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Artículo original

Protección Corteza Cerebral e Hipocampo en

Mediada por Callistemón viminalis Aluminio
Enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro

Mandeep Singh, Yash Prashar*

Departamento de Farmacología, Instituto Rayat de Farmacia, SBS Nagar, Nawanshahr, Punjab, INDIA.

RESUMEN

Objetivo: El estudio se llevó a cabo para evaluar el efecto neuroprotector del extracto de metanol en la demencia tipo
alzheimer inducida
Callistemón
por cloruro
viminalis
de aluminio en ratones.
grupos: Métodos:
control de ratones
vehículo;
albinos
AlCl3 suizos
+ solución
de cualquier
salina normal;
sexo se
AlCl3
dividieron
+ rivastigmina;
en 5
extracto de AlCl3+ (50 mg/kg; po); AlCl3 + extracto (100 mg/kg; po). Se analizaron los siguientes parámetros en todos los
grupos: a) Parámetros de comportamiento: prueba del laberinto de agua de Morris, b) Parámetros bioquímicos Nivel de AchE,
nivel de GSH, nivel de SOD, nivel de catalasa y nivel de nitrito. Estudio histopatológico Hipocampo y región de la corteza
cerebral de cerebro de ratones. Resultados: La presencia de varios fitoconstituyentes como el ácido betulínico, el ácido
ursólico, el ÿ-sitosterol y el lupeol informados a través de TLC, tienen un papel potente como antioxidante y también se sabe
que mejoran el flujo sanguíneo y reducen la formación de placa, lo que demuestra que el extracto de esta planta se puede
usar en alzheimer. La administración oral de MECV provocó una disminución significativa (<0,01) en el tiempo de latencia de
escape y un aumento significativo (<0,01) en el tiempo total de manera dependiente de la dosis en comparación con el grupo
tratado con cloruro de aluminio. Además, el tratamiento posterior con MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg) mostró una disminución
significativa (<0,01) en el nivel de AchE y nitrito y un aumento significativo (<0,01) en pags
el cerebro
nivel de de
GSH,
ratones.
catalasa
La histopatología
y SOD en el
del hipocampo y la corteza cerebral del cerebro
pags por el
decloruro
los ratones
de aluminio.
mostró que la MECV redujo notablemente la toxicidad inducida

pags

pags

También se conservó el patrón de histoarquitectura normal del hipocampo y la corteza cerebral. Conclusión: La evidencia
sobre la presencia de fitoconstituyentes y los estudios analíticos que confirman su presencia, junto con los estudios preclínicos
en ratones con resultados concluyentes en el tratamiento del Alzheimer mostrados por el extracto concluyen que el extracto
exhibe un efecto neuroprotector.

Fecha de envío: 09-03-2019;

Palabras clave: Laberinto de agua de Morris, AchE, GSH, Catalasa, SOD, Nitrito, Callistemón viminalis . Fecha de revisión: 14-12-2019;
Fecha de aceptación: 04-02-2020

DOI: 10.5530/ijper.54.2.48
INTRODUCCIÓN Correspondencia:
Sr. Yash Prashar

La demencia no es una sola enfermedad, es un grupo y la muerte de las células neuronales que son los cen Departamento de
Farmacología, Instituto de
de enfermedades que afectan la memoria y otras factores centrales en el proceso neurodegenerativo. Farmacia Rayat, SBS Nagar,
Rail majra, Nawanshahr-144533,
capacidades cognitivas que alteran las actividades de Las drogas sintéticas que se usan para tratar la
Punjab, INDIA.
la vida diaria.1 La enfermedad de Alzheimer es de carácterdemencia tienen muchos efectos secundarios como Teléfono: +91-9646646643
Correo electrónico: yashprashar@gmail.
náuseas, vómitos, diarrea, anorexia, dolor abdominal, com
por deterioro progresivo de la memoria, alteración de
dolor de cabeza, mareos, pérdida de peso, fatiga,
la cognición, cambios en la personalidad, dificultades
bradicardia, incontinencia urinaria, insomnio, calambres
del lenguaje, deterioro de la
musculares, hallu
movimiento y otras funciones que conducen
cinación, confusión. 3 Medicina tradicional
hasta la muerte por insuficiencia cerebral completa.2 El sistema de la India es mucho más seguro que las
Las tres principales características de la EA son las drogas sintéticas que no son seguras para los humanos.
placas de beta amiloide, los ovillos neurofibrilares (NFT) Plantas medicinales que potencian la memoria www.ijper.org

422 Revista india de educación e investigación farmacéutica |Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio

y reducir el envejecimiento del cerebro incluyen ashwagandha, en cámara de yodo durante 10-30 min y también detectado en

brahmi, alcaravea, cilantro, cúrcuma, shankhpushpi, regaliz y Cámara UV a 264 y 365 nm.

guggul. Las plantas a base de hierbas no han sido debidamente

Adquisición y alojamiento de animales
estudiadas por sus procesos de transducción de señales y su
Se obtuvieron ratones albinos suizos sanos de las instalaciones
eficacia. Sin embargo, en los últimos 10 a 20 años, los estudios
centrales de animales de NIPER, Mohali. Los animales se
farmacológicos y toxicológicos de las hierbas han ganado mucha
mantuvieron en jaulas de propileno y se utilizó cáscara de arroz
importancia. Los estudios relacionados con las plantas están
como material de cama. La cáscara se cambió todos los días para
recibiendo mucha atención por parte de los científicos y verificados
limpiar las jaulas y mantener las condiciones higiénicas. Se
por sus supuestos efectos terapéuticos. Varias hierbas empleadas
mantuvieron 6 animales en cada jaula y se alimentaron con una
tradicionalmente en el sistema médico de la India han dado
4 dieta de gránulos estándar y agua ad libitum. La habitación estaba
resultados positivos. La planta “Callistemon viminalis”
bien aireada y se mantuvo un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas.
se utiliza para muchas enfermedades en la medicina tradicional
La temperatura ambiente se mantuvo a 22±2°C. El estudio se
china. Exhibe antibacteriano, 5 antifúngico, 6 antihelmíntico, 7
realizó en el Departamento de Farmacología, Instituto Rayat de
antioxidante,5 insecticida,8 hemolítico,9 molusquicida,10
Farmacia, Railmajra, Distt. SBS Nagar, Punyab. Los experimentos
antiagregación plaquetaria.11 No había datos científicos
disponibles para el fruto de Callistemon viminalis para se realizaron después de la aprobación previa de la IAEC.
(Nº: 874/Po/2018-19/1).
tratamiento de la enfermedad de alzheimer. El presente trabajo
tuvo como objetivo generar datos científicos y encontrar la eficacia Selección de dosis
del extracto de la planta.
La selección de la dosis de cloruro de aluminio (AlCl3 ) y riv
astigmina se basó en una revisión previa de la literatura.14 La
MATERIALES Y MÉTODOS dosis de Callistemon viminalis se seleccionó en base a una
revisión de la literatura en la que se evaluó la parte de la fruta
Productos químicos: El metanol se adquirió de Blulux
para otras actividades: 50 mg/kg; po y 100 mg/kg; po15
Laboratories Private Limited, Faridabad. El cloruro de aluminio y
la rivastigmina se adquirieron de NICE Chemicals Private Limited, Diseño del experimento Se
Cochin and Sun Pharmaceuticals, Moh ali, Chandigarh. Todos los
usaron ratones albinos suizos de ambos sexos con un peso
demás productos químicos eran de grado analítico.
corporal de 25-30 g. Se dividieron en 5 grupos de 6 animales cada
uno. Ratones del grupo I tratados con solución salina normal al
Recolección y autenticación de plantas: la parte de la fruta de
0,9 % p/v NaCl 10 ml/kg; po ( días 5 a 42), ratones del Grupo II
Callistemon viminalis se recolectó del jardín botánico del Grupo
tratados con AlC13 (AlCl3 70 mg/kg; ip del día 5 al 25 + NaCl al
de Instituciones Rayat, Ropar, en el mes de enero de 2019. La 0,9 % p/v 5 ml/kg; po del día 26 al 42 ). El grupo III recibió AlC13
planta fue autenticada por el Sr. Ram Prasad, asistente de herbario
(70 mg/kg; ip) del día 5 al 25 + el grupo tratado con rivastigmina
en el Departamento de Ciencias Botánicas y Ambientales. (2,5 mg/kg; po) del día 26 al 42 . Al grupo IV se le administró
Universidad Guru Nanak Dev (GNDU), Amritsar con número de
AlC13 (70 mg/kg; ip) del 5 al 25
referencia. – 1920, de fecha 25/02/2019.

Preparación de MECV: La fruta madura se secó a la sombra
durante un mes y se quitaron las semillas .
de la parte de la fruta. A continuación, el material de frutos secos
se molía para reducirlo a polvo grueso con la ayuda de un
molinillo. La extracción se realizó con metanol utilizando un
extractor soxhlet. Se usó un evaporador rotatorio para evaporar
el disolvente.
día + grupo tratado con el fármaco de prueba (50 mg/kg; po) desde el 26
día al día 42 y los animales del Grupo V recibieron AlC13
(70 mg/kg; ip) del día 5 al 25 + grupo tratado con el fármaco de
prueba (100 mg/kg; po) del día 26 al 42 .
Estimación de parámetros de comportamiento
La evaluación del comportamiento se realizó con el laberinto de agua de
Morris (MWM). En el estudio MWM, los ratones se seleccionaron al azar en

Evaluación fitoquímica: La evaluación fitoquímica de cinco grupos, en cada grupo estaban presentes 6 animales. Se tomaron

Callistemon viminalis se llevó a cabo según métodos estándar. lecturas de comportamiento los días 5, 16, 26, 36 y 42 de tratamiento.

12,13
Cromatografía de capa fina
Metodología para TLC: Las placas de TLC se prepararon con
gel de sílice-G. Las placas de TLC se corrieron en un sistema
solvente de Metanol: Conc. HCl (9:1 v/v) y se realizó la detección
Tarea de navegación espacial: se utilizó el laberinto acuático
de Morris para evaluar el ELT y el TT de la tarea de navegación
espacial. Durante la fase de entrenamiento (del día 1 al 4 ), se
permitió que los ratones nadaran hasta una plataforma visible
presente en una piscina circular de 180 cm de diámetro y 60 cm de diámetro.

Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020 423
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio

En Altura. El tiempo máximo era de 60 segundos para escapar a Estimación de la actividad de la catalasa (CAT) en el cerebro de ratones
una plataforma visible. Si los ratones no escapaban del agua a
La enzima catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en agua y
esta plataforma dentro del tiempo dado, se guiaba a los ratones a
oxígeno, utilizando cofactor de hierro o manganeso como
la plataforma visible y se les permitía permanecer allí durante 20
catalizador.18 Se añadió 10 % p/v de 0,05 ml de sobrenadante
segundos para recordar la posición de la plataforma. Al final de la
post mitocondrial en una cubeta que contenía 1,95 ml de tampón
prueba, los ratones se limpiaron adecuadamente y se devolvieron
de fosfato 0,05 M (pH-7). Luego se añadió 1 ml de H2O2 0,019 M
a sus jaulas de origen. El quinto día (día de la sonda), se realizó la
a la cubeta y se midió la absorbancia a 240 nm durante 30
prueba de la sonda retirando la plataforma de escape.
segundos. La cubeta de control contiene todos los componentes

excepto el sustrato.
El principio de MWM era que cuando los ratones escapaban del
agua trepando a la plataforma una y otra vez, aprendían la Estimación de la actividad de la superóxido dismutasa (SOD) en el
ubicación espacial de la plataforma desde cualquier posición inicial cerebro de ratones

en la piscina y el tiempo que tardaban los ratones en llegar a la
plataforma visible disminuía. . Tanto ELT como TT se comprobaron
para diferentes grupos el día 26 y el día 42 del experimento.
Durante la medición de ELT, el nivel del agua estaba 2 cm por
debajo del nivel del circuito móvil.
plataforma grande. Durante la medición de TT, el nivel del agua
estaba 2 cm por encima del nivel de la plataforma circular.
Durante ambas fases, la plataforma se colocó en el centro del
tercer cuadrante. Durante la medición de TT se retiró la plataforma.
La enzima SOD inhibe la oxidación de la oximina al inhibir el
sistema xantina-xantina oxidasa. El nitrito de hidroxilamina se
produjo mediante la oxidación de la oximina y mostró un pico de
absorbancia a 550 nm. añadido en él. Luego se le añadieron 0,4
ml de clorhidrato de hidroxilamina 1 mM y se midió la absorbancia
a 560 nm. La cubeta de control se ejecuta simultáneamente sin
homogeneizado. La actividad de SOD se expresa como unidades
por mg de proteína cerebral.

Estimación de parámetros bioquímicos

Estimación de nitrito en cerebro de ratones
Después del análisis de comportamiento, los animales fueron
El nivel de nitrito del sobrenadante posmitocondrial del cerebro se
sacrificados mediante anestesia con éter dietílico y dislocación cervical.
midió con la ayuda del reactivo de Greiss, que sirvió como indicador
Se extrajo el cerebro decapitando al animal y se usó solución
de la producción de óxido nítrico. Se añadieron 0,5 ml de reactivo
salina tamponada con fosfato 0,1 M enfriada (pH 7,4) para preparar
de Greiss recién preparado a 0,1 ml de homogeneizado de cerebro
homogeneizado al 10% (p/v) en un homogeneizador de teflón de
y se midió la absorbancia a 546 nm.20 La concentración de nitrito
vidrio. La solución se centrifugó a 1000 rpm durante 10 min a 40°C.
se calculó usando una curva estándar de nitrito de sodio.
Se obtuvo un sobrenadante después de la centrifugación. La
solución se usó para ensayar las actividades de las enzimas AchE,
GSH, catalasa y SOD. Estudio histopatológico del cerebro de ratones.

La histopatología se realizó fijando la corteza cerebral y la región

Preparación del sobrenadante post-mitocondrial: Una pequeña
del hipocampo del cerebro de ratones en paraformaldehído al 4 %
cantidad del sobrenadante se volvió a centrifugar a 12.000 rpm
y luego incrustándolos en parafina para cortar las partes del
durante 20 min. El sobrenadante post-mitocondrial se obtuvo
cerebro. Se usó un cortador de secciones (Leica, Alemania) para
después de centrifugar la solución sobrenadante y se usó para cortar el cerebro en secciones de 5 mm y las secciones se
analizar el nivel de nitrito en el cerebro de los ratones.16
teñido con reactivo de hematoxilina y eosina. Después de eso, las
secciones fueron examinadas por un microscopio de luz. Haema
Estimación de la actividad de la enzima acetilcolinesterasa toxilina produce color azul y eosina produce color violeta y rojo.
en el cerebro de ratones

La actividad de acetilcolinesterasa del homogeneizado de cerebro

análisis estadístico
se midió mediante el método fotométrico de Ellman con una ligera
Los valores se representan como media ± SEM, n=6. Los datos se
modificación. Se utilizó acetiltiocolina como sustrato.17
analizaron mediante ANOVA unidireccional seguido de la prueba
de comparaciones post hoc de Dunnett en Graph Pad Prism versión
Estimación de glutatión reducido 8.0.2. *p< 0,05, **p<0,01, ***p<0,001, nsp>0,05.a en comparación
El método colorimétrico estándar se utiliza para determinar con el grupo de control, b
en comparación con aluminio tratado
nivel total de glutatión17 grupo.

424 Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio
RESULTADOS
Cribado fitoquímico preliminar: MECV se sometió a un cribado
fitoquímico preliminar y los resultados obtenidos se presentan en la
Tabla 1. El extracto mostró la presencia de glucósidos (saponina,
esteroide, triterpenoide pentacíclico) y polifenoles
Cromatografía en capa fina (TLC)
Aislamiento del extracto de planta: el cromatograma TLC de
MECV usando un sistema solvente [hexano: acetato de etilo (1:1)]
con luz ultravioleta larga y corta, el yodo como reactivo de detección
mostró seis puntos en las placas de TLC. El valor RF de
el extracto con inferencia se muestran en la Tabla 2.
Efecto de Callistemón viminalis sobre el comportamiento
los estudios
Efecto de MECV en la alteración del comportamiento inducida por
cloruro de aluminio (laberinto de agua de Morris) en ratones.
Los resultados se describen según el rendimiento de los días 5, 16,
26, 36 y 42 en el laberinto acuático de Morris. Durante el ensayo de
retención realizado el día 5 (día de la prueba), todos los ratones
pasaron más tiempo en el cuadrante objetivo (Q3) en comparación
con otros cuadrantes. El grupo de control del vehículo mostró una
recuperación normal de la memoria durante ELT y TT para encontrar
la plataforma. La diferencia significativa (p<0,01) en ELT y TT entre
el control y el grupo tratado con cloruro de aluminio (AIC13 70 mg/
kg/ip) indica que la administración oral crónica de AIC13 causa el
deterioro de las habilidades de aprendizaje y memoria en ratones
albinos suizos. MECV (50 mg/kg/po; 100 mg/kg/po) y riv astigmina
(2,5 mg/kg/po) han producido disminuciones significativas en ELT y
aumento en TT en el laberinto de agua de morris en comparación
con el grupo tratado con cloruro de aluminio. El resultado se resume
en la Tabla 3; Tabla 4; Figura 1; Figura 2.
Efecto de MECV en parámetros bioquímicos
a) Efecto de MECV en el nivel de AchE en el cerebro de ratones
Se encontró que el nivel de AchE en los animales del grupo de
control (Grupo I) era de 1,65 ± 0,10 nM/L/min/g de
Figura 1: Efecto de MECV en el tiempo de latencia de escape de los ratones.
Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
tejido. El tratamiento con cloruro de aluminio dio como resultado
un aumento significativo en los niveles de AchE (p<0,01) en
comparación con el grupo de control. El tratamiento posterior con el
fármaco estándar rivastigmina y MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg)
mostró una disminución significativa (p<0,01) en los niveles de AchE
en comparación con los animales tratados con cloruro de aluminio.
Los resultados se resumen en la Tabla 5; Figura 3.
b) Efecto de MECV en el nivel de GSH en el cerebro de ratones
Se encontró que el nivel de GSH en el grupo de control (Grupo I)
era de 2,68 ± 0,11 nM/mg de proteína. El tratamiento con cloruro de
aluminio dio como resultado una disminución significativa en el nivel
de GSH en el cerebro de los ratones (p<0,01) en comparación con
el grupo de control. El tratamiento posterior con el fármaco estándar
rivastigmina y MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg; po) mostró un aumento
significativo (p<0,01) del nivel de GSH en el cerebro de los ratones
en comparación con los animales tratados con cloruro de aluminio.
Los resultados se resumen en la Tabla 5; Figura 4
c) Efecto de MECV sobre el nivel de catalasa en el cerebro de ratones
Se encontró que el nivel de catalasa en el animal del grupo de
control (Grupo I) era de 1,75 ± 0,11 µM de H2O2 descompuesto /
min/mg de proteína. El tratamiento con cloruro de aluminio dio como
resultado una disminución significativa (p<0,01) en el nivel de
catalasa en el cerebro de los ratones en comparación con el grupo de control.
El tratamiento posterior con el fármaco estándar rivastigmina y
MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg; po) mostró un aumento significativo
(p<0,01) en el nivel de catalasa en el cerebro de los ratones en
comparación con los animales tratados con cloruro de aluminio. Los
resultados se resumen en la Tabla 5; Figura 5.
d) Efecto de MECV en el nivel de SOD en cerebro de ratones
Se encontró que el nivel de SOD en el animal del grupo de control
(Grupo I) era de 4,68 ± 0,10 unidades/mg de proteína. El tratamiento
con cloruro de aluminio dio como resultado una disminución
significativa en el nivel de SOD en el cerebro de los ratones (p<0,01)
al final del experimento ( día 42) en comparación con el grupo de control.
El tratamiento posterior con el fármaco estándar rivastigmina y
MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg; po) mostró un aumento significativo
(p<0,01) en el nivel de SOD en el cerebro de los ratones
Figura 2: Efecto de MECV en el tiempo total de los ratones.
425
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio

Figura 3: Efecto de MECV en el nivel de AchE en cerebro de ratones. Figura 5: Efecto de MECV sobre el nivel de catalasa en cerebro de ratones.

Figura 4: Efecto de MECV en el nivel de GSH en cerebro de ratones. Figura 6: Efecto de MECV en el nivel de SOD en cerebro de ratones.

en comparación con los animales tratados con cloruro de aluminio. grupo control tivo (AlCl3 ): En el grupo II los animales que fueron
Los resultados se resumen en la Tabla 5; Figura 6 tratados con cloruro de aluminio mostraron pérdida neuronal, gliosis

y degeneración vacuolar típica en el hipocampo. Figura 8C grupo de

e) Efecto de MECV en los niveles de nitrito en el cerebro de ratones
Se encontró que el nivel de nitrito en el animal del grupo de control
(Grupo I) era de 1,80 ± 0,21 nM/mg de proteína. El tratamiento con
cloruro de aluminio dio como resultado una disminución significativa
en el nivel de nitrito en el cerebro de los ratones (p<0,01) en
comparación con el grupo de control. El tratamiento posterior con el
fármaco estándar rivastigmina mostró una disminución significativa
(p<0,01) en el nivel de nitrito en el cerebro de los ratones en
comparación con los animales tratados con cloruro de aluminio. Tratamiento posterior con
MECV (50 mg/kg y 100 mg/kg; po) mostró una disminución
significativa (p<0,01; p<0,01) en el nivel de nitrito en comparación
con los animales tratados con cloruro de aluminio. Los resultados se
resumen en la Tabla 5; Figura 7
Informes histopatológicos de cerebro de ratones Observaciones: Del estudio histopatológico de la parte de la corteza
que muestran degeneración neuronal en el hipocampo
Observaciones: Del estudio histopatológico de la parte del
hipocampo del cerebro de ratones se ha observado que; Figura 8A
Grupo de control con vehículo (0,9% de NaCl): En el grupo I, los
animales que se trataron con solución salina normal, el hipocampo
del cerebro de los ratones mostró una estructura histológica normal
mínima. Figura 8B posición
control comparativo (riv astigmina): Los animales del grupo ÿ que se
trataron con el fármaco estándar (rivastigmina) junto con cloruro de
aluminio revelaron un ligero daño neuronal. Figura 8D MECV (50 mg/
kg): Los animales del Grupo IV que fueron tratados con MECV (50
mg/kg/po) y cloruro de aluminio mostraron un daño neuronal mínimo.
Figura 8E MECV (100 mg/kg): Los animales del grupo IV que fueron
tratados con una dosis más alta de MECV (100 mg/kg/po) y cloruro
de aluminio mostraron daño neuronal mínimo y severidad de las
lesiones.
Informes histopatológicos de cerebro de ratones
que muestran degeneración neuronal en la corteza cerebral
cerebral del cerebro de ratones se ha observado que; Figura 9A
grupo de control con vehículo (0,9% NaCl): Estructuras histológicas
normales y neuronas bien formadas. Figura 9B Grupo de control
positivo (AlCl3 ): Degeneración neuronal con morfología celular
anormal, reclutamiento de macrófagos, con corteza cerebral dañada.
Figura 9C grupo control comparativo (rivastig

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mio): No se observaron alteraciones histopatológicas.
Figura 9D MECV (50 mg/kg): Sin cambios histopatológicos y las
secciones muestran anomalías morfológicas reducidas en todas
las regiones con núcleos bien formados sin características
irregulares. Figura 9E MECV (100 mg/
kg): Las secciones mostraron arquitectura normal de regiones
cerebrales como grupo control sin alteraciones histopatológicas.
Figura 7: Efecto de MECV sobre el nivel de nitrito en cerebro de ratones.
Figura 8: Histopatología del hipocampo en cerebro de ratones;
A: Se observaron estructuras histológicas normales; B: pérdida
neuronal, gliosis y degeneración vacuolar típica en hipocampo;
C: leve daño neuronal; D: mostró mínimo daño neuronal y
severidad de las lesiones.
Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
DISCUSIÓN
En el presente estudio, se ha intentado evaluar la actividad anti-
alzheimer de MECV en la neurotoxicidad inducida por cloruro de
aluminio en un modelo animal experimental.
La enfermedad de Alzheimer es la forma más común de demencia
y el 90% de los pacientes sufren del tipo de demencia AD. La
enfermedad de Alzheimer (EA) es una enfermedad
neurodegenerativa crítica caracterizada por la pérdida de la
memoria y la disminución del rendimiento, el lenguaje y las
habilidades visuoespaciales. Las características neuropatológicas
de la EA implican la lesión y muerte de las neuronas. Comienza
desde la región del campus del hipopótamo del cerebro que está principalmente invo
Tabla 1: Cribado fitoquímico de MECV.
No. S. Clase de compuesto Presente (+) / Ausente
(-)
1. glucósido +
2. polifenol +
Figura 9: Histopatología de la corteza cerebral en cerebro de
ratones; A: estructuras histológicas normales y neuronas bien
formadas; B: Degeneración neuronal con morfología celular
anormal, reclutamiento de macrófagos, con corteza cerebral
dañada; C: No se observaron alteraciones histopatológicas; D:
sin cambios histopatológicos y las secciones mostraron
anomalías morfológicas reducidas en todas las regiones con
núcleos bien formados sin características irregulares; E: Las
secciones mostraron una arquitectura normal de las regiones
cerebrales como el grupo de control sin alteraciones histopatológ
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio

la memoria y el aprendizaje, luego afecta a todo el cerebro. La revirtió el déficit cognitivo producido por el cloruro de aluminio
presencia de placas seniles y ovillos neurofibrilares se observa y mostró su acción neuroprotectora.
principalmente en el hipocampo, corteza cerebral del cerebro.25 El laberinto de agua de Morris es la prueba de comportamiento
más utilizada para estudiar el aprendizaje espacial y la memoria
Se utiliza el modelo de cloruro de aluminio porque es el más de los animales de experimentación. Inicialmente, a los
roedores se les permite nadar hacia una plataforma visible
modelo confiable en comparación con otros. El aluminio es un
para escapar de un charco de agua. Luego esa plataforma se
metal tóxico presente en el agua potable y los alimentos, que
esconde bajo la superficie del agua, para que el animal
pasa al cerebro y causa daño oxidativo y neurodegeneración
recuerde su ubicación para poder escapar del agua. Se utiliza
en el cerebro, lo que resulta en déficits de aprendizaje y
para comprobar la función cognitiva, estudiar modelos animales
memoria. El tratamiento crónico con aluminio provoca estrés de enfermedades neurodegenerativas (EA y PD) y probar
oxidativo y depósito de la beta amiloide en el hipocampo y en posibles terapias farmacológicas. En el presente estudio, la
la región de la corteza cerebral del cerebro de los ratones, lo administración crónica de cloruro de aluminio durante 6
que provoca deterioro de la memoria y déficit neuroconductuales. semanas mostró deterioro cognitivo en ratones el día del
Administración crónica de MECV desempeño. Los ratones tratados con cloruro de aluminio mostraron un aument

Tabla 2: Valor Rf de MECV.

S. No. Extracto de planta Sistema solvente valor RF Inferencia Referencia

1. Extracto metanólico de Hexano: acetato 0.5 Lupeol 21

Callistemón viminalis de etilo 0.4 ácido ursólico 22
0.3 ácido betulínico 23
0.17 ÿ-sitosterol 24

Tabla 3: Efecto de MECV en el tiempo de latencia de escape de los ratones.

Tratamiento TIEMPO DE LATENCIA DE ESCAPE EN SEGUNDOS

5to dia día 16 día 26 día 36 día 42

Grupo I 0,9% p/v NaCl 10ml/

4,90±0,37 5,33±0,39 5,79±0,31 5,74±0,30 6,06±0,25
kg; correos

Grupo II AlCl3 70 mg/kg; ip + NaCl 4,79±0,35 9,36±0,10a** 13,08±0,09a** 17,21±0,13a** 20,99±0,14a**

al 0,9 % p/v 10 ml/kg; po Grupo III

AlCl3 70 mg/kg; ip + rivastigmina 4,75±0,29 8,51±0,11b** 11,15±0,08b** 6,49±0,15b ** 6,03±0,05b **

2,5 mg/kg; correos

Grupo IV AlCl3 70 mg/kg; ip +

4,92±0,30 9,15±0,17 ns 10,01±0,18b** 9,5±0,08 bits** 8,80±0,12 b**
MECV 50 mg/kg; correos

Grupo V AlCl3 70 mg/kg; ip +

4,75±0,34 9.40±0.14ns 11,16±0,02b** 8,32±0,18 bits** 7,90±0,19 b**
MECV 100 mg/kg; correos

Tabla 4: Efecto de MECV en el tiempo total de los ratones.

Tratamiento 5to dia día 16 día 26 día 36 día 42

Grupo I NaCl al 0,9 % p/v

26,09±0,11 28,13±0,14 27,03±0,12 30,20±0,10 33,08±0,09
10 ml/kg; correos

Grupo II AlCl3 70 mg/kg; ip

+ 0,9% p/v NaCl 10ml/ 24,23±0,10 17,18±0,13a** 15,25±0,14a** 12,01±0,23a** 10,63±0,10a**
kg; correos

Grupo III AlCl3 70 mg/kg; ip

+ rivastigmina 2,5 mg/ 22,53±0,14 19,37±0,13b** 21,28±0,16b** 23,33±0,19b** 25,73±0,11b**
kg; correos

Grupo IV AlCl3 70 mg/kg; ip

+ MECV 50 mg/kg; correos 25,14±0,18 21,17±0,09b** 18,47±0,02b** 19,67±0,16b** 20,04±0,15b**

Grupo V AlCl3 70mg/

kg; ip + MECV 100 mg/ 24,89±0,24 19,16±0,23 b** 21,72±0,04b ** 21,85±0,17b** 22,19±0,19b**
kg; correos

428 Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio
Tabla 5: Efecto de MECV en el nivel de AchE, GSH, catalasa, SOD y nitrito.
Grupos Ache (nM/L/ GSH (nM/mg de
min/g de proteína)
tejido)
Grupo I 0,9% p/v NaCl 10ml/ 1,53± 0,07 2,68±0,11
kg; correos
Grupo II AlCl3 70 mg/kg; ip + NaCl 3,27±0,15a** 1,13±0,06a**
al 0,9 % p/v 10 ml/kg; correos
Grupo III AlCl3 70 mg/kg; ip +
rivastigmina 2,5 mg/kg; po Grupo 1,93±0,09b** 2,23±0,09b**
IV AlCl3 70 mg/kg; ip + MECV 50
mg/kg; po Grupo V AlCl3 70 2,51±0,17b** 2,01±0,08b**
mg/kg; ip + MECV 100 mg/kg;
correos 2,19±0,10b** 2,13±0,10b**
en el paradigma del laberinto de agua de Morris. Estas alteraciones del
comportamiento mejoraron en los grupos tratados con MECV y con
rivastigmina, en comparación con el grupo tratado con cloruro de
aluminio.
Callistemon viminalis es una planta medicinal importante en la medicina
china; se utiliza para tratar las hemorroides. Se utiliza como sustituto del
té para el tratamiento de gastroenteritis, diarrea e infecciones de la piel
en jamaica, nueva gales del sur y australia desde hace mucho tiempo.
También exhibe otras actividades como antibacteriana, antifúngica,
antihelmíntica, antioxidante, insecticida, hemolítica, molusquicida,
antiagregación plaquetaria. De la literatura, la detección fitoquímica del
extracto de fruta de Callistemon viminalis mostró la presencia de
glucósidos y polifenoles.
La dosis de Callistemon viminalis se seleccionó en base a
revisión de literatura. El uso del extracto metanólico se basa
en el hecho de que el solvente de metanol extrae tanto compuestos
polares como no polares y también nuestro estudio indicó la presencia
de alto contenido de glucósidos y polifenoles
contenido.
Los diversos fitoquímicos presentes en Callistemon vimi nalis
confirmados por TLC se enumeran en la Tabla 2.
El valor de Rf obtenido por TLC se comparó con el valor de Rf informado
del componente químico. El componente químico confirmado por TLC
fue ÿ-sitosterol,26 lupeol,27 ácido betulínico,28 ácido ursólico29 que
actúa individualmente en las diversas vías de la DA .
En nuestro estudio, la administración crónica de cloruro de aluminio
durante 42 días provocó un aumento significativo del estrés oxidativo,
alteraciones bioquímicas anormales y cambios histológicos en el cerebro
que se evaluaron mediante la estimación de parámetros bioquímicos y
de comportamiento. La diferencia significativa (p<0,01) en ELT y TT
entre el control y el grupo tratado con AIC13 (70 mg/kg/ip), indica que la
administración oral crónica de AIC13 causa el deterioro de las habilidades
de aprendizaje y memoria en ratones albinos suizos.
MECV (50 mg/kg/po; 100 mg/kg/po) y rivastigmina (2,5 mg/kg/po)
produjeron disminuciones significativas (p<0,01)
Revista india de educación e investigación farmacéutica | Vol 54 | Número 2 | abr-jun, 2020
Catalasa (µM de CÉSPED Nitrito (nM/mg de
H2 O2 descompuesto/ (Unidades SOD/ proteína)
min/mg de proteína) mg de proteína)
1,69±0,12 4,68±0,19 1,89±0,21
0,73±0,05a** 1,13±0,11a** 3,83±0,18a**
1,52±0,11b** 4,33±0,16b** 2,27±0,13b**
1,03±0,07b* 3,37±0,18b** 3,01±0,16b**
1,32±0,10b** 3,03±0,10b** 2,68±0,11b**
en ELT y aumento en TT en el laberinto de agua de morris en
comparación con el grupo tratado con cloruro de aluminio. El cloruro de
aluminio aumenta el estrés oxidativo que
se evaluó a partir del aumento en el nivel de AchE y el nivel de nitrito y
la disminución en el nivel de GSH, SOD y catalasa en el cerebro de los
ratones. Administración de MECV y
La rivastigmina provoca una disminución de AchE, el nivel de nitrito y
aumenta significativamente los niveles de GSH, SOD y catalasa en el
cerebro de los ratones. Se reportan resultados similares en otros
artículos de investigación sobre cerebro de rata.30
Los informes histopatológicos del grupo tratado con cloruro de aluminio
mostraron la presencia de pérdida neuronal, gliosis y degeneración
vacuolar típica en la región del hipocampo.
MECV a una dosis de 50 mg/kg; po y 100 mg/kg; po se administró al
grupo tratado con cloruro de aluminio que mostró un ligero daño neuronal
y la gravedad de las lesiones en el hipocampo; esto es una indicación
de la acción neuroprotectora del MECV contra la demencia de tipo AD
inducida por cloruro de aluminio. También se reportan resultados
similares en otro artículo de investigación sobre cerebro de rata.14
CONCLUSIÓN
En este estudio, exploramos que el extracto metanólico de Callistemon
viminalis tiene una mejora notable en las habilidades de aprendizaje y
memoria de ratones experimentales mediante la prueba del laberinto de
agua de Morris. Además, se realizó actividad antioxidante y mostró una
notable actividad antioxidante. Puede revertir la pérdida de memoria
causada por el cloruro de aluminio aumentando los niveles de enzimas
antioxidantes como GSH, catalasa y SOD. Reduce los niveles de nitrito
y la enzima AchE que causa la neurodegeneración. La histopatología
del hipocampo y la corteza cerebral del cerebro de los ratones también
mostró que la toxicidad inducida por el cloruro de aluminio se redujo
notablemente por el MECV y preservó el patrón de histoarquitectura
normal del hipocampo y la corteza cerebral.
Nuestros resultados sugirieron que MECV puede ser un beneficio
429
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio
agente para prevenir el desarrollo y la progresión de la demencia. Sin
embargo, se necesitan más investigaciones para establecer su eficacia
clínica y toxicidad potencial antes de su uso como medicamento para
el tratamiento de la EA.
RECONOCIMIENTO
Los autores desean agradecer al director del Rayat Institute of
Pharmacy por proporcionar las instalaciones de investigación necesarias.
CONFLICTO DE INTERESES
Los autores declaran que no existe conflicto de intereses
con respecto a la publicación de este trabajo.
ABREVIATURAS
MECV: Extracto Metanólico de Callistemon viminalis;
AchE: acetilcolinesterasa; GSH: glutatión reducido; SOD: superóxido
dismutasa; DTNB: 5, 5'-ditiobis-(ácido 2-nitrobenzoico).
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Singh y Prashar.: Papel de Callistemon viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio

RESUMEN PICTÓRICO RESUMEN

El animal tratado con cloruro de aluminio mostró un comentario.
capaz de aumentar el tiempo de latencia de escape (ELT) y
disminuir el tiempo total (TT). El cloruro de aluminio aumenta
significativamente el nivel de enzima AchE y nitrito en el
hipocampo y la corteza cerebral y disminuye el nivel de enzimas
antioxidantes (GSH, catalasa y SOD). Los animales tratados
con MECV mostraron una mejora en la función cognitiva que se
evaluó mediante un aparato de laberinto de agua de morris. El
extracto de la planta mejoró el efecto de deterioro del cloruro de
aluminio sobre la enzima AchE y aumentó los niveles de enzimas
antioxidantes (GSH, catalasa y SOD). Nuestros resultados
sugirieron que la MECV podría ser beneficiosa para prevenir el
desarrollo y la progresión de la demencia.

Acerca de los autores

Yash Prashar: El Sr. Yash Prashar trabaja como profesor asociado en el Instituto de Farmacia Rayat, Railmajra.
Tiene una amplia experiencia en el campo de los trastornos del SNC y endocrinos. Cuenta en su haber con varias publicaciones
nacionales e internacionales.

Mandeep Singh: El Sr. Mandeep Singh es investigador académico en el Instituto de Farmacia Rayat, Railmajra. Está trabajando en
el campo de la enfermedad de Alzheimer. Tiene buena experiencia en investigación y tiene publicaciones en su haber.

Citar este artículo: Singh M, Prashar Y. Cerebral Cortex and Hippocampal Protection Mediated by calistemon
viminalis en la enfermedad de Alzheimer inducida por cloruro de aluminio. Indian J de Educación e Investigación Farmacéutica.
2020;54(2):422-31.

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