fenol tiene la capacidad de adherirse a las hifas y
conidios de los hongos microscópicos.
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7.3 Procedimiento 4 (Tinción de Hongos)

La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos.
Es una tinción simple (un sólo colorante) y como tal está basada en
la afinidad del colorante por componentes de las células, en este
caso por las estructuras fúngicas.
El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial
para observar dichas estructuras en los hongos del tipo moho
obtenidos en los cultivos por aislamiento.
 El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los
cultivos, juntos a los hongos pueden crecer colonias de
bacterias).
 El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por
decirlo de algún modo, una película que las protege
provocado por un cambio de gradiente osmótico entre el
interior y el exterior de dicha estructura.
 El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas
y conidios de los hongos microscópicos.
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8. CONCLUSIÓN
Es muy importante en la actualidad que un bacteriano obtengas las
competencias necesarias para la coloración de láminas portaobjetos
para la identificación de bacterias y hongos en distintos campos de la
materia como tal, en otros términos, un bacteriólogo debe tener la
competencia de identificar y clasificar por medios de tinción, las
bacterias y los hongos, con el fin de la identificación de microorganismos
patógenos que pueden comprometer la salud del paciente a tratar.
Además de eso es de vital importancia en el campo de la investigación,
ya que son técnicas básicas y muy importantes para los trabajos a
realizar en un laboratorio a la hora de identificar ciertos organismos
presentes en caldos de cultivo o cultivos en medios sólidos, a la hora de
observarlos con el microscopio.
Gracias a estas técnicas de tinción hoy día podemos observar una gran
diferenciación entre ciertos tipos de bacterias, como lo son las Gram
positivas y las Gramnegativos y en los hongos poder tener una mejor
distinción de su morfología y la identificación de patógenos.
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9. PREGUNTAS DE BACTERIAS
9.1 Describa las características más importantes de las bacterias,
realizar esquemas de las formas que presentan y los tipos de
agrupaciones que presentan.
Las Bacterias, son las células unicelulares vivas más pequeñas de 0,2 a
2 µm de diámetro y de 1 a 10 µm de longitud de vital importancia y
útiles para la humanidad. Solamente el 1% de ellas producen
enfermedades, las cuales son cada vez más difíciles de combatir por el
abuso indiscriminado de antibióticos; al no tener un núcleo, son
microorganismos procariotas además de que su núcleo este esparcido
en el citoplasma y tampoco tienen organelos en este. Su membrana es
una pared constituida por el compuesto Peptidoglicano, que
dependiendo de esta se dividen en dos grandes grupos conocidos
como Gram positivos y Gram negativos.
Muchas Bacterias son móviles gracias a que en su membrana tienen
cilios o flagelos. Los Cilios son vellosidades que cubren toda la
membrana y sirven como agentes motores para que la bacteria se
desplace por el medio en el que se encuentra. Los Flagelos son
filamentos alargados que sobresalen de una parte de la membrana
celular. Pueden estar presentes en cantidad de uno, dos o incluso tres
en la bacteria; dan movilidad a mayor velocidad e incluso una dirección
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en el movimiento. Generalmente su reproducción es mediante Fisión

Binaria.
Las Bacterias pueden ser de muchas formas, y de acuerdo con ellas
tendrán funciones determinadas.

MORFOLOGIA Y AGRUPACIONES BACTERINAS

COCOS BACILOS ESPIRILOS

DIPLOCOS DIPLOBACILOS VIBRIOS

STREPTOCOCOS EN EMPALIZADA

STAPHILOCOCCUS STREPTOBACILO
S
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TETRADAS EN V

SARCINAS COCOBACILOS

9.2 Realizar una revisión de las aplicaciones de células bacterianas

más importantes a nivel ambiental e industrial.
A nivel ambiental se encuentran géneros que tienen aplicaciones que
favorecen la mineralización de los suelos. Un ejemplo es Rhizobium,
que se asocia en simbiosis (con beneficios mutuos) con plantas
leguminosas, fija el nitrógeno y favorece el crecimiento de las mismas.
Igualmente, especies del género Acinetobacter se utilizan en
biotecnología para biorremediación de suelos, pues degradan ciertos
compuestos aromáticos y complejos provenientes de algunos derivados
del petróleo.
Muchas industrias dependen en parte o enteramente de la acción
bacteriana. Gran cantidad de sustancias químicas importantes como
alcohol etílico, ácido acético y acetona son producidas por bacterias
específicas. También se emplean bacterias para el curado de tabaco, el
curtido de cueros, caucho, algodón, etc. En la industria alimentaria las
bacterias, junto con levaduras y mohos, se han utilizado durante miles
de años para la preparación de alimentos fermentados tales como
queso, mantequilla, encurtidos, vinagre, vino y yogurt.
9.3 Busque en esquemas (dibujos) las formas y agrupaciones
bacterianas y dibújelas.
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9.4 De 3 razones por las que a una muestra se le debe realizar la

coloración de Gram.
1- La tinción de Gram es de gran utilidad para realizar el examen
directo de muestras clínicas, porque permite determinar la
calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la naturaleza y
cantidad de microorganismos presentes y el germen
predominante en una infección mixta o con muestras
contaminadas con biota normal.
2- La tinción de Gram constituye una herramienta de gran utilidad
en el diagnóstico etiológico; sin embargo, la sensibilidad de
esta técnica es variable según el tipo de muestra y la carga
bacteriana presente en ella. La concentración de la muestra,
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como un paso previo a su tinción mejora el rendimiento, por lo

que es recomendable su uso de rutina.
3- Esta tinción, constituye por lo tanto un apoyo indiscutible
contra las enfermedades infecciosas y aumenta su valor en
lo relativo a instaurar una terapia rápida permitiendo la
selección de los antibióticos apropiados. Las siguientes
patologías, son algunos ejemplos en donde la tinción de Gram se
convierte en una herramienta importantísima para el diagnóstico
presuntivo y definitivo del agente infeccioso:
 Vaginitis bacteriana.
 Enfermedades de transmisión sexual.
 Vaginitis.
9.5 Mencione 5 bacterias Gram positivas y 5 Gram negativas.

GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS

Stahylococcus aureus Escherichia coli

(Responsable de abscesos, dermatitis, (Habitante usual del colon humano,
infecciones localizadas y posibles está involucrada en las llamadas
gastroenteritis) “diarreas del viajero”, así como en
meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias).

Streptococcus pyrogenes Neisseria gonorrhoeae

(Causante de infecciones supurativas (Conocidísima por ser la causante de
en el trayecto respiratorio, así como la gonorrea, común enfermedad de
de fiebre reumática). transmisión sexual).

Streptococcus faecalis Salmonella enteritidis

(Usual en infecciones en vías biliares (Suele ocasionar enterocoitis y
y urinarias, habita en el colon septicemia con abscesos si llega a
humano). pasar del intestino a la sangre).
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Clostridium botullinum Haemophilus influenzae

(Causante del botulismo clásico y el (Es responsable de numerosas
infantil, habita en el suelo y en los meningitis, otitis, sinusitis,
alimentos mal conservados). bronconeumonías, celulitis y artritis
séptica).

Clostridium tetani Bordetella pertussis

(Bacterias responsables de los (Causante de la enfermedad conocida
tétanos, entran al cuerpo desde el como Tos ferina, de alta mortalidad
suelo por traumatismos en las infantil).
extremidades).

9.6 Explique porque las bacterias gram negativas se tiñen de rosado a

diferencia de las gram positivas (morado) siendo el procedimiento
de tinción el mismo
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las
bacterias para observarlas mejor bajo el microscopio. Según la
distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se
tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante
esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una
pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una
segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al
microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa,
formada por un gran número de capas de peptidoglicanos entre las que
se inserta la tinción Gram, dando un color violeta intenso al
microscopio y se clasifican como Gram +.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite
determinar el tipo de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de
elección ha de ser capaz de atravesar la pared bacteriana, en función
de si la bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará el
antibiótico más eficaz.
9.7 Cuál es el propósito de flamear la muestra.
El propósito de flamear la muestra es para que esta quede fija en el
portaobjeto y para que también absorba mucho mejor el colorante.
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10. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

10.1 Qué diferencias existe entre un desinfectante y un antiséptico

DIFERENCIAS

DESINFECTANTES ANTISEPTICOS
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 Los desinfectantes son  Los antisépticos son

sustancias que se emplean
para destruir los
microorganismos o inhibir
su desarrollo, y que ejercen
su acción sobre una
superficie inerte u objeto
inanimado.
 Son menos potentes.
sustancias que se aplican
sobre tejidos con vida, con
el objeto de matar o impedir
el desarrollo de los
microorganismos.
 Son más potentes.

10.2 En qué consiste el proceso de esterilización y la importancia de

este.
Se denomina esterilización al proceso por el cual se obtiene un
producto libre de microorganismos viables. El proceso de esterilización
debe ser diseñado, validado y llevado a cabo para asegurar que es
capaz de eliminar la carga microbiana del producto o un
microorganismo más resistente.
Dado que la esterilidad no se puede demostrar de manera absoluta, sin
causar la destrucción completa de todas las unidades del lote de
producto terminado; se define la esterilidad en términos probabilísticos,
en donde la probabilidad de que una unidad de producto esté
contaminada es aceptablemente remota. Los agentes que matan
microorganismos son denominados microbicidas o más comúnmente
denominados “germicidas”. Si el agente específicamente destruye
bacterias, es llamado bactericida; si mata hongos es denominado
fungicida. Tras una exposición del objeto esterilizado al aire o a sus
alrededores, este se habrá contaminado de nuevo con
microorganismos.
Los métodos térmicos de esterilización son comúnmente los más
utilizados para eliminar los microorganismos, incluyendo las formas más
resistentes como lo son las endoesporas.
10.3 Explique la importancia de la pasteurización de la leche
La pasteurización consiste en el tratamiento del calor de un producto
para matar todas las bacterias patógenas y reducir la actividad
enzimática. El objetivo es hacer que los productos sean seguros para el
consumo y que tengan una vida útil más prolongada.
La pasteurización se utiliza principalmente para hacer que los productos
sean seguros para el consumo, para aumentar su vida útil y para reducir
su putrefacción. Sin embargo, también puede utilizarse para alterar las
propiedades del producto final. Por ejemplo, la pasteurización de la
leche para yogur desnaturaliza las proteínas, lo que permite que el
cultivo de yogur crezca y que el producto sea más viscoso y más
estable.
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11. REFERENCIAS
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https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-
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http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0798-
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%20en%20parte,%2C%20caucho%2C%20algod%C3%B3n%2C%20etc
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