GENOMA MICROBIANO

GENOMA MICROBIANO
Un genoma microbiano es una secuencia completa del cdigo gentico de un
microbio determinado. El tamao del genoma de los microbios puede variar
considerablemente, el tamao final de un organismo, no tiene por qu tener relacin
con el tamao de su cdigo gentico.
Su conocimiento permite una mejor comprensin de la patogenia, con aplicaciones en
la prevencin, en el diagnstico y en el tratamiento de las enfermedades infecciosas.
Conocida la dinmica de los mecanismos de invasin, produccin de toxinas,
capacidad de adaptacin a ecosistemas adversos y otras mltiples posibilidades de
variacin, pueden disearse nuevas vacunas ms especficas, as como establecerse
combinaciones interespecies, o utilizarse bacterias avirulentas de muy fcil cultivo
para producir en forma industrial antgenos de grmenes de crecimiento fastidioso. En
el campo de los antibiticos, se abren perspectivas hacia lneas absolutamente
distintas, con drogas capaces de bloquear determinados pasos en cadenas
metablicas vitales. Ya existen mltiples aplicaciones de la gentica en diagnstico
microbiolgico, con tcnicas que indudablemente se irn simplificando y
perfeccionando con el conocimiento de la entera secuencia del genoma bacteriano:
hibridacin, reaccin de polimerasa en cadena, etc. Por ltimo, el conocimiento del
genoma tambin permitir la utilizacin benfica, a escala industrial, de algunos
microorganismos en la produccin de hormonas, vitaminas, aminocidos y
antibiticos.
Nucloide
Las clulas procariotas y eucariotas se distinguieron desde el principio sobre la
siguiente base estructural: la estructura equivalente al ncleo eucariota (esa compleja
estructura rodeada por membranas) no se observaba en procariotas.
El tamao de las bacterias dificult los estudios acerca del "ncleo" bacteriano, sin
embargo en el curso de las investigaciones destinadas a su esclarecimiento la
utilizacin de los mtodos citoqumicos y la microscopa electrnica demostraron su
existencia.
El gran poder de resolucin del microscopio electrnico no solo amplia la tpica forma
bacteriana, sino que revela claramente la organizacin procariota.
Hoy se conoce que al igual que del resto de seres vivos (celulares) poseen ADN, y
que el mismo no se haya distribuido al azar en el citoplasma, sino en una zona
particular denominada regin nuclear o nucleoide sin estar separado por una unidad
de membrana
Cromosoma

Este cromosoma se localiza en un espacio denominado nucleoide, el cual est

separado del citoplasma (no redeado por una membrana). La informacin hereditaria de
las bacterias se encuentra fundamentalmente en un nico cromosoma consistente en una molcula
de ADN doble hlice circular. El tamao de esta molcula vara segn la especie bacteriana de 0,1 x
10 a8x10 dalton. Estudios recientes muestran que el nucleoide est orientado y
altamente organizado dentro de la clula, dicha organizacin es transmitida de una
generacin a la siguiente por segregacin progresiva de los nuevos cromosomas. El
modelo ms comn de segregacin cromosmica es mediante la maquinara
encargada de la divisin celular, sin embargo, el modo de segregacin vara de una
especie a otra.
Existen tambin protenas involucradas en el mantenimiento de la estructura del DNA,
a stas protenas de unin a DNA se les ha llamado protenas tipo histonas debido a
que comparten con las histonas su bajo peso molecular, alto nmero de copias, carga
electrosttica y la capacidad de unirse al DNA. Sin embargo no queda claro si existe
homologa entre ellas, ya que a nivel de secuencia y estructura la similitud no es muy
fuerte. Se ha descubierto que estas protenas son reguladores pleiotrpicos
implicados en un gran nmero de respuestas a cambios del ambiente y juegan un
doble papel en la estructuracin de DNA y en la regulacin de la trascripcin.
Los cromosomas bacterianos son por lo general unas mil veces ms largos que las
clulas en las cuales residen por lo que los procesos de replicacin, segregacin,
transcripcin y traduccin de esta enorme masa de DNA plantea un reto en la
organizacin espacial, este cromosoma circular existe dentro de la clula como una
estructura compacta y altamente
organizada en dominios super
helicoidales separados. Al menos
un locus e incluso varios de ellos
estn especficamente
posicionados dentro de la clula y
el resto del cromosoma se
mantiene linearmente organizado
con respecto a estos marcadores. La compactacin del DNA
se mantiene
gracias al balance de fuerzas, incluyendo el
super
enrollamiento, compactacin por protenas,
transcripcin, transercin (transcripcin y
traduccin
acopladas con la insercin del polipptido
naciente a
la membrana) y las interacciones RNADNA.

Superenrollamiento

La molcula de ADN puede plegarse sobre s misma para originar estructuras ms

compactas.
Cuando los extremos de la molcula de ADN no pueden rotar libremente, bien porque
estn unidos por enlaces covalentes formando molculas circulares, o estn
asociados con protenas, adquieren una conformacin tridimensional superenrollada .
En esta estructura la doble hlice como un todo puede estar rotada hacia la derecha
(superenrollado negativo) o hacia la izquierda (superenrollado positivo); mientras el
superenrollado positivo favorece la formacin de la hlice ms compacta, el negativo
favorece el desenrollamiento de la hlice y la separacin de las dos hebras, que como
ya fue sealado es necesario para las funciones del ADN.
ADN superenrollado. En
el centro aparece una
molcula de ADN circular,
totalmente relajada. A la
izquierda, el mismo ADN
con superenrollamiento
negativo, y a la derecha,
con superenrolla-miento
positivo. Obsrvese que
en el superenrollamiento
el eje de la doble hlice
se enrolla sobre s, unas veces en sentido derecho y otras en sentido izquierdo.
El ADN bacteriano circular presenta un superenrollamiento negativo, en tanto el ADN
de los cromosomas de eucariotas no parece estar superenrollado por su asociacin
con protenas que controlan el plegamiento del ADN.
Las diferentes formas y grados de superenrollamiento del ADN se refieren como
topoismeros, y las enzimas que convierten unos en otros reciben el nombre de
topoisomerasas. Los diferentes topoismeros del ADN pueden ser separados por
electroforesis en gel de agarosa, donde cada topoismero tiene una movilidad
diferente constituyendo bandas independientes. La molcula que muestre un mayor
grado de superenrollamiento realizar los movimientos migratorios ms rpidos por
presentar una estructura ms compacta.
Mutacin
Una mutacin es un cambio heredable en la secuencia de bases de los cidos
nucleicos que constituyen el genoma de un organismo; sta se produce en
condiciones naturales con baja frecuencia y se deben fundamentalmente a errores en
los procesos de replicacin del ADN. Adems de las mutaciones espontneas, pueden
ocurrir mutaciones inducidas, provocadas por agentes mutagnicos (qumicos, fsicos
o biolgicos) que proporcionan una herramienta para introducir cambios en el genoma

bacteriano en el laboratorio. La mayora de estos errores o alteraciones introducidos

en el genoma, son corregidos por los mecanismos de reparacin del ADN, pero
algunos escapan a la correccin y pueden originar cambios heredables que
proporcionan una diversidad gentica. Dada la baja frecuencia de mutaciones, solo
los microorganismos con alta tasa de crecimiento, pueden alcanzar cifras
suficientemente altas como para que sean detectables. Las mutaciones en las
bacterias, frecuentemente afectan propiedades fcilmente reconocibles como
requerimientos nutricionales, morfologa o resistencia antibitica. Algunas mutaciones
pueden conferir al mutante una ventaja frente a la cepa que le dio origen, bajo ciertas
condiciones ambientales, de manera que la progenie de dicha clula mutante es
capaz de superar el crecimiento de la cepa original y sustituirla. Este es el caso de las
mutaciones que confieren resistencia a los antibiticos, en las que el mutante
resistente se seleccionar en un ambiente en el que las bacterias estn expuestas al
antibitico en cuestin. Este tipo de mutaciones se denominan selectivas. En cambio,
frente a una mutacin no selectiva la bacteria no adquiere beneficios en relacin a su
progenitor, por ejemplo la prdida de pigmento de las colonias de Serratia marcescens
que se observa cuando se cultivan en agar. Las mutaciones puntuales, son aquellas
que implican un cambio en una nica base; pueden provocar que se cambie un
aminocido por otro en el producto proteico (mutacin por cambio de sentido). Otras
veces no se traducen en ningn cambio (mutacin silenciosa), dado que como
sabemos existe ms de un codn para cada aminocido. Tambin puede suceder que
el codn se convierta en una seal de terminacin (mutacin sin sentido) y en ese
caso se traducir una protena incompleta no funcional. Las deleciones y las
inserciones producen cambios ms notorios en el ADN, provocando la prdida o la
incorporacin de cualquier nmero de pares de bases. Por lo tanto, siempre que ste
no sea mltiplo de tres se producirn mutaciones por desplazamiento del marco de
lectura, que suele provocar la prdida total del fenotipo. Muchas mutaciones que
originan un producto proteico defectuoso, pueden ser suprimidas por un segundo
evento de mutacin en otro sitio del genoma (mutaciones supresoras), restaurndose
el fenotipo original.
Recombinacin
Se define por recombinacin al proceso en que tenga lugar la formacin de un nuevo
ADN a partir de molculas destruidas, de manera que la informacin gentica
procedente de cada molcula de ADN original estar presente en las nuevas. Es un
proceso celular esencial, catalizado por enzimas que la clula codifica y regula con un
propsito.
La recombinacin constituye:
1. Fuente de variabilidad gentica.
2. Intercambio fsico de segmentos.

3. Valor regulatorio: puede tener como resultado la activacin o inactivacin de

los genes.
4. Una va de reparacin.
En el caso de las bacterias son tres los procesos conocidos que conducen a la
formacin de un nuevo ADN. En orden cronolgico de su descubrimiento, estos
procesos son:
1. Transformacin.
2. Conjugacin.
3. Transduccin.
En los organismos eucariticos, la clula diploide formada por la fusin de dos clulas
sensibles haploides (gametos) se denomina cigoto. En las bacterias pueden formarse
tambin cigotos, slo que no existe fusin de clulas sin transferencia de parte del
material gentico de una clula donadora a otra aceptora, aportndole a esta ltima un
estado diploide parcial (formacin de un gameto parcial denominado merocigoto).
El genoma original de la clula receptora se conoce como endogenote y el fragmento de
ADN introducido en ella, exogenote. El exogenote y endogenote generalmente se aparean
(mecanismo parasexual) y recombinan de inmediato despus de la transferencia,
formndose un ADN recombinante por la integracin parcial o total del exogenote; si esto
no ocurriera, el exogenote puede persistir y replicarse si dispone de los elementos
genticos necesarios para su propia replicacin, de manera que los merocigotos den lugar
a un clon de clulas parcialmente diploides; si carece de esos elementos, persiste, pero
no se replica; este fenmeno se ha observado solamente en la transduccin y se conoce
con el nombre de transduccin abortiva. Finalmente, el exogenote puede ser degradado
por procesos enzimticos (restriccin del hospedador).
Transformacin

Es la transferencia de un fragmento de ADN de un genoma donador a travs de la

membrana celular receptora y la incorporacin de este fragmento en el genoma de
esta clula. Puede ser:
1. Homloga: transferencia o transformacin de material gentico de la misma
especie.
2. Heterloga: transferencia o transformacin de material gentico en especies
diferentes.
Horizontal: transformacin heterloga que ocurre en ambientes naturales.

Este mecanismo de recombinacin gentica fue descubierto en el Streptococcus

pneumoniae. Este microorganismo produce colonias lisas (L) (capsuladas y virulentas)
que en repetidos subcultivos se tornan rugosas (R) (no capsuladas y no virulentas).
Griffith, en 1928, observ que cuando se
inoculaban a un ratn
clulas R provenientes de un cultivo liso
tipo I junto
con clulas L provenientes de un cultivo tipo II y
muertas por el calor, el ratn mora en
pocos das y de la sangre de los mismos
slo se poda aislar clulas lisas tipo II. Se
comprob tambin que esa propiedad
transferida era hereditaria y se
denomin principio transformador, que en
1944 fue identificado como ADN por O.T. Avery y otros.
El factor limitante en la produccin de transformantes es la competencia de la
poblacin celular receptora para incorporar ADN transformante.
Estado de competencia natural. Es el estado donde la clula tiene la habilidad de
unir e interanalizar ADN exgeno.
Factores crticos que determinan la frecuencia de transformacin
1. Tamao de los fragmentos de ADN.
2. Estado fisiolgico de la bacteria receptora.
3. Concentracin de ADN.
Se conoce que las clulas competentes producen una protena susceptible de ser
aislada del medio y utilizada para conferir competencia a otras clulas, y pudiera ser
un componente de la membrana que cataliza la incorporacin del ADN a una enzima
que degrada algn componente de la superficie celular desenmascarando el receptor
para el ADN.
Este mecanismo de recombinacin ha sido estudiado en: Streptococcus pneumoniae,
Haemophilus influenzae, Neisseriaspp., Bacillus spp. y Escherichia coli (con altas
concentraciones de ion calcio), en los cuales el estado de competencia es regulado en
respuesta a seales clula-clula y(o) condiciones nutricionales.
Barreras naturales que inciden en la transformacin
1. Sistemas de metilacin (modificacin)-restriccin de clulas.
2. Superficie celular.
3. Condiciones ambientales.

Existen evidencias experimentales de que tanto el ADN cromosomal como el

plasmdico estn sujetos a intercambio gentico mediante la transformacin, y existen
estudios desde 1989, basados en la hiptesis de que la transformacin puede ser un
poderoso mecanismo de transferencia horizontal de genes dentro de las poblaciones
naturales y en la especiacin y evolucin bacteriana.

Transduccin

Es el mecanismo gentico mediante el cual un fragmento del genoma bacteriano se

incorpora a un virin en formacin (fago temperante), de manera que cuando esta
partcula viral infecta a otra clula, le inocula parte del material gentico del hospedero
anterior.
Tipos de transduccin
1. Generalizada: es aquella en que cualquiera de los genes del genoma
bacteriano tiene probabilidades de ser transportado por el fago.
2. Restringida: slo se incorporan los genes contiguos al lugar de insercin del
profago.
3. Fago temperante: es aquel bacterifago que habitualmente no realiza un ciclo
ltico, se reproduce en sincrona con el hospedero y produce clonos celulares
infectados. Este estado conferido a una clula se denomina lisogenia y el
genoma viral presente en ellas se denomina profago.
4. De alta frecuencia: ocurre cuando la clula recibe un fago restringido y uno
normal, de manera que el resultado de la maduracin de ambos determina que
el 50 % sea capaz de transducir una propiedad gentica.
5. Abortiva: tiene lugar cuando existe un fracaso en la integracin del exogenote
al genoma bacteriano, este persiste pero sin replicarse, de manera que slo
una de las clulas hijas lo recibe.
En la transduccin abortiva de una bacteria his (-) por un gen his (+), el exogenote his
(+) produce enzimas para la sntesis de la histidina. Si sembramos esta bacteria en un
medio carente de histidina, el cigote crece y se divide, pero el exogenote no se
replica, por lo que una de las hijas no recibir el gen his (+) y continuar dividindose
mientras le queden enzimas; en cambio, la otra que s recibe el his (+) seguir
fabricando enzimas; en la siguiente divisin ocurre el mismo fenmeno. El resultado
es la formacin de colonias diminutas de crecimiento lento por las his (-) y colonias
grandes por las his (+), las primeras son representativas de una transduccin abortiva.

una

Transduccin abortiva: en cada divisin, slo una de las

clulas recibe el gen activo. La otra contina en
unas cuantas divisiones celulares hasta que el
producto de gen activo (por ejemplo,
enzima) es diluido. La siembra de un
gen transductantes abortivo produce
colonia diminuta, en la cual solamente
una clula es capaz de ulterior
crecimiento y divisin.

Conjugacin

Es la transferencia de material gentico en una sola direccin. Implica la unin de dos

estirpes bacterianas diferenciadas sexualmente. El elemento gentico que dirige la
propiedad hereditaria de ser donador se denominafactor o plsmido F (de fertilidad).
La transferencia del genoma bacteriano es una consecuencia secundaria de la
transferencia plasmdica y depende de la integracin del genoma y el plsmido en la
clula donadora.
Plsmidos
Elementos genticos (ADN) extracromosmicos, circulares, de doble cadena, con
peso molecular entre 3 106 y 1 108. Pueden contener hasta 100 genes. El contenido
en G + C flucta entre 44 y 50 %.
Se replican siempre que se encuentren en su forma circular, son sensibles a los
colorantes de acridina y a la luz ultravioleta.
Proceso de la conjugacin
El proceso de conjugar y transferir una molcula de ADN plasmdico a su pareja de
conjugacin ocurre en dos etapas:
1. Formacin de un puente de conjugacin.
2. Paso del ADN plasmdico a travs del puente.
Ello se debe a la presencia de unos apndices especiales
llamados fimbrias conjugativas (o sexuales) en las clulas donadoras y a receptores
especficos en las receptoras. El paso intercelular de ADN es muy especfico y la
transferencia de otro material es escasa o nula.

El contacto entre la fimbria de conjugacin y el receptor pone en marcha el proceso.

Se rompe una cadena de ADN plasmdico y penetra en la cadena receptora, la ADN
polimerasa sintetiza una rplica del mismo en la receptora, mientras que la otra
permanece en la donadora; a partir de este momento, la cepa receptora adquiere la
capacidad de donar el ADN.
Las clulas que albergan un plsmido F se denominan F + y F- a las que carecen de l.
Cuando este plsmido se integra al genoma bacteriano, los clones sucesivos son
denominados HFr (alta frecuencia de recombinacin); este ltimo proceso es
reversible.
Cuando se mezclan clulas HFr con F- ocurre transferencia de ADN, pero esta vez,
como el plsmido y el genoma estn unidos (un solo replicn), a la clula receptora
pasa el ADN del plsmido y del genoma celular. Los marcadores del genoma
transferidos estn en dependencia del sitio de insercin del plsmido en el mismo.
La clula que recibe un plsmido con segmento de ADN genmico se denomina F' y si
incluye genes de funciones indispensables, su prdida produce muerte celular

Recombinacin en bacterias:
mecanismo de conjugacin.

Conjugacin en los diferentes grupos bacterianos

Formacin de una clula Hfr y Fa

partir de una clula F+.

Se ha observado este proceso en:

Bacterias gramnegativas: E. coli, Shigella spp., Salmonella spp.,

Proteus spp. y Pseudomonas aeruginosa.

Bacterias grampositivas: miembros del gnero Streptomyces

Referencias
http://actualidad.notizalia.com/ciencia-articulos/genoma-microbiano-el-codigogenetico-de-un-microbio-determinado/
http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0370-41062000000600003&script=sci_arttext
http://www.biblioteca.org.ar/libros/hipertextos%20de%20biologia/micro2.htm
http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0prelicin--00-0----0-10-0---0--0direct-10---4-------0-0l--11-es-50---20-about---00-0-1-00-0-0-11-1-0utfZz-800&a=d&cl=CL1&d=HASH144603c37e4fece4af332d.9.8.8

http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro2.htm
http://ciber-genetica.blogspot.mx/2011/04/el-cromosoma-bacteriano.html
https://es.scribd.com/doc/51939790/CROMOSOMA-BACTERIANO
http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0preclini--00-0----0-100---0---0direct-10---4-------0-0l--11-1l-50---20-about---00-0-1-00-0-0-11-1-0000&a=d&cl=CL1&d=HASHf3fc49133efc261abf5271.6.8.7
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/GeneticaBacteriana.pdf