“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA

PRÁCTICA N° 12: MUTACIONES EN PROTO ONCOGEN

Presentado por:

1. ARANDA SOSA, Mara Ruby

2. BARCO CRUZ, Jarol Esmit
3. CALVA CAMPOVERDE, Gustavo Daniel

Docente de laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular:

CHIA PULIDO , Jerson Dario

CICLO - II

PIURA-2023
 PRÁCTICA N° 12: MUTACIONES EN PROTO ONCOGEN

1. OBJETIVOS
- Demostrar las alteraciones en la expresión genética mediante ejercicios de
mutaciones.

2. MATERIALES
- Videos proyectados en clase.

3. MARCO TEÓRICO

Estructura del ADN

El ADN, la “molécula de la vida” es un ácido nucleico formado por unas pequeñas

“piezas” bioquímicas, que llamamos “nucleótidos”. Estos nucleótidos, a su vez, están
compuestos de tres componentes químicos básicos: un ácido fosfórico, una
desoxirribosa y una de las cuatro bases nitrogenadas que puede tener el ADN
(adenina, timina, citosina y guanina).

En el ADN, los nucleótidos se encuentran unidos covalentemente entre ellos,

formando dos largas cadenas que se “enrollan” sobre sí mismas, formando una gran
hélice. Cada una de estas cadenas es complementaria a la otra, es decir, sus
nucleótidos son complementarios en cada posición de la molécula (adeninas con
timinas y guaninas con citosinas). Ambas cadenas, además, son antiparalelas, es
decir, tienen sentidos contrarios. La nomenclatura 5’ (parte de la molécula de ribosa
que se une al fosfato) y 3’ (parte de la molécula de ribosa que se une a otro
nucleótido) nos ayudan a conocer en qué dirección se encuentra cada cadena.

La replicación del ADN: Características principales

La replicación es el proceso mediante el cual una molécula de ADN es duplicada y

se obtienen dos moléculas de ADN. Los mecanismos de replicación son
importantísimos para el ciclo celular, pues sin ellos sería imposible obtener células
idénticas en la mitosis, entre otras cosas.

Las características principales de la replicación del ADN son las siguientes:

- La replicación es semiconservativa

En el proceso de replicación del ADN, cada una de las moléculas “hijas” que se
sintetizan a partir de una sola molécula “madre” conserva únicamente una de las
cadenas originales de la molécula madre. La otra cadena se sintetiza utilizando
como “molde” la cadena original conservada.

La replicación del ADN comienza siempre en puntos concretos de la molécula

llamados orígenes de replicación.

Los orígenes de replicación son unas secuencias concretas del ADN en las que se
puede comenzar la replicación. La composición de estas secuencias de nucleótidos
y la activación de la replicación son diferentes para bacterias, arqueas y eucariotas.
Por ejemplo, en el caso de las bacterias, únicamente encontraremos un origen de
replicación, mientras que en arqueas suelen haber diferentes lugares de replicación.

- La replicación es bidireccional

Cuando se forma una horquilla de replicación en un origen de replicación, por lo

general, no avanza únicamente en una dirección de la cadena, sino que lo hace en
ambas direcciones.

En algunas ocasiones la replicación del ADN se produce en una sola dirección.

Estos casos tan particulares ocurren en el ADN mitocondrial, algunos plásmidos de
bacterias u en algunos fagos monocatenarios.

- La replicación es semidiscontinua

Las ADN polimerasas, enzimas que se encargan de la síntesis de las nuevas

cadenas de ADN únicamente pueden sintetizar en dirección 5’ → 3’. Esto, para una
de las cadenas, es normal, porque puede sintetizarse de forma continua. Sin
embargo, para la otra es un problema.

Las células han ingeniado una curiosa forma de sintetizar la nueva cadena de ADN
3’ → 5’: a trocitos. Gracias a este mecanismo, las ADN polimerasas van
sintetizando pequeños fragmentos de ADN en la dirección normal (5’ → 3’), que
luego otras enzimas, las ADN ligasas, se encargan de unir, formando la nueva
cadena. A esta cadena se la conoce como “cadena rezagada”.

FASES DE LA REPLICACIÓN

El proceso de replicación del ADN se puede dividir en 3 subprocesos: iniciación,

elongación y terminación.

Iniciación

En este punto del genoma la helicasa, un enzima capaz de romper las uniones entre
las bases nitrogenadas de ambas cadenas de ADN, “abre” la doble hélice para
permitir la actuación del resto de enzimas. Luego, unas proteínas de unión a cadena
simple se unen a cada una de las cadenas, evitando así que las dos cadenas se
vuelvan a unir entre ellas.

El ADN es una doble hélice y, como tal, si la abrimos por ambos lados, la parte que
todavía está cerrada puede enrollarse de forma excesiva, causando graves daños
en la molécula de ADN. Las células utilizan un tipo de enzimas, las topoisomerasas,
para aliviar este enrollamiento excesivo durante la replicación.

Elongación

Tras la iniciación del proceso replicativo, las ADN polimerasas utilizan las cadenas
simples de la molécula madre de ADN para sintetizar, siempre en dirección 5’ → 3’,
las nuevas cadenas de ADN. Para ello, es necesario que una enzima, la ADN
primasa, le proporcione una secuencia corta de ARN sobre la que sintetizar la nueva
cadena. A esta secuencia corta de nucleótidos se le denomina “cebador” o “primer”.

Una vez colocado el cebador, en la cadena adelantada el ADN polimerasa procede

de forma normal, hasta conseguir sintetizar toda la nueva cadena de ADN. No
obstante, en la cadena rezagada, la cosa se complica un poco más.

En la cadena rezagada, el ADN polimerasa va sintetizando “trocitos” de cadena en

dirección 5’ → 3’. A estos fragmentos se los conoce como “fragmentos de Okazaki”.
Cuando la ADN polimerasa que está sintetizando uno de estos fragmentos se
encuentra con el extremo del siguiente, elimina el cebador y la ADN ligasa une los
dos fragmentos de Okazaki en uno solo. Así hasta que se logra sintetizar toda la
cadena rezagada.

Terminación

Cuando el genoma ha sido completamente duplicado, las ADN polimerasas eliminan

los últimos cebadores y las ADN ligasas terminan de unir los fragmentos de Okazaki
restantes. Ahora las dos dobles hélices de ADN están aptas para el comienzo de
una nueva división celular. Para ello, primero debe compactarse en forma de
cromatina y luego en forma de cromosomas.
 LAS MUTACIONES GENÉTICAS

Las mutaciones genéticas son cambios en la secuencia de ADN que pueden ocurrir de
manera natural o ser inducidos por factores externos, como la radiación o ciertos productos
químicos. El ADN es la molécula que contiene la información genética de un organismo, y
está compuesta por unidades llamadas nucleótidos. Cada nucleótido consiste en un azúcar,
un grupo fosfato y una base nitrogenada.
Cuando ocurre una mutación, puede afectar a un solo nucleótido oa segmentos más largos
del ADN. Hay diferentes tipos de mutaciones genéticas, y aquí hay algunas de las
principales:
1. Sustitución de nucleótidos: Una base nitrogenada es reemplazada por otra. Puede
ser "silenciosa", es decir, no afectar a la proteína resultante, o puede cambiar el
código genético y dar lugar a una proteína diferente.
2. Inserción o eliminación de nucleótidos: Pueden ocurrir adiciones o eliminaciones de
bases nitrogenadas en la secuencia de ADN. Esto puede causar un cambio en la
"lectura" del código genético, alterando la información para la síntesis de proteínas.
3. Duplicación: Un segmento de ADN se duplica, creando copias adicionales de la
información genética. Esto puede llevar a la aparición de genes adicionales.
4. Inversión: Un segmento de ADN se invierte en la secuencia, cambiando el orden de
las bases nitrogenadas.
5. Translocación: Segmentos de ADN se intercambian entre cromosomas no
homólogos.
Las mutaciones pueden ocurrir espontáneamente debido a errores durante la replicación del
ADN, exposición a radiación, sustancias químicas o agentes mutagénicos. También pueden
ser heredadas si ocurren en las células germinales (óvulos o espermatozoides) de un
individuo y se transmiten a la descendencia.

Algunas mutaciones pueden ser neutras y no tener un impacto significativo en la función del
organismo. De hecho, las mutaciones son la base de la variabilidad genética, que es
esencial para la evolución de las especies. Sin embargo, ciertas mutaciones pueden
contribuir al desarrollo de enfermedades genéticas o aumentar el riesgo de ciertos
trastornos.

MUTACIONES CONGÉNITAS Y ADQUIRIDAS

Las mutaciones genéticas pueden ser clasificadas en dos categorías principales:

mutaciones congénitas y mutaciones adquiridas. A continuación, se presentan algunos
aspectos relacionados con estas dos categorías de mutaciones:
Mutaciones congénitas:
● Son mutaciones que ocurren durante el desarrollo fetal previo al nacimiento.
● Son causadas por problemas en el desarrollo fetal y pueden afectar la apariencia, el
desarrollo o el funcionamiento del bebé.
● Pueden ser causadas por factores genéticos, ambientales o una combinación de
ambos.
● Algunos ejemplos de malformaciones congénitas incluyen anencefalia, microcefalia,
espina bífida, entropión, micro y macroftalmias, catarata congénita y coloboma de
iris
Mutaciones adquiridas:
● Son mutaciones que ocurren después del nacimiento del bebé.
● Son causadas por factores ambientales o externos, como radiación, químicos
mutagénicos, infecciones virales, entre otros.
● Aunque estas mutaciones pueden ser causadas por factores externos, es posible
que también haya una componente genética predispuesta que facilite su ocurrencia.
● Algunos ejemplos de mutaciones adquiridas incluyen enfermedades
neurodegenerativas, cáncer y trastornos autoinmunitarios

Aunque las mutaciones congénitas son causadas por factores genéticos, no todos los
embarazos con malformaciones congénitas tienen que ser genéticas. Por otro lado, las
mutaciones adquiridas pueden ser causadas por factores ambientales, pero es posible que
también haya una componente genética predispuesta que facilite su ocurrencia

Existen varios tipos de mutaciones genéticas, que se pueden clasificar de diferentes

maneras. A continuación, se presentan algunos de los tipos de mutaciones más comunes:
1. Mutaciones génicas o puntuales: Son mutaciones que afectan a un solo gen y
pueden ser de diferentes tipos, como mutaciones silenciosas, missense, nonsense,
inserciones o eliminaciones, entre otras
2. Mutaciones cromosómicas: Son mutaciones que afectan a un segmento
cromosómico que incluye varios genes. Pueden ser de diferentes tipos, como
deleciones, duplicaciones, inversiones o translocaciones
3. Mutaciones genómicas: Son mutaciones que afectan a cromosomas completos o a
juegos cromosómicos completos. Pueden ser de diferentes tipos, como aneuploidías
o poliploidías
 4. Mutaciones somáticas: Son mutaciones que ocurren en células no reproductoras y
no se transmiten a la descendencia
5. Mutaciones germinales: Son mutaciones que ocurren en células reproductoras y se
transmiten a la descendencia

Es importante tener en cuenta que las mutaciones pueden tener diferentes efectos en la
salud, desde no tener ningún efecto hasta causar enfermedades genéticas graves. Además,
algunas mutaciones pueden ser beneficiosas y contribuir a la evolución de las especies. La
comprensión de los diferentes tipos de mutaciones es importante en la investigación médica
y genética, ya que puede ayudar a identificar las causas de las enfermedades genéticas y
desarrollar tratamientos efectivos.

ENFERMEDADES RELACIONADAS

Las enfermedades genéticas son trastornos causados ​por mutaciones en los genes, lo que
lleva a cambios en las proteínas que estos genes codifican. Estas mutaciones pueden
afectar el desarrollo normal, la función y la regulación de las células en el cuerpo. Aquí hay
algunos ejemplos de enfermedades genéticas:

1. Enfermedades autosómicas dominantes: Estas enfermedades son causadas por una

mutación en un solo gen en uno de los cromosomas autosómicos (cromosomas no
sexuales). Un solo gen mutado de uno de los padres es suficiente para transmitir la
enfermedad. Los ejemplos incluyen la enfermedad de Huntington y la
neurofibromatosis tipo 1.

2. Enfermedades autosómicas recesivas: En este caso, ambas copias de un gen (uno

de cada progenitor) deben estar mutadas para que la enfermedad se manifieste.
Ejemplos incluyen la fibrosis química, la anemia de células falciformes y la
enfermedad de Tay-Sachs.

3. Enfermedades ligadas al cromosoma X: Estas enfermedades están relacionadas con

genes en el cromosoma X. Como los hombres tienen solo un cromosoma X, las
mutaciones en este cromosoma tienden a tener efectos más pronunciados en ellos.
Los ejemplos incluyen la distrofia muscular de Duchenne y la hemofilia.

4. Enfermedades cromosómicas numéricas: Estas enfermedades son causadas por un

número anormal de cromosomas. El síndrome de Down, por ejemplo, es causado
por la presencia de una copia adicional del cromosoma 21 (trisomía 21).

5. Enfermedades multifactoriales: Algunas enfermedades resultan de la interacción de

múltiples genes con factores ambientales. Los ejemplos incluyen la diabetes tipo 2 y
algunas formas de cáncer.
4. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

1) Se tiene la secuencia de desoxirribonucleótidos del proto-oncogen BRAF, que

se encuentra en el locus 7q34 (cromosoma 7, brazo q, región 3, banda 4):
Imagen 1. Locus del Proto-oncogen BRAF (7q34)
Fuente: https://www.cytotest.com/tercshow.asp?ID=2652

2) El proto-oncogen BRAF tiene 190753 pb, a partir del nucleótido 5001 hasta
195753 del ADN. A partir de este gen resulta el ARNm conformado por 18
exones. El ARNm tiene 2947 pb
− Exón 1: 5001…5199 (199 pb)
− Exón 2: 79553…79654 (102 pb)
− Exón 3: 94893…95156 (264 pb)
− Exón 4: 120770...120873 (104 pb)
− Exón 5: ​121703…121805 (103 pb)
− Exón 6: 128205…128353 (149 pb)
− Exón 7: 129284…129403 (120 pb)
− Exón 8: ​135298…135457 (160 pb)
− Exón 9: 142181…142217 (37 pb)
− Exón 10: 146608...146744 (137 pb)
− Exón 11: ​148072…148189 (118 pb)
− Exón 12: 151690…151774 (85 pb)
− Exón 13: 152677…152853 (177 pb)
− Exón 14: ​175532…175578 (47 pb)
− Exón 15: 176372…176490 (119 pb)
− Exón 16: 180347…180478 (132 pb)
− Exón 17: ​189819…189953 (135 pb)
− Exón 18: 194995…195753 (759 pb)
3) La mutación más común que ocurre en el proto-oncogen BRAF es la V600E,
ubicada en el exón 15. Esto significa que el codón 600 de este gen, que codifica
la valina (V), sufre mutación de sustitución y resulta en un codón que traduce el
ácido glutámico (E) (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/588282806)

EXON 15 normal (39 codones)

582 583 584 585 586 587 588 589 590 591 592 593 594 595 596 597
598 599 600
AT ATA TTT CTT CAT GAA GAC CTC ACA GTA AAA ATA GGT GAT TTT GGT CTA
GCT ACA GTG
601 602 603 604 605 606 607 608 609 610 611 612 613 614 615 616
617 618 619 620
 AAA TCT CGA TGG AGT GGG TCC CAT CAG TTT GAA CAG TTG TCT GGA TCC ATT
TTG TGG ATG

Mutación génica por sustitución en el gen BRAF (V600E)

582 583 584 585 586 587 588 589 590 591 592 593 594 595 596 597
598 599 600
AT ATA TTT CTT CAT GAA GAC CTC ACA GTA AAA ATA GGT GAT TTT GGT CTA
GCT ACA GAG
601 602 603 604 605 606 607 608 609 610 611 612 613 614 615 616
617 618 619 620
AAA TCT CGA TGG AGT GGG TCC CAT CAG TTT GAA CAG TTG TCT GGA TCC ATT
TTG TGG ATG

Imagen 2. Mutaciones génicas que ocurren en el exón 15 del Proto-oncogen BRAF.

Fuente: https://www.mdpi.com/2072-6694/12/2/430/htm

4) Identifica los nuevos codones que se forman en las mutaciones encontradas en

el exón 15 del proto-oncogen BRAF, de acuerdo a la Imagen 2.

la sustitución de una timina (T) por una adenina (A) donde los codones nuevos que se
forman son debido a la mutación V600E, el codón se convierte en GAG, lo que resulta en un
cambio de aminoácido en la proteína codificada de la mutación V600E implica un cambio en
el aminoácido valina (V) por glutamato (E) en la posición 600 de la proteína BRAF.

5) Interpreta las mutaciones y relaciona los tipos de cánceres con los cuales están
asociadas.
Esta mutación en particular está más comúnmente asociada con el melanoma, que es un
tipo de cáncer de piel. La presencia de la mutación V600E en BRAF se encuentra en
aproximadamente el 50% de los melanomas cutáneos. Además del melanoma, también se
ha observado esta mutación en otros tipos de cáncer, aunque con menor frecuencia.
Algunos de estos tipos de cáncer incluyen:
 ● Cáncer colorrectal: La mutación BRAF V600E se ha identificado en un subconjunto
de pacientes con cáncer colorrectal, aunque es menos común en comparación con
el melanoma.
● Cáncer de tiroides: Se ha observado la mutación BRAF V600E en algunos casos de
cáncer de tiroides papilar, que es el tipo más común de cáncer de tiroides.
● Cáncer de ovario: En algunos estudios, se ha informado que la mutación BRAF
V600E está presente en una proporción pequeña de casos de cáncer epitelial de
ovario

6) Maneras en como inhibir a la replicación de la mutación propuestas.

Para inhibir la replicación de la mutación V600E en el protooncogén BRAF, se pueden

explorar diferentes estrategias terapéuticas. Es importante destacar que la inhibición de la
replicación de la mutación V600E podría ser un enfoque clave en el tratamiento del cáncer
asociado con esta mutación. Algunas de las estrategias posibles incluyen:

● Inhibidores de BRAF: Se han desarrollado fármacos específicos que actúan como

inhibidores de la proteína BRAF mutada. Estos inhibidores están diseñados para
bloquear la actividad de la proteína mutada y, por lo tanto, detener la señalización
anormal que conduce al crecimiento descontrolado de las células cancerosas. Varios
inhibidores de BRAF, como vemurafenib y dabrafenib, han demostrado eficacia en el
tratamiento del melanoma con la mutación V600E.

● Inhibidores de MEK: La proteína MEK es un componente clave en la vía de

señalización que sigue a la activación de BRAF. Inhibidores de MEK, como
trametinib, se utilizan para bloquear la transmisión de la señal hacia abajo de la vía,
lo que puede ayudar a inhibir el crecimiento de las células cancerosas.

● Terapias combinadas: Se ha observado que la combinación de inhibidores de BRAF

y MEK mejora la eficacia del tratamiento en comparación con el uso de un solo
fármaco. Esta estrategia dual tiene como objetivo bloquear múltiples puntos en la vía
de señalización, reduciendo así la probabilidad de resistencia a la terapia.

● Inmunoterapia: La inmunoterapia, como los inhibidores de puntos de control

inmunológico (por ejemplo, ipilimumab), ha demostrado ser eficaz en algunos
pacientes con melanoma. La combinación de inmunoterapia y terapias dirigidas
puede ser una estrategia para mejorar las respuestas antitumorales

Es fundamental que la elección del tratamiento se base en la evaluación de factores

individuales del paciente, como la salud general, la presencia de otras enfermedades y la
respuesta del tumor a tratamientos anteriores.

4. CONCLUSIONES

Las mutaciones en protooncogenes son cambios genéticos que pueden convertir un

protooncogén en un oncogén, lo que puede contribuir al desarrollo de cáncer. Los
protooncogenes son genes que regulan el crecimiento y la división celular normales, y
cuando sufren mutaciones, pueden convertirse en oncogenes, que promueven un
crecimiento celular descontrolado. Un ejemplo de mutación en un protooncogén es la
mutación del gen Ras, que puede llevar a la activación constante de la proteína Ras y
contribuir al desarrollo de cáncer.
En relación a la replicación, transcripción y traducción del ADN, estos son procesos
fundamentales en la expresión génica y la síntesis de proteínas:
● Replicación del ADN: Es el proceso mediante el cual una célula copia su ADN antes
de la división celular. Durante la replicación, la doble hélice de ADN se desenrolla y
se separa en dos hebras, y cada hebra sirve como molde para la síntesis de una
nueva hebra complementaria. Este proceso asegura que cada célula hija reciba una
copia completa del ADN original.
● Transcripción: Es el proceso mediante el cual la información genética codificada en
el ADN se transfiere al ARN mensajero (ARNm). Durante la transcripción, una
enzima llamada ARN polimerasa sintetiza una cadena de ARNm complementaria a
una de las hebras de ADN. El ARNm lleva la información genética desde el núcleo
de la célula hasta los ribosomas, donde se lleva a cabo la traducción.
● Traducción: Es el proceso mediante el cual la información contenida en el ARNm se
utiliza para sintetizar proteínas. Durante la traducción, los ribosomas leen el ARNm y
ensamblan una cadena de aminoácidos para formar una proteína específica, de
acuerdo con el código genético.
Estos procesos son fundamentales para la expresión génica y la síntesis de proteínas, y
cualquier mutación que afecte a estos procesos puede tener consecuencias significativas
para la función celular y el desarrollo de enfermedades.
Las mutaciones genéticas pueden ocurrir en cualquier etapa de estos procesos, y su
comprensión es crucial para la investigación médica y la comprensión de las enfermedades
genéticas

La mutación BRAF V600E, ubicada en el exón 15, es una mutación específica asociada con
varios tipos de cáncer. Esta mutación se encuentra con mayor frecuencia en el carcinoma
papilar de tiroides (CPT), con una prevalencia que varía entre el 29% y el 83% en diferentes
poblaciones. Numerosos estudios han demostrado su asociación con características
clínico-patológicas agresivas y una mayor recurrencia de la enfermedad. Además, se ha
observado que la mutación BRAF V600E se asocia con un mayor riesgo de persistencia y
recidiva en el carcinoma papilar de tiroides, lo que puede influir en las decisiones de
tratamiento y seguimiento.
Además del carcinoma papilar de tiroides, la mutación BRAF V600E también se ha
identificado en otros tipos de cáncer, como el cáncer colorrectal. En este contexto, las
mutaciones del gen BRAF se han observado en un 5-15% de los carcinomas de colon y
recto, y se asocian con características clínicas específicas, como inestabilidad microsatelital
y metilación del promotor del gen reparador del ADN MLH1. La presencia de la mutación
BRAF V600E en pacientes con cáncer colorrectal puede tener implicaciones en el
pronóstico y la respuesta al tratamiento, lo que resalta la importancia de su detección en el
contexto clínico.

6. BIBLIOGRAFÍA

1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.

2) Del Castillo V, Uranga RDZafra G. Genética Clínica. 2da. Ed. México D.F.:
Editorial el Manual Moderno S.A. de C.V.; 2019
3) Jorde LB, Carey JC, Bamshad MJ. Genética Médica. 5ta ed. Barcelona: Elsevier
Inc.; 2016.
http://biomodel.uah.es/lab/cibertorio/analysis/trans.htm
https://web.expasy.org/translate/