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Vicerrectoría de Docencia
Dirección General de Educación Superior
Facultad de Ciencias Químicas
ÁREA: Químico-Biológica
CÓDIGO: QFBM258L
CRÉDITOS: 0
Laboratorio de Bacteriología I
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
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1. DATOS GENERALES
Correlación:
Horas práctica 3 48
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3. REVISIONES Y ACTUALIZACIONES
D.C. Fausto Tejeda Trujillo
M.S.P. Carlos Cabrera Maldonado
D.C. Alma López García
M.C. María Susana Pérez Fernández
Autores: M.C. Patricia Guadalupe Suárez Albores
M.S.P. María de la Cruz Meneses Sánchez
D.C. Juan Carlos Benítez Serrano
D.E.D. Reyna del Consuelo Almiray Pinzón de Dios
D.E.D. Edith Díaz Cabrera
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6. COMPETENCIAS PROFESIONALES:
1. Emplea herramientas de informática y bases de datos para buscar, recuperar y analizar
información relevante de las características generales de los distintos grupos bacterianos
para identificar y diferenciar a aquellos de importancia médica.
3. Evalúa los diferentes mecanismos de patogenicidad y virulencia que poseen las bacterias
con la finalidad de interpretar y establecer los factores que provocan las enfermedades
bacterianas y así poder prevenirlas.
6. Aplica los métodos de las distintas técnicas inmunológicas y de biología molecular para
apoyar en el análisis microbiológico conforme a protocolos establecidos para contribuir a la
prevención, diagnóstico, seguimiento y el control de enfermedades bacterianas, utilizando
controles pertinentes que garanticen la calidad de las pruebas conforme a protocolos y
normas vigentes.
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7. CONTENIDOS TEMÁTICOS
ÍNDICE
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PRACTICA No.1
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA
Introducción
El laboratorio bacteriológico es el espacio físico donde se efectúa gran diversidad de procedimientos
médicos, científicos, técnicos, etc. que en conjunto representan un valioso recurso de la clínica al
documentar el estado de salud (medicina preventiva) o de enfermedad (medicina curativa). La razón
por la que el médico envía al paciente al laboratorio es sólo una: necesita información para tomar
decisiones adecuadas. Los estudios microbiológicos tienen la característica de ser eminentemente
etiológicos, lo cual permite brindar al paciente el tratamiento específico, generando un impacto
significativo en la humanidad.
El laboratorio bacteriológico ha tenido una evolución de varios siglos, desde el surgimiento del
microscopio hasta el advenimiento de la biología molecular, la cual se ha ido ampliando gradualmente.
Objetivo
Utilizar los recursos actuales del laboratorio de Microbiología para poder realizar la identificación de
bacterias de importancia médica.
Material
El necesario para el desarrollo de las diferentes prácticas
Metodología
Mostrar cada uno de los medios con que cuenta el laboratorio para la identificación de las bacterias,
explicar su funcionamiento, así como reafirmar el reglamento del laboratorio para evitar cualquier 6
accidente.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de cumplir un reglamento dentro de un laboratorio práctico?
2.- ¿Cuáles son los cuidados que se deben tener en el momento de trabajar con las bacterias?
3.- ¿Qué desinfectantes se deben utilizar para destruir a las bacterias, menciona las concentraciones y el
tiempo de acción de dichos desinfectantes?
4.-¿Qué es un nivel de bioseguridad y cuántos niveles existen y cuál es su utilidad?
5.-Describe cada uno de estos niveles de bioseguridad.
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PRACTICA No.2
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Introducción
La identificación de una bacteria es la asignación a un taxón según una clasificación dada y consiste en
la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas
características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. Las características a
determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la
identificación.
Cowan y Steel establecen un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con las cuales
se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso, familia a la que pertenece un
aislamiento. Dichas pruebas son:
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También se pueden incluir pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas
dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de pigmentos, producción de indol a
partir de triptófano, producción de coagulasa, de fenilalanina desaminasa, etc.)
Objetivo
Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel, las pruebas bioquímicas
fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de las bacterias de interés médico.
Material
Equipos de tinción de Gram Tubos con O/F con glucosa
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar nutritivo o soya tripticasa
Reactivo para catalasa
Portaobjetos
Benzal
Algodón
Caldos con bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNnF)
Metodología
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente:
1.- Tinción de Gram.
2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP).
3.- Tinción de Ziehl-Neelsen (sólo en caso de tener BGP).
4.- Inocular por estría cruzada una placa de agar.
5.- Inocular por picadura el medio O/F.
6.- Inocular por picadura el medio MIO.
7.- Inocular por picadura una base de CTA con un carbohidrato.
8.- Incubar todos los medios a 37°C por 24 horas. 9
9.- Leer morfología colonial de la placa.
10.- Del crecimiento en placa realizar las pruebas de oxidasa y catalasa.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
2.- ¿Para que sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y cuál es su fundamento?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y de catalasa y cómo se realiza en el laboratorio?
4.- ¿En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta?
5.- De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de estudio durante la práctica,
realiza dibujos y menciona tus resultados.
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Tinción gram
+ + + + + + + + – – – – –
(cultivo fresco)
Forma coco Coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco
Crecimiento
+ + + + + – + + + + + + +
aerobio
Crecimiento
– + + + + + + – – – + + –
anaerobio
Esporas – – – – – + + + – – – – –
Movilidad – – – – – +o– +o– +o– +o– +o – +o- + –
Catalasa + + – – – – + + + + + + +
Oxidase + + – + +
Fermentación de
glucosa a acido – + + + + + (o –) + – – – + + –
o a acido+gas
O/F – O F F O
Micrococcus X
Staphylococcus X
Streptococcus X
Lactococcus X
Enterococcus X
Leuconostoc X
Pediococcus X X
Aerococcus X
Lactobacillus X
Clostridium X
Bacillus X X
Alcaligenes X
Pseudomonas X
Enterobacterias X
Aeromonas X
Chromobacterium X
Neisseria X
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PRACTICA No. 3
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS
Introducción
Este grupo abarca microorganismos aerobios, no esporulados, que no utilizan a los carbohidratos como
fuente de energía o los utilizan a través de vías metabólicas diferentes a la fermentación.
Algunos de los indicios tempranos para detectar a un microorganismo no fermentador serían los
siguientes:
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V
algunos
Escaso o
Flavobacterium O presentan + Requieren complejo B
negativo
flagelos
perítricos
Escaso o Requiere factores de
Bordetella O V +
negativo crecimiento
Escaso o Cocobacilar, difícil de
Moraxella O ó NS - +
negativo crecer.
Prueba de DNasa +
+ Producción de ácido a
Stenotrophomonas O - +
un solo flagelo partir de O/F con
maltosa
+
Alcaligenes O ó NS flagelos + - Aerobio estricto
perítricos
Objetivo
Comprobar por medio de análisis de laboratorio, el comportamiento característico de cepas bacterianas
no fermentadoras de carbohidratos.
Material
Equipos de tinción de Gram Tubos con O/F con glucosa
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar sangre de carnero
Reactivo para catalasa Placas con agar Mac Conkey
Portaobjetos Tubos con agar MIO
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Benzal
Algodón
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Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la parte del
estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO.
3.- Incubar 24 horas a 37° C.
4.- Leer morfología colonial.
5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de Gram.
6.- Leer pruebas bioquímicas.
Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Por qué es importante identificar a los BGNnF y qué géneros conforman dicho grupo?
2.- ¿Cuáles son las pruebas claves para sospechar de un BGNnF?
3.- Mencione un esquema diferente al de King-Weaver para identificar a los BGNnF
4.- ¿De los BGNnF que géneros dan la prueba de oxidasa negativa, quiénes movilidad negativa y
quiénes son capaces de crecer en Mac Conkey?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer si la cepa pertenece al grupo de BGNnF 14
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PRÁCTICA No.4
CARACTERIZACIÓN DEL GÉNERO Pseudomonas
Introducción
Este género se encuentra ubicado dentro del grupo de BGNnF y ocupa dentro de éstos, el primer lugar
como agente causal de infecciones intrahospitalarias, resaltando la capacidad de resistencia presente en
algunas cepas a desinfectantes elaborados a partir de sales cuaternarias de amonio. De las especies que
integran este género destacan: Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas
alcaligenes, Burkholderia cepacia (anteriormente llamada Pseudomonas cepacia). Siendo en el
ambiente clínico P. aeruginosa la especie aislada con mayor frecuencia (ver tabla 3).
Objetivo
Demostrar las particularidades bioquímicas y de cultivo, del género Pseudomonas.
Material
Equipos de tinción de Gram Tubos con O/F con glucosa
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar sangre de carnero
Reactivo para catalasa Placas con agar Mac Conkey
Portaobjetos Tubos con agar MIO
Benzal Tubos con agar Seller’s
Algodón
Caldos con diferentes especies de Pseudomonas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la parte del
estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
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2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO.
3.- Sembrar por picadura y estría el medio Seller’s.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia del género Pseudomonas?
2.- ¿Qué pruebas de laboratorio permiten diferenciar una enterobacteria del género Pseudomonas?
3.- ¿Para qué es útil el medio O/F y cuál es su fundamento?
4.- ¿Por qué es importante utilizar el medio Seller´s, en la identificación de Pseudomonas?
5.- ¿Qué pruebas de laboratorio son útiles para diferenciar especies de Pseudomonas?
Piocianina + - -
Pioverdina + + +
Reducción de nitratos V (74 %) V (19 %) -
Desarrollo a 42 °C + - -
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PRÁCTICA 5
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y
Brucella
Introducción
Los miembros del género Haemophilus son bacilos gramnegativos pequeños, inmóviles, que requieren
de factores de crecimiento presentes en la sangre como el factor X, que es un grupo de compuestos
tetrapirrólicos termoestables, como la hemina. Mientras que el factor V, es el dinucleótido de
nicotinamida adenina (NAD). Estos dos factores están contenidos en los eritrocitos, por lo tanto el agar
chocolate es un buen medio de cultivo para la recuperación de Haemophilus. Las especies de
Haemophilus humanos, están vinculadas en su mayoría con infecciones del tracto respiratorio superior
a excepción de H. ducreyi que es un patógeno de tracto genital.
Objetivo
Identificar los géneros Haemophilus y Brucella.
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Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar chocolate
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar soya tripticasa
Reactivo para catalasa Sensidiscos con factores V y X
Portaobjetos Benzal
Algodón Botellas para hemocultivo
Caldos con Haemophilus sp Placas con agar sangre de carnero
Caldos con Brucella sp Tubos con medio urea
Colorantes fucsina básica, tionina y azul de tionina.
Metodología
Para Haemophilus:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar chocolate.
2.- Incubar 48-72 horas a 37° C.
3.- Leer morfología colonial.
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de Gram.
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en agar soya tripticasa con sensidiscos impregnados
de los factores V y X.
Para Brucella
1.- Sembrar en botellas para hemocultivo.
2.- Incubar a 35° C durante 4-6 semanas.
3.- Hacer subcultivos en agar sangre y chocolate.
4.- Identificar especies, mediante pruebas bioquímicas como necesidad de CO2, producción de ureasa y
sensibilidad a los colorantes fucsina básica, tionina y azul de tionina.
Observaciones 18
Resultados
Interpretación
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Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Haemophilus?
2.- ¿Existe algún agar comercial para el aislamiento de Haemophilus?
3.- Menciona la(s) especies de Haemophilus que requieran el factor V, la(s) que requiera el factor X y
la(s) que requiera ambos factores.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Brucella?
5.- ¿Qué especies de Brucella requieren C02 para crecer, cuales producen H2S y cuales ureasa?
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PRÁCTICA No.6
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria y
Moraxella
Introducción
Los miembros del género Neisseria son microorganismos gramnegativos cocoides o baciliares que
pueden encontrarse en pares o en cadenas cortas. Son inmóviles, no forman esporas y producen ácido a
partir de carbohidratos lo que permite identificar especies. Neisseria gonorrhoeae es la especie de
importancia en salud publica ya que se adquiere por transmisión sexual
Neisseria catarrhalis ahora conocida como Moraxella catarrhalis, puede ser responsable de
infecciones respiratorias principalmente en niños y ancianos, crece en agar chocolate y agar nutritivo,
no produce ácido a partir de glucosa, maltosa, fructosa, sacarosa no lactosa.
Objetivo
Identificar los géneros Neisseria y Moraxella.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Thayer-Martin
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar chocolate
Reactivo para catalasa Placas con agar nutritivo
Portaobjetos Benzal
Algodón Placas con agar DNasa
Caldos con Neisseria sp
Caldos con Moraxella sp
Tubos con CTA con diferentes carbohidratos
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Metodología
Para Neisseria
1.- Sembrar una placa de Thayer-Martin en forma de Z y luego estriar.
2.- Incubar 24-48 horas a 37° C.
3.- Leer morfología colonial.
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de Gram.
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en bases de CTA con diferentes carbohidratos.
Para Moraxella
1.- Sembrar en agar chocolate y agar nutritivo.
2.- Incubar 24-48 horas a 37° C.
3.- Leer morfología colonial.
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa, tinción de Gram y DNasa.
Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Neisseria gonorrhoeae?
2.- ¿Que tipo de medio es el Thayer-Martin?
3.- Menciona las especies de Neisseria y su comportamiento frente a los diferentes carbohidratos.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica de Moraxella catarrhalis?
5.- Que tipo de muestra debe utilizarce para la identificación de Neisseria gonorrhoeae y cual para
Moraxella . catarrhalis?
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PRÁCTICA No.7
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: LACTOSA POSITIVAS
Introducción
La familia Enterobacteriaceae está conformada por un número importante de especies, que incluyen
bacilos gramnegativos, con metabolismo fermentador, anaerobios facultativos, catalasa positivos,
oxidasa negativos, la mayoría son móviles, reducen los nitratos a nitritos, y no presentan condiciones
nutritivas exigentes, crecen muy bien en agar Mac Conkey.
La familia Enterobacteriaceae tiene como nicho ecológico el tracto intestinal de gran variedad
de seres vivos, incluyendo al hombre, lo cual facilita su presencia prácticamente en todo lugar. La
mayoría de las enterobacterias son parte importante de la microbiota intestinal, comportándose como
patógenos solo en el caso de pacientes inmunocomprometidos (patógenos oportunistas).
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Objetivo
Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características bioquímicas que definen a la familia
Enterobacteriaceae y a las enterobacterias lactosa positivas.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Mac Conkey
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar EMB
Reactivo para catalasa Benzal
Portaobjetos
Algodón
Caldos con Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter
Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CITRATO Y UREA para pruebas bioquímicas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y EMB.
2.- Inocular pruebas bioquímicas.
3.- Inocular galerías.
4.- Incubar.
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de Gram, catalasa, oxidasa.
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
Observaciones
Resultados
Interpretación
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Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias?
2.- Las enterobacterias se han clasificado en dos grupos: lactosas (+) y lactosas (-), ¿qué géneros de
importancia médica se encuentran en cada uno de estos grupos?
3.-De las bacterias lactosa positivas menciona a las inmóviles y a las que son capaces de producir H2S?
4.-¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que permiten identificar a las enterobacterias y menciona el
fundamento bioquímico de cada una de ellas?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial.
b) Tinción de Gram.
c) Pruebas de catalasa y oxidasa.
d) Pruebas bioquímicas.
e) Establecer género y especie de la cepa problema.
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PRÁCTICA No.8
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: LACTOSA NEGATIVAS
Introducción
Dentro de las bacterias lactosa negativas se encuentran los patógenos primarios como es el caso de
Salmonella spp., Shigella spp. y Yersinia spp.
La tribu Salmonelleae contiene un único género Salmonella y reciben el nombre del biólogo
estadounidense Salmon. Esta tribu está relacionada con la salmonelosis que es una causa importante de
enfermedad entérica bacteriana en seres humanos y animales. Se estima que ocurren 1.4 millones de
casos anuales de salmonelosis en seres humanos en los Estados Unidos. Estas infecciones son causadas
por ingesta de alimentos, agua o leche contaminados con excremento de animales o humanos. Las
salmonelas son patógenos primarios de los animales inferiores como vacas, cerdos, mascotas, etc. que
constituyen la fuente principal de salmonelosis no tifoidea en los humanos. Mientras que Salmonella
typhi es específico del humano y causa fiebre tifoidea.
Objetivo
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Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características bioquímicas que definen a la familia
Enterobacteriaceae y a las enterobacterias lactosa negativas.
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Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Mac Conkey
Sensidiscos de oxidasa Placas con agar Salmonella-Shigellla (SS)
Reactivo para catalasa Benzal
Portaobjetos Caldos con Salmonella sp, Shigella sp, Proteus sp
Algodón
Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CITRATO Y UREA para pruebas bioquímicas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y SS.
2.- Inocular pruebas bioquímicas.
3.- Inocular galerías.
4.- Incubar 24 horas a 37° C.
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de Gram, catalasa, oxidasa.
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
Observaciones
Resultados
Interpretación
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Cuestionario
1.- ¿Qué géneros son lactosa negativas?
2.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias lactosa negativas?
3.- De las lactosa negativas, menciona a las enterobacterias inmóviles y a las que son capaces de
producir H2S?
4.- ¿Cuál es una característica importante de la tribu Proteae?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer género y especie de la cepa problema
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PRÁCTICA No.9
Introducción
Este género se define como bacilos gramnegativos, fermentadores, móviles, catalasa y oxidasa
positivas. Algunas especies se caracterizan por ser halofílicas. Todos los géneros se consideran
patógenos, resaltando en particular Vibrio cholerae por ser el agente causal del cólera, enfermedad
que se presenta comúnmente en forma epidémica, sobre todo en países en vías de desarrollo (ver tabla
5).
Objetivo
Determinar con base a las pruebas de laboratorio correspondientes, las características bioquímicas más
relevantes de este género.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas de agar Mac Conkey
Sensidiscos de oxidasa Placas de agar TCBS
Reactivo para catalasa Benzal
Portaobjetos Caldos con Vibrio cholerae y V. parahaemolyticus
Algodón
Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CITRATO Y UREA para pruebas bioquímicas
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa.
2.- Sembrar las pruebas bioquímicas convencionales.
3.- Incubar 24 horas a 37° C. 29
4.- Leer morfología colonial.
5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción de Gram.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Qué géneros conforman a la familia Vibrionaceae?
2.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Vibrio?
3.- Indique el mecanismo de patogenicidad de Vibrio cholerae.
4.-¿Qué pruebas permiten diferenciar entre las especies de Vibrio?
5.-De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer género y especie de la cepa problema
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PRÁCTICA No.10
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus y
Enterococcus
Introducción
Estos géneros se caracterizan por ser cocos grampositivos agrupados en pares o cadenas, generalmente
inmóviles, catalasa negativos en general, no esporulados, aerobios y anaerobios facultativos con
metabolismo fermentativo en el que producen ácido láctico, fórmico, etanol y CO 2, crecen
óptimamente a 37° C.
Los Enterococcus se encuentran de manera natural en muchos organismos, incluidos los
humanos, como parte de su flora intestinal. Son microorganismos muy resistentes, capaces de tolerar
concentraciones relativamente altas de sales y ácidos.
El género de mayor interés médico son los Streptococcus. Algunas especies forman parte de la
flora normal del hombre y otras están relacionadas con cuadros clínicos de amigdalitis, celulitis,
erisipela, faringitis, rinitis, fiebre escarlatina, sepsis puerperal, neumonía, endocarditis bacteriana,
caries, meningitis, infecciones en vías urinarias y heridas, fiebre reumática, glomérulo nefritis y
conjuntivitis purulenta.
Objetivo
Caracterizar bioquímicamente a las especies más importantes de ambos géneros.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas con agar sangre de carnero
Sensidiscos de oxidasa Caldos BHI con Streptococcus pyogenes
Reactivo para catalasa Caldos BHI con Streptococcus agalactiae
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Portaobjetos Caldos con Staphylococcus aureus
Algodón Caldos BHI con Enterococcus sp
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Metodología
HEMÓLISIS
CAMP +
Hidrólisis del hipurato +: S. agalactiae
S. pneumoniae Enterococcus
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre carnero.
2.- Realizar pruebas de CAMP.
3.- Realizar pruebas de sensibilidad a bacitracina.
4.- Realizar pruebas de sensibilidad a optoquina.
5.- Realizar tinción de Gram y observar al microscopio.
6.-Incubar 24 horas a 37° C. 32
7.- Leer morfología colonial.
8.- Interpretar resultados.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la definición del género Streptococcus?
2.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de CAMP?
3.- ¿Para que se utiliza la prueba de sensibilidad a bacitracina y optoquina?
4.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Streptococcus, de ser positiva la respuesta,
menciona la especie.
5. Menciona las especies más importantes de Streptococcus y qué enfermedad producen.
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PRÁCTICA No.11
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus
Introducción
Este género está constituido por cocos grampositivos, agrupados en racimos, catalasa positiva con
metabolismo fermentativo. Son responsables principalmente de infecciones supurativas de la piel y
tejidos blandos. Así como de infecciones oportunistas. Se reconocen 3 especies: Sta. aureus, Sta.
epidermidis, Sta. Saprophyticus (ver tabla 6).
Objetivo
Observar las características más relevantes del género, resaltando aquellas que permiten su
diferenciación con otros cocos grampositivos de cercana filiación.
Tabla 6.
PRUEBAS DE S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus Diferenciación de
LABORATORIO las especies de
Color de las colonias Amarillo- Blanco Blanco Staphylococcus
blanco
Hemólisis en agar sangre + +/- -
Crecimiento anaerobio + + +/-
Coagulasa y DNasa + - -
Fermentación de la glucosa + + +
Fermentación del manitol + - -/+
Novobiocina Sensible Sensible Resistente
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Material
Equipos de tinción de Gram Placas con agar sangre de carnero
Sensidiscos de oxidasa Caldos con Staphylococcus aureus
Reactivo para catalasa Caldos con Staphylococcus epidermidis
Portaobjetos Caldos con Staphylococcus saprophyticus
Algodón Placas con agar DNasa
Benzal Plasma de conejo
Sensidiscos con novobiocina
Placas con agar sal y manitol
Metodología
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre y una de agar sal y manitol.
2.- Incubar 24 horas a 37° C.
3.- Leer morfología colonial y microscópica.
4.- Realizar pruebas de identificación de especie.
5.- Interpretar resultados.
Observaciones
Resultados
Interpretación
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Cuestionario
1.- ¿Cuál es la definición e importancia del género Staphylococcus?
2.- ¿Qué prueba permite diferenciar entre el género Streptococcus y Staphylococcus?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de coagulasa y cómo se realiza en el laboratorio?
4.- ¿Cuáles son los ingredientes del agar de sal y manitol y por qué es importante utilizarlo para la
identificación de este género y no de otros?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Staphylococcus, de ser positiva la respuesta,
menciona la especie.
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PRÁCTICA 12
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAMPOSITIVOS: Bacillus
Introducción
Los microorganismos del género Bacillus son bacilos grampositivos, formadores de endosporas,
catalasa positivos, son móviles excepto B. anthracis y β-hemolíticos excepto B. anthracis. Este género
es ubicuo en la naturaleza ya que posee endosporas y éstas pueden permanecer en campos
contaminados por periodos de 10 hasta 30 años. B. anthracis es el agente causal de ántrax en animales,
principalmente vacas y ovejas (ver tabla 7).
Objetivo
Identificar por pruebas de laboratorio al género Bacillus.
Material
Equipos de tinción de Gram Placas con agar sangre de carnero
Placas con agar nutritivo Equipo para tinción de Shaeffer-Fulton
Reactivo para catalasa Caldos con Bacillus sp
Portaobjetos Sensidiscos de oxidasa
Algodón Caldo nutritivo
Benzal Tubos con gelatina
Metodología
1.- Inocular una placa de agar sangre carnero.
2.- Inocular un tubo de caldo nutritivo e incubarlo a 42° C.
3.- Inocular un tubo con gelatina e incubarlo a 4° C por 7 días.
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4.- Leer morfología colonial, buscar hemólisis, hacer tinción de Gram y Shaeffer-Fulton
5.- Interpretar resultados.
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Observaciones
Resultados
Interpretación
Cuestionario
1.- ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se realiza en el laboratorio?
2.- Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus.
3.- Menciona medios de cultivo para el aislamiento de Bacillus.
4.- Menciona las medidas de seguridad que debe tener el laboratorio para poder trabajar con Bacillus
anthracis.
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
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Lecitinasa + +
Colonias rugosas + +
Movilidad - +
Cápsula -
+
Hemólisis +
-
Sensibilidad a penicilina -
+
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Bibliografía
1. In Whitman, W. B., Bergey's Manual Trust,, & Wiley Online Library (Online service),. (2015).
Bergey's manual of systematics of archaea and bacteria.
3. Mac, F. J. F., Rondinone, S., & Giovanniello, O. (2003). Pruebas bioquímicas para la
identificación de bacterias de importancia clínica. Buenos Aires: Médica Panamericana.
5. Murray, P. R., Rosenthal, K. S., Pfaller, M. A., & Azzi, A. (2010). Microbiologia medica.
Milano: Elsevier Masson.
6. NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002.
7. Willey, J. M., Sherwood, L., Woolverton, C. J., Prescott, L. M., & Willey, J. M. (2011).
Prescott's microbiology. New York: McGraw-Hill.
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9. EJES TRANSVERSALES
Eje (s) transversales Contribución con la asignatura
Formación Humana y Social Promover dentro y fuera del laboratorio un clima
de convivencia plural y responsable; con libertad
de expresión y pensamiento buscando la
equidad, sin discriminación y respeto a los
derechos de los demás.
Desarrollo de Habilidades en el uso de las Se promoverá para el logro de los objetivos de
Tecnologías de la Información y la Comunicación aprendizaje, que los productos académico de los
estudiantes sean diseñados a través de las
TIC´s, utilizando los laboratorios de cómputo y
disciplinarios, bibliotecas, auditorios, plataformas
virtuales y áreas de esparcimiento.
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