Manual de Lab Inmunología

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Vicerrectoría de Docencia
Dirección General de Educación Superior
Facultad de Ciencias Químicas
PLAN DE ESTUDIOS (PE): Licenciatura en Químico Farmacobiólogo
ÁREA: Ciencias Microbiológicas
ASIGNATURA: Laboratorio de Inmunología
CÓDIGO: QFBS 261 L
CRÉDITOS:
FECHA: Febrero 2017
1
1. DATOS GENERALES
Nivel Educativo: Licenciatura
Nombre del Plan de Estudios: Licenciatura en Químico Farmacobiólogo
Modalidad Académica: Presencial
Nombre de la Asignatura: Laboratorio de Inmunología
Ubicación: Nivel formativo
Correlación:
Sin requisitos, pero es conveniente que haya cursado
Asignaturas Precedentes:
Microbiología y Bioquímica
No es secuencial, pero contribuye con Micología,
Bacteriología I, Bacteriología II, Virología,
Asignaturas Consecuentes:
Microbiología Médica Diagnóstica e Inmunología
Clínica
2. CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

Horas por semana Total de
Total de
créditos
Concepto horas por
Teoría Práctica por
periodo
periodo
Horas teoría y práctica
2 36
2
3. REVISIONES Y ACTUALIZACIONES
M.C. Alejandro César Ruiz Tagle
M.S.P. Oscar Pérez Toriz
Autores: M.C. Patricia Suarez Albores
M.C. Nidia Gary Pasos Salazar
M.S.P. Jesús Luzuriaga Galicia
Fecha de diseño: Mayo 2009
Fecha de la última actualización: Otoño 2019
Fecha de aprobación por parte de
la academia de área, departamento Febrero 2017
u otro.
M.C. Alejandro César Ruiz Tagle
Q.F.B. Oscar Pérez Toríz
M.C. Gloria León Tello
Revisores:
M.S.P. Jesús Luzuriaga Galicia
M.C. Juan Carlos Benítez Serrano
D.C. Estibaliz Sansinenea Royano
Se definieron el propósito y las competencias
profesionales
Sinopsis de la revisión y/o
Se actualizó la bibliografía
actualización:
Se establecieron criterios de evaluación basados en
competencias.
4. PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

Disciplina profesional: Químico Farmacobiólogo, Microbiólogo o áreas afines
Nivel académico: Mínimo Licenciatura, preferible Maestría o Doctorado en

un área afín
Experiencia docente: 3 años como docente en el área de la Inmunología a nivel
licenciatura o posgrado
Experiencia profesional: 2 años de trabajo en el área laboral o de investigación en
un área afín
5. PROPÓSITO:
Mediante el análisis de los componentes del sistema inmune se pretende que los alumnos
evalúen la participación de la inmunidad en el mantenimiento de la salud y también como
responsable de enfermedades cuando se encuentra alterada la respuesta inmune. El estudio
de desarrollo de la respuesta inmune permitirá al alumno vincular la información proporcionada
por la ejecución de los métodos inmunológicos del laboratorio clínico relacionado con el
diagnóstico. De esta forma se contribuye a la formación integral del profesionista capacitado
para desempeñarse en las áreas químico-clínico-biológicas con ética, compromiso social y
cuidado del medio ambiente.
.
3
6. COMPETENCIAS PROFESIONALES:
Con fundamento en la respuesta inmunitaria el alumno realiza, interpreta e informa de
reacciones inmunológicas de uso en el laboratorio clínico apegado a las normas de
bioseguridad y garantía de calidad vigentes aplicando principios éticos y de responsabilidad
social relacionadas con su actividad profesional. Emplea bases de datos para buscar, recuperar
y analizar información pertinente y relevante en el área de la inmunología. Actúa de manera
interdisciplinaria con profesionales de la salud en el análisis de resultados de pruebas
inmunológicas y de laboratorio para el diagnóstico, pronóstico, control y evaluación del estado
de salud de pacientes.
7. CONTENIDO. INDICE DE PRACTICAS
4
INDICE
NÚMERO DE LA TITULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA

PRÁCTICA
Práctica 1 Diluciones 3
Práctica 2 Toma de muestra 7
Práctica 3 Observación de leucocitos (cuenta diferencial) 10
Práctica 4 Determinación de grupo sanguíneo 12
Práctica 5 Determinación del título de anticuerpos ABO del 15

suero.
Práctica 6 Pruebas cruzadas 17
Práctica 7 Diagnóstico serológico de infecciones bacterianas 20

(Reacciones febriles)
Práctica 8 Diagnóstico serológico de sífilis 23
Práctica 9 Factor reumatoide 27
Práctica 10 Proteína C reactiva 29
Práctica 11 Determinación de antiestreptolisinas 31
Práctica 12 Determinación de la hormona gonadotropina 34

coriónica humana
Bibliografía 36
5
PRÁCTICA No. 1
DILUCIONES
Introducción
Se les llama diluciones a las soluciones con concentración menor obtenidas al agregar
volúmenes conocidos de diluyente a una solución de concentración conocida. Las diluciones
se expresan en forma de una proporción, por ejemplo 1/10 (1:10) donde la primera cifra o
numerador (1) corresponde al volumen de lo que se está diluyendo y la segunda cifra o
denominador (10) al volumen total en que se encuentra.
Objetivo
Aprenderá a calcular diluciones en forma directa o en serie.
Desarrollo
Así, una dilución 1/10 indica que se tiene un volumen de la solución original contenido o
diluido en 10 volúmenes totales, de los cuales 9 corresponden al diluyente. Dado que en una
dilución lo que se indica es la relación entre el volumen de la solución original y el volumen
total en que se encuentra, una dilución 1/10 puede prepararse de diferentes maneras:
Por ejemplo:
1 mL de muestra en 9 mL de diluyente
0.1 mL de muestra en 0.9 mL de diluyente
0.5 mL de muestra en 4.5 mL de diluyente
En la práctica el cálculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras diferentes

que cumplen ciertas expectativas, la dilución directa y la dilución en serie.
6
Dilución directa.
Para realizar una dilución directa se puede hacer uso de la siguiente expresión:
1/d=Vm/Vt donde 1/d= dilución

Vm= volumen de muestra
Vt= volumen total (volumen de diluyente + volumen de muestra)
Ejemplo N°1
Lleve 5 mL de muestra a una dilución 1/10.
Sustituyendo los valores conocidos tenemos:
1/d=1/10
Vm=5 mL
Vt= ?
Así:
1/10=5 mL/Vt
despejando Vt tenemos que Vt=10 x 5/1=50 mL
volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra
volumen de muestra = 50-5 = 45 mL
Ejemplo N°2
Prepare exactamente 200 mL de una dilución 1/50.
Sustituyendo los valores conocidos tenemos:
1/d=1/50
Vm=?
Vt= 200 mL
Así:
1/50=Vm/200
Despejando Vm tenemos que Vm=200 x 1/50=4 mL
7
Volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra

Volumen de diluyente = 200-4=196 mL
Sin embargo, las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es

necesario hacer una dilución alta por ejemplo 1/ 10 000, se desperdicia mucho reactivo o se
incurre en un error de medición. Así, una dilución 1/ 10 000 se prepararía con 1 mL de
muestra y 9 999 mL de diluyente o bien 9.999 mL de diluyente y 0.001 mL de muestra.
Dilución seriada
Este tipo de dilución soluciona los inconvenientes que presenta el cálculo directo de
las diluciones altas. Además, en microbiología permite el cálculo de la población microbiana
en la muestra de estudio, de la cual se toma una alícuota que se diluye en varios tubos y se
siembra por vertido en placa (ver figura 1). La diferencia entre la dilución de dos tubos
consecutivo se conoce como factor de dilución, siendo 2, 4 y 10 los más usados. En el
ejemplo de la dilución 1/ 10 000, la muestra se puede diluir 1/ 100 (Vm= 0.1 mL + 9.9 de
diluyente Vt= 10 mL) en un primer tubo y colocar 0.1 mL de esta dilución en un segundo
tubo con 9.9 de diluyente. El segundo tubo tendrá una dilución 1/ 100, sin embargo como la
muestra ya se encuentra diluida previamente 1/ 100, multiplicando sus denominadores
tenemos:
1/ 100 x 1/ 100= 1/ 10 000
8
Figura 1.Esquema e diluciones seriadas
En este caso el factor de dilución es de 100. Debe insistirse en que solo el primer tubo
lleva la alícuota de la muestra sin diluir, los demás tubos toman la alícuota ya diluida del tubo
previo. El número de tubos y las diluciones intermedias se plantean considerando el volumen
de los tubos así como el volumen mínimo que se puede medir fácil y exactamente con las
pipetas disponibles.
Cuestionario
1. ¿Cómo lograr exactamente 40 mL de una dilución 1:40000?
2. Obtener 60 mL de una dilución 108
3. Prepara 5 mL de una dilución 1:100000, utilizando diluciones seriadas
4. ¿Qué dilución se obtendrá si mezclo 2 mL de muestra en 58 mL de diluyente?
5. Para realizar diferentes pruebas de diagnóstico, usted requiere 500 µl de una dilución
1:30 000 de una muestra de suero y solamente cuenta con 4 mL de solvente.
Utilizando diluciones seriadas indique como obtendría dicha dilución.
9
PRÁCPRACTICA No. 2
TOMA DE MUESTRA
En el laboratorio de inmunología la muestra a estudiar es principalmente sangre y sus

derivados suero o plasma. En el plasma o suero se determina principalmente la presencia de
anticuerpos, los cuales desde el descubrimiento de la alta especificidad de las reacciones
antígeno-anticuerpo (Ag-Ac), se comprueban con propósitos de diagnóstico
(inmunodiagnóstico).
Inicialmente los investigadores se dedicaron a la detección de anticuerpos en el suero

del paciente como un signo de infección y así a la identificación serológica del
microorganismo. Sin embargo, hoy en día la sensibilidad y especificidad de los
inmunoensayos permiten no solo la detección de anticuerpos contra una amplia variedad de
organismos infecciosos incluyendo bacterias, parásitos, hongos y virus sino a la identificación
del propio microorganismo.
Aún más, proporcionan un medio para la detección y cuantificación de antígenos no

infecciosos y anticuerpos de importancia clínica tales como la determinación del grupo
sanguíneo, el VDRL, la determinación de la proteína C-reactiva, una prueba que señala un
proceso inflamatorio agudo, la detección de antígenos asociados a tumores y la demostración
de la hormona gonadotropina coriónica, una prueba diagnóstica del embarazo.
Objetivo
Aprender el procedimiento apropiado para la obtención de sangre venosa de las venas del
dobles del codo.
Desarrollo
Obtención de muestra de sangre. Para efectuar análisis serológicos, las muestras de sangre
pueden ser de sangre capilar o periférica y de sangre venosa. Sangre capilar o periférica. La
sangre capilar o periférica es la que fluye después de aplicar una punción superficial cutánea.
Se puede obtener de la yema del dedo. Algunas pruebas pueden realizarse con sangre capilar
o periférica y se aconseja cuando no es posible obtener una muestra de sangre venosa o no se
10
desea puncionar la vena.
Sangre venosa. Esta muestra se obtiene por punción de una de las tres venas del
pliegue del codo: la basílica, la cefálica o la mediana cubital. Se emplean jeringas desechables
con agujas de tipo 21x32, 20x32 o el sistema para la extracción de sangre intravenosa al vacío
Vacuntainer . Previamente se realiza la limpieza del área elegida con torunda y alcohol.
Antes de puncionar se coloca el torniquete aproximadamente a 8 cm de distancia arriba del
pliegue del codo. No debe olvidar soltarlo tan pronto empiece a obtenerse la muestra. La
cantidad máxima de sangre a extraer será estrictamente la necesaria para las pruebas.
Anticoagulantes. Los anticoagulantes más usados son el citrato de sodio, oxalato de

sodio y EDTA. El citrato de sodio se emplea al 3.8% y el oxalato de sodio al 1.4%. Se usan en
relación de una parte de anticoagulante por cada nueve partes de sangre, habitualmente se
usan 0.25mL de la solución para completar a 2.5mL de volumen total con la muestra de
sangre. El EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético) se utiliza al 10% y es uno de los
anticoagulantes de elección para el trabajo de rutina (ver figura 2).
Manejo y conservación de la muestra. La muestra debe rotularse correctamente y
separase según el caso en plasma o suero, y dependiendo del tipo de análisis debe analizarse
inmediatamente o puede conservarse adecuadamente refrigerada entre 4 y 8ºC para el
análisis posterior.
Figura 2. Tubos del sistema vacutainer
Cuestionario
1. Explique la diferencia entre suero y plasma.
2. ¿Es importante solicitarle al paciente que se presente en condiciones de ayuno para la
11
realización de pruebas diagnósticas no metabólicas?

3. Mencione pruebas de laboratorio en donde se utilice plasma y en donde se requiera de
suero.
4. ¿Qué concentración de NaCl se usa en la preparación de solución salina isotónica?
5. Mencione los factores que pueden causar hemólisis en las muestras.
12
PRÁCTICA No. 3
CUENTA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
Introducción
Los cinco principales tipos de leucocitos son los neutrófilos (50-70%), los eosinófilos (1-5%),
basófilos (0.5-1.0%), linfocitos (20-30%), y monocitos (2 –6%). Por cuenta diferencial se
entiende la determinación del porcentaje relativo de cada tipo de leucocito en una muestra de
sangre. Se realiza en extendidos (frotis) preparados cuidadosamente y teñidos con colorantes
tales como Wright, el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un color púrpura que facilita la
diferenciación (ver figura 3).
Figura 3. Tipos de leucocitos
Objetivo
Identificar los diferentes tipos de leucocitos en un frote teñido
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Material y equipo
Portaobjetos
Lancetas desechables
Algodón
Colorante de Wright
Solución reguladora pH 6.4
Microscopio
Desarrollo
1. A partir de la muestra de sangre preparar 2 extendidos (frotis) siguiendo las
indicaciones del instructor.
2. Dejar secar completamente los frotis, colocar en un puente de tinción y cubrirlos
(contar el número de gotas) con colorante de Wright. Dejar el colorante 1 minuto y
añadir el mismo número de gotas de solución reguladora pH 6.4 durante 8 minutos.
3. Lavar suavemente la preparación por 30 segundos y secar el exceso de agua.
4. Cuando la preparación esté completamente seca, colocar una gota de aceite de
inmersión y observar al microscopio.
5. Para facilitar la identificación consultar las láminas a color que ilustran los diferentes
leucocitos.
Cuestionario
1. Elabore una tabla que muestre la principal participación en la respuesta inmunitaria de
cada una de las células blancas.
2. Investigue otra técnica de tinción diferente a la de Wright.
3. Señale los porcentajes normales de los diferentes tipos de leucocitos que se encuentran
en sangre.
4. Indique cual es la población de leucocitos que predominantemente aumenta en el caso
de infecciones causadas por bacterias, parásitos, hongos, virus.
5. ¿Qué indicaría una neutrofilia en un paciente?
14
PRÁCTICA No. 4
DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO
Introducción
Alrededor de 1900 Karl Landsteiner descubrió que en el humano existen cuatro tipos de
sangres con respecto a la presencia o ausencia de dos antígenos específicos denominados A y
B. Estos cuatro grupos se conocen actualmente como tipos A, B, AB y O. Este último se
caracteriza por la ausencia de los antígenos A y B. En 1940 Landsteiner y Wiener reportaron
que el suero de conejo producido contra eritrocitos de mono Rhesus podía aglutinar los
eritrocitos del 85% de una población caucásica. Este antígeno se designó inicialmente como
factor Rh, posteriormente se encontró que existe como seis antígenos a los cuales Fisher y
Race designaron con letras C, D, E, c, d, e. Uno de estos antígenos, el D es responsable de la
condición Rh positivo. La tipificación de eritrocitos en el laboratorio se realiza con antisueros
específicos contra los antígenos A, B y D, y puede realizarse por métodos en tubo o en
portaobjetos (ver figura 4).
Figura 4. Sistema ABO
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Objetivo
Demostrar por medio de una reacción de aglutinación la presencia de los Ag eritrocitarios A,
B y D.
Materiales y equipo
Muestras de sangre con anticoagulante
Pipetas graduadas de 1 y 5 mL
Tubos de ensayo de 10 X 75 mm
Solución salina isotónica
Aplicadores de madera o palillos
Sueros tipificadores anti-A
anti-B
anti-D (Rh)
Placa oscilatoria
Desarrollo
Método en tubo
1. Se obtiene aproximadamente 5 mL de sangre venosa y se colocan en un tubo con

EDTA (0.1 mL de EDTA al 1% por cada mL de sangre). Se centrífuga por 2 min. a
2000 r.p.m. para separar el plasma del paquete celular.
2. Se toman 0.1 mL del paquete celular y se resuspenden en 1.9 mL de solución salina
para una suspensión aproximada del 5%.
3. Se marcan tres tubos de la siguiente manera: anti-A, anti-B y anti-D, y se agrega una
gota del suero tipificador según corresponda.
4. Se agregan 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y se agitan suavemente.
5. Los tubos se centrifugan 1 min a 2000 r.p.m.
6. Se busca la presencia de aglutinación agitando suavemente los tubos. La aglutinación
se reconoce por la formación de grumos.
7. Si la prueba en el tubo anti-D es negativa se realiza el siguiente procedimiento.
8. Se incuba a 37°C por 30 minutos, se centrífuga y se busca la aglutinación.
16
9. Si persiste la negatividad se lavan los eritrocitos 3 veces con 0.5 mL de solución salina
y se elimina perfectamente el sobrenadante. Se agrega una gota del suero de Coombs y
se agita suavemente, se centrífuga y se busca la aglutinación
Interpretación:
Si aglutina en el paso 6 es Rh positivo
Si aglutina en el paso 10 es Du
Si persiste la negatividad es Rh negativo.
Método en portaobjetos
1. Depositar 2 gotas de sangre en tres diferentes divisiones de un portaobjetos.

2. Agregar de izquierda a derecha una gota del antisuero anti-A, una gota de anti-B y
una gota de anti-D respectivamente.
3. Mezclar los reactivos con un aplicador de madera diferente para cada gota.
4. Agitar suavemente en la placa oscilatoria.
5. Buscar la presencia de aglutinación.
Cuestionario
1. ¿Cuántos sistemas existen para clasificar a la sangre?
2. ¿Cómo defines aglutinación y cuáles son sus ventajas y desventajas?
3. ¿Puede una persona de grupo A y una B tener como descendencia a un hijo de grupo
O? Explique
4. Mencione las ventajas y desventajas de determinar el grupo sanguíneo por los dos
métodos empleados en la práctica.
5. ¿Qué es el factor Du y qué función tiene el suero de Coombs?
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PRÁCTICA No. 5
DETERMINACIÓN DEL TITULO DE ANTICUERPOS ABO DEL
SUERO.
Introducción
El sistema de grupo sanguíneo ABO posee una característica única; la presencia de
anticuerpos fuertemente reactivos en el suero de los que carecen de los antígenos
correspondientes. Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgM y son producidos en respuesta
a una inmunización. Se dice que estos anticuerpos se producen de manera “natural” en base
a que los inmunógenos son probablemente de origen bacteriano, dado que algunas bacterias
presentan sustancias similares a los antígenos A o B.
El “título” es una medida relativa de anticuerpos o antígenos en una reacción

serológica. Se determina realizando a partir del suero problema diluciones seriadas. El título
de anticuerpos A o B del suero se reporta como el recíproco de la máxima dilución en la cual
es posible observar eritrocitos aglutinados.
Objetivo
Establecer a través de diluciones seriadas el concepto de título aplicado en las reacciones
serológicas
Material
Suspensión de eritrocitos de grupo A o B al 5 % en SSI
Suero (plasma) de grupo O
Pipetas graduadas de 1 y 5 mL
Tubos de ensayo de 10 X 75 mm
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Sueros tipificadores anti-A
anti-B
Desarrollo
1. Colocar en una gradilla una serie de 6 tubos rotulados del 1 al 6 y se agregar 0.1 mL
de solución salina cada uno de ellos.
2. Agregar 0.1 mL del suero problema al tubo n° 1, mezclar bien y transferir 0.1 mL al
tubo n° 2 y así sucesivamente hasta el tubo n° 6 del cual se desechan 0.1 mL.
3. Agregar 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar.
4. Incubar a 37°C por 15 minutos, mezclan suavemente y centrifugar a 1000 r.p.m.
durante 1 minuto.
5. Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación.
Interpretación
1. El título de anticuerpos en el suero problema se determina como el recíproco de la

dilución máxima en la que se observa aglutinación.
2. Además de la aglutinación se puede observar hemólisis, por lo que se debe comprobar
la presencia de hemoglobina libre
Cuestionario
1. ¿Cuál es la dilución utilizada en cada uno de los tubos?
2. Explique porqué puede variar el título de Ac en la muestra para cada paciente
3. ¿Qué es lo que se diluye en cada uno de los tubos para la cuantificación, los Ac o los
eritrocitos?
4. Porque es importante determinar el título de anticuerpos en una muestra serológica.
5. Cite tres ejemplos de pruebas serológicas donde la determinación del título de
anticuerpos ayude en el diagnóstico y vigilancia de una determinada enfermedad.
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PRÁCTICA No. 6
PRUEBAS CRUZADAS
Introducción
El objetivo de una transfusión es el proporcionar al paciente (receptor) el tipo preciso de
sangre. Por supuesto este objetivo es difícil de lograr, pero es posible aproximarse mucho si
se realizan las pruebas correctas de hemaglutinación. En primer lugar, deben determinarse con
exactitud los anfígenos de los grupos sanguíneos principales: el grupo ABO y el Rh del
paciente, sobre la base de estos grupos se selecciona la unidad de sangre de grupo ABO y Rh
compatible y se procede a efectuar las denominadas pruebas cruzadas mayor y menor.
La prueba cruzada mayor, denominada prueba de compatibilidad, se realiza mezclando

el suero del receptor con los eritrocitos del donador. Si se produce hemaglutinación, esta
sangre no puede darse al receptor porque tiene anticuerpos capaces de reaccionar y destruir la
sangre administrada. En la prueba cruzada menor, los eritrocitos del receptor son incubados
con suero del donador y se observa si hay aglutinación. Si se produce hemaglutinación, la
sangre del donador no debe administrase (ver figura 5).
En ambas pruebas una suspensión de los eritrocitos respectivos se mezclan con el

suero y la mezcla se incuba a 37°C durante unos 30-60 minutos. Después del periodo de
incubación los eritrocitos se lavan para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los
eritrocitos, y se añade el reactivo de Coombs (anti-globulina).
Objetivo
Realizar las pruebas de compatibilidad sanguínea denominadas “Pruebas Cruzadas”
Material
Muestras de sangre con y sin anticoagulante
Pipetas graduadas de 1 mL y 5 mL
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8 tubos de ensaye de 10 X 75 mm
Solución salina isotónica.
Baño serológico
Centrífuga
Solución de albúmina bovina al 10%
Desarrollo
1. Se obtiene una muestra de sangre del donador y receptor .
2. Se disponen 4 tubos etiquetados como sigue:
PM/S =Prueba Mayor en solución salina
pm/s =Prueba Menor en solución salina
PM/A =Prueba Mayor en albúmina
pm/a =Prueba Menor en albúmina
3. Se agregan a cada tubo los siguientes reactivos en el orden indicado:
PM/S. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del donador
pm/s. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del receptor
PM/A. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al
5%) del donador
pm/a. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al
5%) del receptor
4. Se mezclan bien y se incuban a 37°C por 30 minutos.
5. Se centrifugan 1 minuto a 2000 r.p.m. y se busca la presencia de aglutinación.
6. En caso de que no se presente la aglutinación, los tubos se centrifugan nuevamente y
se descarta el sobrenadante. Se lava el paquete celular de cada tubo con 1 mL de
solución salina y se centrifuga nuevamente descartando el sobrenadante. Repetir el
lavado 2 veces.
7. Al paquete celular se le agrega una gota del suero de Coombs
8. Se centrifugan 1 minuto a 2000 r.p.m. y se busca la presencia de hemaglutinación
21
Figura 5. Compatibilidad entre grupos sanguíneos
Interpretación:
Si hay aglutinación en cualquiera de los tubos, será indicativo de que hay
incompatibilidad entre el posible donador y el receptor (paciente). Si no la hay, las sangres
son compatibles.
Cuestionario
1. ¿Qué significa una prueba cruzada positiva y una negativa?
2. ¿Qué factores pueden interferir en los resultados de una prueba cruzada?
3. ¿Qué características debe tener un donador sanguíneo ideal?
4. ¿Cuál es el objetivo de utilizar a la albúmina?
5. ¿Porque a las personas con grupo O Rh positivo se les conoce como donadores
universales? ¿Esto es correcto?
22
PRÁCTICA No. 7
DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE INFECCIÓNES BACTERIANAS
(REACCIONES FEBRILES)
Introducción
La aglutinación de células bacterianas con antisueros es una de las pruebas serológicas más
antiguas de la inmunología práctica. Se inició como un método para el diagnóstico de las
infecciones bacterianas y fue propuesta por Widal en 1896. La pruebas de aglutinación
bacteriana tienen dos aplicaciones principales en el diagnóstico; las células bacterianas
desconocidas pueden identificarse por medio de anticuerpos conocidos, o bien utilizando
bacterias conocidas pueden identificarse los anticuerpos en el suero del paciente.
La identificación bacteriológica completa del agente patógeno es un proceso que lleva

tiempo (3 o más días), mientras se intenta el reconocimiento del agente es posible la
identificación serológica. En la aglutinación de los antígenos bacterianos con sus anticuerpos
portaobjetos produce un agregado macroscópico (ver figura 6).
Objetivo
Demostrar en el suero problema anticuerpos contra los antígenos bacterianos.
Material
Muestras de sueros problema
Placa de vidrio marcada en 6 cuadros
Pipetas graduadas de 1 y 0.2 mL
Pipeta Pasteur
Placa oscilatoria
Equipo con antígenos:
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“O” de Salmonella typhi

“H” de Salmonella typhi
“H” de Salmonella enteritidis Paratyphi A
“H” de Salmonella enteritidis Paratyphi B
Brucella abortus
Proteus OX-19
Figura 6. Aglutinación en placa
Desarrollo:
1. En una placa de vidrio perfectamente limpia se depositan 0.08 mL del suero problema
en cada una de las seis divisiones.
2. Se agrega una gota de cada antígeno comenzando por la izquierda arriba, respetando el
orden establecido.
3. Se mezclan las gotas con palillos diferentes y se agita suavemente en la placa de
rotación durante dos minutos.
4. La lectura se hace observando la aglutinación macroscópica.
5. Si aparece aglutinación con alguno de los antígenos, continuar con el siguiente paso.
6. Se toma otra placa y se depositan 0.08, 0.04, 0.02, 0.01, y 0.005 mL del suero
problema.
7. Se agrega una gota del antígeno seleccionado, se mezclan con un palillo y se revisa la
presencia de aglutinación.
24
Interpretación:
1. Los volúmenes de suero empleados corresponden respectivamente a diluciones 1/20,

1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.
2. El título de anticuerpos del suero problema se reporta como el recíproco de la máxima
dilución que muestra aglutinación.
3. La mayoría de los títulos mayores de 160 son presuntivos de infección.
4. La mejor indicación de una infección activa es un aumento en el título de dos
determinaciones sucesivas con una diferencia de 5-7 días concomitantes a la
infección.
Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del método para la determinación de las reacciones febriles y
mencione 3 enfermedades que se diagnostiquen por este método?
2. ¿Cuál sería un título clínicamente significativo en las reacciones febriles y como se
interpretaría?
3. ¿Cuál es la razón de utilizar una suspensión de Proteus OX-19 para el diagnóstico de
tifo?
4. ¿Por qué se dice que es un método cuantitativo?
5. Además de las reacciones febriles, que otras pruebas de laboratorio de deben realizar
para diagnosticar Salmonelosis y Brucelosis.
25
PRÁCTICA No. 8
DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE SIFILIS
(Prueba Rápida de Reagina, RPR)
Introducción
La prueba de RPR es una prueba de floculación no treponémica macroscópica que es utilizada
para detectar y cuantificar reaginas, un anticuerpo anti-lipídico encontrado en el suero o
plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o
crónicas en otras condiciones aparte de la sífilis.
El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que

contiene micropartículas de carbón para realzar la diferencia entre un resultado positivo y
negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculación con las partículas de carbón
contenidas en la suspensión del antígeno, la cual aparece como un cúmulo negro. Las
muestras no reactivas se observan con un ligero color gris.
Objetivo
Demostrar en el suero problema anticuerpos anti-lipídicos de personas con sífilis.
Material
Muestras de sueros problema
Tarjetas de Prueba (círculos de aproximadamente de 18 mm)
Equipo con antígeno: Suspensión de Antígeno RPR conteniendo micropartículas de carbón
activado.
Control Positivo RPR.
Control Negativo RPR.
Rotador mecánico
Lámpara
26
Desarrollo
Procedimiento cualitativo
1. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno de RPR, los controles y las
muestras.
2. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene

presionado dicho extremo, coloque la pipeta dentro de la muestra. Suelte para permitir
que la pipeta aspire un poco de muestra.
3. Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la

tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área.
4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para cubrir el

total de la superficie del círculo. Deseche la pipeta/agitador. Repita el mismo
procedimiento para cada muestra.
5. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. Sosténgalo en

posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de que el
paso por la aguja es correcto. No limpie la aguja. Coloque una gota de la suspensión
del antígeno sobre cada muestra. NO EXTIENDA!
6. Agite por 8 min a 100 rpm en un rotador mecánico.
7. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente.
8. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa.
Interpretación
➢ Reactivo: Presencia de flóculos grandes o pequeños en el centro o la periferia del
círculo de prueba.
➢ Débil reactivo: Presencia de flóculos pequeños pero definidos.
27
➢ No reactivo: Apariencia lisa, uniforme pero sin flóculos visibles.

Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras
utilizando procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas serológicas confirmativas
como el ensayo de microhemaglutinación para anticuerpos treponémicos (MHA-TP). El
diagnóstico final debe estar en base a la correlación de los resultados de prueba junto con
otros hallazgos clínicos.
Procedimiento cuantitativo
1. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2. Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos.
3. Agregar a cada uno de ellos 0.5 mL de solución salina.
4. Depositar 0.5 mL de suero problema en el tubo No. 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5 mL del tubo No. 1 al tubo No. 2 y mezclar.
6. Continuar esta operación hasta el tubo No. 4.
7. Depositar 0.05 mL de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de
reacción. Extienda sobre el total de la superficie de cada círculo donde se colocaron
las diluciones.
8. Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente resuspendido, exactamente
sobre cada una de las gotas de las diluciones anteriores utilizando el frasco gotero al
cual se le ha insertado la aguja No. 18 sin bisel.
9. Agite por 8 min a 100 rpm en un rotador mecánico.
10. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente.
11. Leer el resultado macroscópicamente.
Interpretación
La última dilución que contenga agregados macroscópicos indica el título de la muestra (ver
tabla 1).
Tabla 1. Ejemplo de lectura para obtener el título
Número de tubo Dilución del suero Resultado

1 1:2 Positivo
2 1:4 Positivo
3 1:8 Positivo
4 1:16 Negativo
28
El título del suero problema será: 1:8.
Limitaciones de la prueba
El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo único de

una prueba no treponémica, sin el soporte de una historia positiva o evidencia clínica. Las
muestras de suero que son reactivas en pruebas cualitativas deben ser cuantificadas para
establecer un tratamiento en el cual los cambios de título puedan ser determinados como un
indicador de la respuesta al mismo. Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para
pruebas cuantitativas. Las muestras que son no-reactivas pero dudosas, se deben de repetir y
cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona.
Cuestionario
1. Menciona al agente etiológico de la sífilis y menciona las características de la
enfermedad, tomando en cuenta signos y síntomas del paciente
2. ¿Porque se han clasificado las pruebas para el diagnóstico de sífilis en treponémicas y
no treponémicas?, menciona una de cada una
3. Menciona el fundamento del VDRL e indica algún caso en donde sea solicitada la
prueba 4.- ¿Qué ventajas tiene la prueba de RPR sobre el VDRL?
4. ¿Qué enfermedades pueden dar resultados falsos positivos en las pruebas no
treponémicas.?
29
PRÁCTICA No. 9
FACTOR REUMATOIDE
Introducción.
Los factores reumatoides son anticuerpos dirigidos contra los determinantes antigénicos de la
región Fc de las IgG. En personas sanas, estos anticuerpos pueden hallarse en baja
concentración, sin embargo se encuentra aumentado en la mayoría de los pacientes con artritis
reumatoide. La determinación del factor reumatoide se lleva a cabo con partículas de latex
cubiertas de IgG.
Objetivo
Realizar la determinación del Factor Reumatoide por aglutinación en placa.
Material y equipo
Muestras de sueros
Placa de vidrio oscuro marcada
Pipeta Pasteur
Reactivo de latex-FR
Solución amortiguadora de glicina-cloruro de sodio pH 8.2
Placa rotatoria
Desarrollo
Factor Reumatoide (FR). Por el método de aglutinación en látex en placa, utiliza una
suspensión estabilizada de partículas de látex sensibilizadas con IgG humana.
30
1. El suero se diluye 1:20 con amortiguador de glicina-cloruro de sodio colocando 0.1

mL de suero y 1.9 mL del amortiguador.
2. Se coloca una gota de la dilución en la placa de vidrio oscura y se añade una gota del
reactivo látex-FR.
3. Se mezcla y se agita suavemente en la placa rotatoria durante dos minutos.
4. Se busca la aglutinación macroscópica.
5. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y
1/640, las cuales se preparan con 0.5 mL de la dilución 1/20 en 0.5 mL del
amortiguador para una dilución 1/40 y así consecutivamente.
Cuestionario
1. ¿Qué es el factor reumatoide y explique el fundamento de la prueba?

2. Indique de que están hechos los controles positivos y negativos para la prueba de FR
3. Explique cómo se calcula el título para factor reumatoide y explique el significado
clínico de una prueba FR positiva
4. Además de la artritis reumatoide, que otras enfermedades dan un resultado positivo de
este factor.
5. ¿Un resultado negativo del factor reumatoide descarta el diagnóstico de artritis
reumatoide?
31
PRÁCTICA No. 10
PROTEINA C REACTIVA
Introducción
La Proteína C reactiva forma parte de las proteínas de fase aguda, un conjunto de proteínas
del suero cuya concentración aumenta de manera drástica durante el daño tisular, la infección
o el estrés. No es específica de una enfermedad sino que es un indicador del proceso
inflamatorio.
Objetivo: Realizar la determinación de la Proteína C reactiva por aglutinación en placa.
Material
Muestras de sueros
Placa de vidrio oscuro marcada
Pipeta Pasteur
Reactivo de látex- Proteína C reactiva
Solución amortiguadora de glicina-cloruro de sodio pH 8.2
Placa rotatoria
Desarrollo
Proteína C reactiva (PCR). Por el método de aglutinación en látex en placa. Utiliza una
suspensión acuosa de partículas de látex recubiertas de anticuerpos específicos anti- Proteína
C reactiva.
1. El suero problema se diluye 1/20, con amortiguador de glicina- cloruro de sodio y se

coloca una gota de la dilución en una placa de vidrio oscuro.
32
2. Se añade una gota del reactivo latex-PCR se mezcla bien y se agita suavemente en la
placa rotatoria por 3 min.
3. Se busca la aglutinación macroscópica.
4. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero a partir de 1/80.
Cuestionario
1. ¿Qué es la proteína C reactiva y explique el fundamento de la prueba?
2. Indique de que están hechos los controles positivos y negativos para la prueba de
proteína C reactiva
3. Explique cómo se calcula el título para PCR
4. Explique el significado clínico de una prueba PCR positiva
5. ¿Cuál es el valor diagnóstico de la Proteína C reactiva?
33
PRÁCTICA No. 11
DETERMINACIÓN DE ANTIESTREPTOLISINAS
Introducción
Las estreptolisinas son enzimas hemolíticas producidas por la mayoría de los estreptococos
del grupo A, destruyen la membrana de los eritrocitos ocasionando la hemólisis. Este
producto bacteriano es una de las muchas toxinas extracelulares y enzimas producidas por los
estreptococos.
En particular, la estreptolisina O recibe este nombre debido a que sensible al oxígeno,

solo posee actividad en estado reducido, razón por la cual se le incorpora un reductor (el
hidrosulfito de sodio) inmediatamente antes de usarla. En el laboratorio las ASO pueden
determinarse por una reacción serológica de neutralización, en la cual si el suero del paciente
contiene anticuerpos contra la enzima (antiestreptolisinas) neutralizarán su capacidad
hemolítica y ocurrirá inhibición de la hemólisis.
Objetivo
Determinar el título de anticuerpos contra la estreptolisina “O” en el suero problema
Material
Muestras de suero
Suspensión de eritrocitos al 5%
Amortiguador para ASO (fosfatos pH 6.5)
Estreptolisina O
Baño serológico
Centrífuga
Pipetas graduadas de 1 mL y 5 mL
15 tubos de ensaye de 10 X 75 mm
34
Desarrollo
1. Preparar a partir del suero problema las siguientes diluciones iniciales:
a) 1:10 con 0.2 mL del suero problema + 1.8 mL de solución amortiguadora
b) 1:100 con 0.3 mL de la dilución 1:10 + 2.7 mL de solución amortiguadora
c) 1:500 con 0.6 mL de la dilución 1:100 + 2.4 mL de solución amortiguadora
2. Rotular los tubos de ensaye con números del 1 al 12 y dos más como control (+) y
control (-).
3. Preparar diluciones secundarias añadiendo primero el volumen de solución
amortiguadora y posteriormente el volumen del suero diluido según se indica en la
tabla 2.
Tabla 2. Diluciones para la prueba de antiestreptolisinas
Tubos N° 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 (+) (-)
mL amortiguador 0.1 0.4 --- 0.1 0.2 0.3 0.35 --- 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.75
Dilución 1:10 1:100 1:500
mL suero diluido 0.4 0.1 0.5 0.4 0.3 0.2 0.15 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 --- ---
Unidades Todd 12 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500
4. Mezclar suavemente y añadir a cada tubo 0.25 mL de estreptolisina, EXCEPTO al

tubo control (-).
5. Mezclar por agitación e incubar a 37°C por 15 min.
6. Añadir a cada tubo 0.25 mL de una suspensión de eritrocitos al 5%., mezclar e incubar
a 37°C por 30 min.
7. Centrifugar los tubos a 2500 rpm por 2 min.
8. Comprobar la presencia de hemólisis completa en el tubo control (+) y la ausencia de
hemólisis en el tubo control (-)
9. Determinar el título de antiestreptolisinas (unidades Todd) como el de la máxima
dilución que no presenta hemólisis.
Cuestionario
1. ¿Qué son las antiestreptolisinas e indica el fundamento de la prueba?
2. Menciona dos motivos para montar el control negativo y dos motivos para montar el
35
control positivo
3. ¿Por qué la enzima estreptolisina se tiene que activar en el momento de utilizarla?

4. ¿A partir de qué dilución, un suero positivo se considera sugestivo de infección por
Streptococcus?
5. ¿Qué complicaciones pueden presentarse debido a una infección por Streptococcus
pyogenes?
36
PRÁCTICA No. 12
DETERMINACIÓN DE LA HORMONA GONADOTROPINA
CORIONICA HUMANA
Introducción
Las pruebas de laboratorio para el diagnóstico del embarazo se basan en la determinación de
la gonadotropina coriónica humana (hGC), hormona producida por la placenta y que puede
detectarse tanto en el suero como en la orina. La excreción de hGC alcanza su máximo
durante la duodécima a decimocuarta semana de gestación y a partir de entonces desciende de
nivel. Hasta los años 60, las pruebas de embarazo eran bioensayos en los cuales la presencia
de la hGC en el suero o en la orina se demostraba por su efecto en animales.
Las primeras pruebas utilizaban ratones y conejos, las pruebas ulteriores ratas hembra
o ranas. Actualmente estas pruebas han sido sustituidas por pruebas inmunológicas. Las
pruebas inmunológicas dependen del anticuerpo anti-hGC. La presencia de hGC en el suero u
orina se demuestra por un sistema indicador.
Los ensayo de aglutinación denominados de “inhibición de la aglutinación” consisten de

eritrocitos de conejo o partículas de látex recubiertas con hGC. Cuando se realiza la prueba,
el suero u orina de la paciente se incuban con el anticuerpo. Si existe hGC en la muestra, el
anticuerpo es inactivado y los eritrocitos o partículas de látex no aglutinan. Si la muestra no
contiene hGC, el anticuerpo permanece activo y se produce la aglutinación.
Además de la aglutinación, existen otras técnicas inmunológicas para la

determinación de la hGC, tales como los inmunoensayos enzimáticos (ELISA) y el
radioinmunoanálisis (RIA), el cual requiere de equipo especial para su realización. Esta
técnicas varían en su sensibilidad, esto es las pruebas inmunológicas son, más sensibles al
37
detectar concentraciones menores de hGC, por ejemplo las pruebas con eritrocitos tienden a
ser más sensibles que la que emplean partículas de látex.
Objetivo
Determinar la presencia de la hormona Gonadotropina Coriónica Humana en una muestra de
orina.
Material
Muestra de Orina (10 mL)
Muestra de suero
Equipo de diagnóstico de hGC
Desarrollo
El método que se utilizará en esta práctica es un inmunoensayo de flujo lateral. (STICK
hGC). El método utiliza una combinación única de conjugado anticuerpo monoclonal y
anticuerpos policlonales en fase sólida. La sensibilidad del método es de 10 mIU/mL. El
método consiste en introducir la tira reactiva en la orina centrifugada hasta la marca,
esperando a que migre hasta la marca superior por medio de capilaridad. El conjugado
anticuerpo-colorante se une a la hGC formando un complejo anticuerpo-antígeno. Este
complejo se une al Anti-hGC que se encuentra fijo en la zona de prueba generando una banda
color rosa. En ausencia de la hormona no se forma este complejo. La mezcla de reacción
continúa migrando a lo largo de la tira hasta la zona control. El conjugado libre aún, se une a
los anticuerpos fijos contra la fracción FC de los anti-hGC dando lugar a una banda rosa,
demostrando que el reactivo está funcionando correctamente y que migro por toda la tira (ver
figura 7).
1. Atemperar la muestra y las tiras reactivas

2. Colocar 0.5 mL de orina o suero en un tubo pequeño
3. Introducir verticalmente la tira hGC en la muestra durante 10-15 segundos. No
sobrepasar la marca MAX.
4. Leer la tira en los 3 minutos siguientes para orina y en los 5 minutos siguientes
para suero.
38
Interpretación
Prueba negativa: Si solo aparece una banda coloreada transversal en la zona control.
Prueba positiva: Además de la banda en la zona control debe aparecer una segunda
banda en la zona prueba de la tira.
No válido: Si no aparece la banda en la zona control
Zona control
Zona prueba
NEGATIVO POSITIVO
Figura 7. Interpretación de la tira reactiva
Cuestionario
1. Mencione otros métodos serológicos para determinar la hormona hGC
2. Investigue que tipo de sustancias presentes en la orina de la paciente pueden interferir
y dar un resultado falsamente positivo
3. Indique la diferencia en determinar la hormona, en una muestra de orina o en una
muestra de suero
4. ¿Cuál es la estructura de la hGC y hacia qué subunidad están dirigidas las pruebas de
embarazo?
5. En qué casos diferentes a embarazo la hGC podrá resultar positiva
39
BIBLIOGRAFÍA
Abbas, A., Lichtman, A. H. y Pober, J. S. 1999. Inmunología celular y molecular. 3ª Edición.

Interamericana- Mc Graw-Hill.
Janeway, C. A. and Travers P. 1996. Immunobiology the immune system in health and disease.
2ª Edición. Current Biology-Garland..
Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. 2003. Inmunología. 5a Edición. Mc
Graw- Hill
Regueiro, J.R. y López L. C. 1998. Inmunología biología y patología del sistema inmune.
2ª Edición. Editorial Médica Panamericana
Roitt, I. 1998. Inmunología fundamentos. 9ª Edición. Editorial Médica Panamericana
Roitt, I., Brostoff, J. and Male D. 2000. Inmunología 5ª edición. Ediciones Harcourt.
España
40
8. ESTRATEGIAS, TÉCNICAS Y RECURSOS DIDÁCTICOS
Estrategias y técnicas didácticas Recursos didácticos
Lluvia de ideas
Discusión en grupo
Discusión de artículos
Impresos (textos): libros, fotocopias,
Representaciones gráficas: mapas mentales,
periódicos, documentos
mapas conceptuales y cuadros sinópticos
Materiales de laboratorio
Trabajo colaborativo
Materiales audiovisuales:
Trabajo colaborativo en equipo
Imágenes fijas proyectables (fotos)-
Solución de problemas (tareas)
diapositivas, fotografías
ABP
Páginas Web, Weblog, tours virtuales,
Prácticas de laboratorio
webquest, correo electrónico, chats, foros,
Presentaciones
unidades didácticas y cursos on-line
Búsqueda y recuperación de información a
partir de bases de datos
9. EJES TRANSVERSALES
1.
Eje (s) transversales Contribución con la asignatura
Formación Humana y Social Concientiza el compromiso profesional
necesario para cumplir las tareas asignadas.
Promueve el desarrollo de valores.
Desarrollo de Habilidades en el uso de las Emplea herramientas de informática y bases
Tecnologías de la Información y la de datos para buscar, recuperar y analizar
Comunicación información relevante en el campo profesional
Desarrollo de Habilidades del Pensamiento Ayudan en el ordenamiento, integración y
Complejo análisis de la información sobre los temas
abordados.
Lengua Extranjera Lectura de artículos y libros que faciliten la
fluidez para conocer y manejar el
conocimiento sobre la materia a nivel
internacional.
Innovación y Talento Universitario Induce el desarrollo de la actitud propositiva.
Educación para la Investigación Promueve la capacidad para ser generador de
conocimiento, así como la habilidad para
exponer información.
41
10. CRITERIOS DE EVALUACIÓN

Criterios Porcentaje
Examen escrito 20%
Examen práctico 30%
Presentaciones 10%
Prácticas de laboratorio 40%
Total 100%
42

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Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

PLAN DE ESTUDIOS (PE): Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

ÁREA: Ciencias Microbiológicas

ASIGNATURA: Laboratorio de Inmunología

CÓDIGO: QFBS 261 L

FECHA: Febrero 2017

Nivel Educativo: Licenciatura

Nombre del Plan de Estudios: Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Modalidad Académica: Presencial

Nombre de la Asignatura: Laboratorio de Inmunología

Ubicación: Nivel formativo

2. CARGA HORARIA DEL ESTUDIANTE

4. PERFIL DESEABLE DEL PROFESOR (A) PARA IMPARTIR LA ASIGNATURA:

Nivel académico: Mínimo Licenciatura, preferible Maestría o Doctorado en

7. CONTENIDO. INDICE DE PRACTICAS

NÚMERO DE LA TITULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA

Práctica 2 Toma de muestra 7

Práctica 3 Observación de leucocitos (cuenta diferencial) 10

Práctica 4 Determinación de grupo sanguíneo 12

Práctica 5 Determinación del título de anticuerpos ABO del 15

Práctica 7 Diagnóstico serológico de infecciones bacterianas 20

Práctica 9 Factor reumatoide 27

Práctica 10 Proteína C reactiva 29

Práctica 11 Determinación de antiestreptolisinas 31

Práctica 12 Determinación de la hormona gonadotropina 34

En la práctica el cálculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras diferentes

1/d=Vm/Vt donde 1/d= dilución

Volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra

Sin embargo, las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es

Figura 1.Esquema e diluciones seriadas

En el laboratorio de inmunología la muestra a estudiar es principalmente sangre y sus

Inicialmente los investigadores se dedicaron a la detección de anticuerpos en el suero

Aún más, proporcionan un medio para la detección y cuantificación de antígenos no

desea puncionar la vena.

Anticoagulantes. Los anticoagulantes más usados son el citrato de sodio, oxalato de

Figura 2. Tubos del sistema vacutainer

realización de pruebas diagnósticas no metabólicas?

Figura 3. Tipos de leucocitos

Figura 4. Sistema ABO

1. Se obtiene aproximadamente 5 mL de sangre venosa y se colocan en un tubo con

1. Depositar 2 gotas de sangre en tres diferentes divisiones de un portaobjetos.

El “título” es una medida relativa de anticuerpos o antígenos en una reacción

Aplicadores de madera o palillos

1. El título de anticuerpos en el suero problema se determina como el recíproco de la

La prueba cruzada mayor, denominada prueba de compatibilidad, se realiza mezclando

En ambas pruebas una suspensión de los eritrocitos respectivos se mezclan con el

Figura 5. Compatibilidad entre grupos sanguíneos

La identificación bacteriológica completa del agente patógeno es un proceso que lleva

“O” de Salmonella typhi

Figura 6. Aglutinación en placa

1. Los volúmenes de suero empleados corresponden respectivamente a diluciones 1/20,

El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que

2. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Al tiempo que oprime y mantiene

3. Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la

4. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador, extienda la muestra para cubrir el

5. Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. Sosténgalo en

6. Agite por 8 min a 100 rpm en un rotador mecánico.

8. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa.

➢ No reactivo: Apariencia lisa, uniforme pero sin flóculos visibles.

Número de tubo Dilución del suero Resultado

El título del suero problema será: 1:8.

El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo único de

1. El suero se diluye 1:20 con amortiguador de glicina-cloruro de sodio colocando 0.1