CARRERA: MEDICINA

CÁTEDRA: BIOQUÍMICA 2

Cuestionario Guía 5 Tema VI (A): HIDRATOS DE CARBONO II: DEGRADACIÓN OXIDATIVA DEL PIRUVATO

I. Descarboxilación oxidativa del piruvato

1. a) ¿En qué organela tiene lugar la decarboxilación oxidativa del piruvato y cómo llega el piruvato formado
en la glucólisis a este compartimiento subcelular?

Tiene lugar en la matriz mitocondrial de las mitocondrias. Llega a este sitio gracias a un transportador
(simporte) que lo introduce en la matriz que lo degrada por descarboxilación oxidativa quitándole un grupo
carboxilo, desprendiendo un CO2 y queda un resto de dos carbonos acetilo o acetato. El transporte difunde
piruvato y un H+ para que ingrese a la mitocondria.

OM
b) ¿Qué otras fuentes pueden aportar piruvato? Identifique cuantos carbonos tiene el piruvato.

• Aminoacidos glucogénico como alanina, serina, glycina, cisteina y treonina.

• Lactato (lactato deshidrogenasa)
• Glucosa

.C
DD
LA
FI


2. Existe una variedad de trastornos del metabolismo del piruvato. Suponga que el defecto radica en una
deficiencia de Piruvato deshidrogenasa, PDH.

a. Escriba la reacción neta del proceso bioquímico involucrado. ¿Es un proceso reversible?

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No, no es un proceso reversible.

OM
.C
DD
b. Mencione la composición del complejo enzimático.
LA

Sistema multienzimatico denominado PIRUVATO DESHIDROGENASA. Una voluminosa agrupación molecular,

constituida por tres enzimas. A) piruvato descarboxilasa o E1. B) dihidrolipoil transacetilasa o E2 y C)
dihidrolipoil deshidrogenasa o E3. Ademas de que participan 5 coenzimas: a) pirofosfato de tiamina (PPT), b)
acido lipoico, c) coenzima A, d) FAD y e) NAD.
FI


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 OM
.C
DD
c. ¿Cómo se hallarán los niveles plasmáticos de lactato y piruvato en los pacientes con deficiencia del
LA

complejo?

Niveles séricos elevados de lactato, piruvato y alanina, lo que produce una acidosis láctica crónica.

d. Si el piruvato no puede ser convertido en acetil-CoA, ¿qué otra fuente de acetil-CoA utilizarán los tejidos?
FI

Aminoacidos y acidos grasos a través de la beta oxidación.



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 OM
.C
e. ¿Qué tipo de dieta beneficiaría a los pacientes con esta deficiencia enzimática?
DD
Lo beneficiaria una dieta cetogénica, donde se reducen al mínimo los glúcidos.

f. Reconozca los diferentes mecanismos de regulación del complejo Piruvato Deshidrogenasa: - Describa la
regulación covalente del complejo PDH. - ¿Cuál es el efecto de la insulina sobre el complejo? ¿Cuál es el
efecto del calcio? - Nombre los principales moduladores positivos y negativos.
LA

Regulacion por fosforilación y desfoforilacion (regulacion covalente).

COMPLEJO DESFOSFORILADO ACTIVO – COMPLEJO FOSFORILADO INACTIVO

• La inactivación del complejo se consigue con una proteína quinasa Mg+2 – ATP que está unida al
complejo.
FI

• La reactivación del complejo se logra mediante una fosfoproteína fosfatasa, que lo desfosforila en una
reacción que es dependiente de Mg+2 y Ca+.
• Un aumento de CoA/CoASH y NADH/NAD+ activan a la quinasa que fosforila a la piruvato quinasa
(modulador negativo).


• Un aumento de piruvato, inhibe a la quinasa y el complejo desfosforilado de la piruvato

deshidrogenasa aumenta su actividad.
• El Ca+ es un potente activador de la proteína fosfatasa (desfosforila la PDH) por lo que aumenta su
actividad.
• La insulina activa la piruvato deshidrogenasa en el tejido adiposo.
• Las catecolaminas activan la piruvato deshidrogenasa en el tejido cardiaco.
• El AMPc no actúa ya que la proteína quinasa y fosfatasa de la PDH es independiente o insensible al
AMPc.

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.C
DD
LA

II. Ciclo de Krebs o de los ácidos tricarboxílicos

3. Escriba la reacción neta del ciclo e indique cuál de los siguientes metabolitos experimenta una oxidación
neta a través del ciclo: α-cetoglutarato, succinato, citrato o acetil-CoA. Justifique.

El Acetil CoA producido en las diversas vias catabólicas generadoras de energía de muchas células se oxida
FI

completamente a CO2 en una serie cíclica de reacciones denominadas ciclo de los acidos tricarboxilicos TCA.


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4. ¿Por qué se dice que el Ciclo de Krebs es anfibólico y autocatalítico?

Es autocatalitico porque los intermediarios se regeneran en cada vuelta (provee sus propios sustratos) esto
quiere decir, a partir de una sola molecula de oxalacetato se degradan moléculas de acetil CoA hasta CO2,
H2O y ATP sin ser consumidos. Es anfibólico porque participa tanto en vias catalíticas (catabolizan los
carbonos de acetil) y anabólica (a partir de los intermediarios podemos obtener otros compuestos).

5. Explique por qué los siguientes factores afectan la velocidad del Ciclo de Krebs:

a) Disponibilidad de coenzimas oxidadas

OM
.C
DD
LA
FI

b) Actividad de la Piruvato deshidrogenasa

c) Transporte y β oxidación de ácidos grasos ( los acidos grasos se oxidan, aumenta la disponibilidad de acetil
CoA y aumenta la velocidad del ciclo de Krebs)


d) Concentración de ATP

la citrato sintasa purificada es inhibida por el ATP, NADH, succinil CoA y derivados de acil CoA de cadena
larga.

A su vez la isocitrato deshidrogenasa es estimulada por ADP y algunos casos de AMP, y es inhibida por el
ATP y el NADH.

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El complejo alfa cetoglutarato deshidrogenasa es inhibido por ATP como GTP, NADH y succinil CoA. Mientras
que el Ca+ lo activa en ciertos tejidos.

OM
.C
DD
LA

6. ¿Qué destino tienen los NADH y FADH2 producidos en el Ciclo de Krebs?

Los NADH y FADH2 producidos durante el ciclo de Krebs tienen como destino la cadena de transporte de
FI

electrones, donde se oxidarán entregando sus electrones, de esta manera generando una transferencia de su
H+ a la cadena y obteniendo así un pasaje de H+ y e-.


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 OM
ENZIMA
.C MODULADORES Tipo de modulación
+ -
DD
Citrato Inhibición x
producto
Citrato Sintasa
Succinil CoA inhibición
competitiva
ATP Inhibición
alostérica
LA

NADH Inhib. Alostérica

Isocitrato Deshidrogenasa Calcio Positivo
alostérico
ADP Positivo
alostérico
FI

ATP Inhibe
Calcio Activa
Alfa-cetoglutarato Deshidrogenasa Succinil CoA Inhibición x
producto


NADH inhibición

La citrato sintasa es inhibida por producto, es decir, que, a mayores concentraciones de citrato, la enzima se inhibe.

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La isocitrato deshidrogenasa se inhibe por elevadas concentraciones de ATP y NADH; esta enzima convierte el isocitrato
en alfa-cetoglutarato, es una reacción oxidativa que necesita reducir un NAD+ a NADH. En altos porcentajes de energía,
el NADH no se encuentra oxidado por lo tanto no hay disponibilidad de él.

OM
.C
DD
LA
FI


III. Cadena de transporte de electrones o cadena respiratoria

8. ¿A qué se denomina cadena respiratoria y como está organizada? (Esquematice).

La cadena respiratoria o cadena de transporte de electrones es un sistema de transportadores de electrones situado en

la membrana interna de la mitocondria. En presencia de O2, este sistema convierte equivalentes de reducción en energía
utilizable en forma de ATP, mediante fosforilación oxidativa. El que tiene mayor afinidad por los electrones es el oxígeno,
reduciéndose y tomando protones para sintetizar agua.

Solo van a necesitar lanzaderas aquellas coenzimas reducidas que se reduzcan en la glucólisis, las que se generan en el
ciclo de Krebs no.

Las proteínas están organizadas desde un menor a mayor potencial redox para q el transporte sea posible.

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 OM
.C
DD
LA
FI


9. Potencial de reducción. Marque lo correcto y corrija y justifique lo incorrecto:

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a- El valor del potencial redox es una medida de la afinidad electrónica del par redox.

b- El valor de potencial de reducción o redox es más positivo cuando mayor es su afinidad por los electrones.

c- Cuanto menor es la diferencia de potencial redox (∆E) entre dos pares conjugados, mayor es la energía libre (∆G)
liberada en la reacción de óxido-reducción.

OM
.C
DD
LA
FI

NAD+ (-0,32V), FAD (-0,22 V), Co Q (+0,10), citocromo c (+0,235V), citocromo a (+0,29V), O2 (+0,82 V).


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 OM
.C
DD
LA
FI

1. Dador de electrones NADH+H. Aceptor de electrones E-FMN. Par redox conjugado NADH y NAD. Agente
reductor NADH. Agente oxidante E-FMN.
2. Dador de electrones E-FMNH2. Aceptor de electrones 2 Fe3+. Par redox (E-FMNH2) – (E-FMN). Agente Reductor


E-FMNH2. Agente oxidante 2 Fe3+.

3. Dador de electrones 2Fe2+ + 2H+. Aceptor de electrones CoQ. Par redox (2 Fe2) – (2 Fe 3+). Agente reductor
2Fe + 2+. Agente oxidante CoQ.

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 OM
.C
DD
LA

IV. Fosforilación oxidativa. Inhibidores y desacoplantes.

12. ¿Cuál es el mecanismo aceptado sobre el funcionamiento de la fosforilación oxidativa?

FI

La fosforilación oxidativa es la generación de ATP gracias a la oxidación de las coenzimas provenientes del
glucólisis, descarboxilación oxidativa del piruvato y ciclo de Krebs. Estas coenzimas les ceden sus electrones
al primer y segundo complejo proteíco de la cadena de transporte de electrones y a su vez, esto produce una
reacción exergónica (liberación de energía) utilizada para bombear protones desde la matriz mitocondrial


hacia el espacio intermembrana, provocando un gradiente electroquímico mayor en dicho espacio.

Al finalizar el proceso, se produce la quimiosmosis que consiste en la síntesis de ATP mediante el movimiento
de H+ a favor del gradiente electroquímico, llevado a cabo por la ATP sintasa. La fuerza para bombear los
protones hacia la matriz nuevamente utiliza energía del gradiente electroquímico.

13. ¿Qué significa que la cadena de transporte está acoplada a la fosforilación oxidativa?

El ATP sintetizado en la quimiosmosis es la regulación que tienen la cadena de transporte y sus procesos
anteriores. De esta manera, si hay una [ATP] alta, la cadena de transporte de electrones disminuye su
velocidad, y si hay una [ADP] alta, la cadena aumenta su velocidad de reacción para poder bombear protones
con más velocidad y producir más ATP esa relación de acoplamiento se denomina control respiratorio.

Si la síntesis de ATP deja de funcionar por la ATP sintasa, frena la cadena de transporte de e-, por eso están
acopladas.

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De esta forma la necesidad de ATP por parte de una celula actúa regulando de forma coordinada la velocidad
de flujo de electrones a través de la cadena respiratoria, asi como las reacciones del ciclo de Krebs y de la
oxidación de acidos grasos.

14. ¿Por qué la oxidación de succinato a fumarato produce una relación P/O de 2 mientras que la oxidación
de malato a oxalacetato produce una relación P/O de 3?

La reacción de oxidación de succinato a fumarato produce una relación P/O de 2 porque se utiliza la coenzima
FAD+/FADH2. La coenzima FAD+ se reduce a FADH2 y entrega sus electrones en la cadena pero cada par
entregado por esta coenzima, equivalen a la unión de dos moléculas de fosfato a dos de ADP, formando dos
moléculas de ATP. El FADH2 entrega sus electrones en el complejo II de la cadena de transporte de e-,
complejo que no bombea protones sino que lo ceden a otros complejos y se saltea un complejo, siendo
menor la cantidad de protones bombeados porque solo se cuentan los del III y IV.

OM
La reacción de oxidación de malato a oxalacetato produce una relación P/O de 3 porque utiliza la coenzima
NAD+/NADH. El NAD+ acepta un par de hidrógenos del malato en su oxidación para reducirse, así, al ceder
los electrones a la cadena se unen 3 fosfatos a 3 moléculas de ADP, formando 3 moléculas de ATP. El NADH
cede los electrones al primer complejo que sí bombea protones y además al seguir con la cadena, se
acumulan esos protones con los del complejo III y IV.

.C
La relación P/O es la cantidad de atp producido por átomo de oxigeno.

15. Los venenos de serpiente tienen elevada actividad de fosfolipasas y los lisoderivados por ellas producidos
DD
son desacoplantes del tipo ionóforo.

a- ¿Cómo se afectará la formación del gradiente electroquímico planteado en la teoría de Mitchell?

La formación del gradiente electroquímico se vera disminuidos debido a que el desacoplante presente en la
C.E produce un “hueco” en la membrana interna de la mitocrondria generando un espacio por donde pasaran
LA

los H+ difundiendo del espacio intermembrana a la matriz mitocondrial. La formación del gradiente
electroquímico estará afectado porque se dará la transferencia de otros protones como el K+, ya que volverá
a la matriz mitocondrial más positiva inhibiendo la transferencia de protones H+.

Si bien si se afecta el gradiente electroquímico la ATP sintasa sigue produciendo ATP pero en menor medida.
FI

b- ¿Cómo se alterará el pH del espacio intermembrana?

El pH del espacio intermembrana aumenta (básico) ya que los protones H+ salen de dicho espacio mediante
los desacoplantes.


c- ¿Qué ocurre con la velocidad de la cadena respiratoria mitocondrial?

Aumenta debido a la disminución del ATP, por ende se vera que se formara mas coenzimas oxidadas durante,
glucolisis, descarboxilación oxidativa del piruvato y ciclo de Krebs. Siendo asi que se vera el aumento de la
velocidad de la cadena respiratoria mitocondrial.

16. a) El cianuro es uno de los venenos más potentes, explique su mecanismo de acción.

Se fija al Fe3+ del hemo de la citocromo C oxidasa que cataliza el paso final de la cadena de transporte de e-
, e impide que el oxígeno se fije al centro binuclear y sirva como aceptor último de los electrones. Cesan la
respiración mitocondrial y la generación de energía, produciendo la muerte de la célula. La muerte debida al
envenenamiento por cianuro tiene lugar por asfixia tisular muy especialmente del sistema nervioso central.

b) El envenenamiento subletal con cianuro puede revertirse mediante la administración de nitritos que oxidan
la hemoglobina, a metahemoglobina (que tiene alta afinidad por el CN- ). ¿Por qué es efectivo este
tratamiento?

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La methemoglobina (Fe3+) compite con el citocromo a3 (Fe3+) por el cianuro, formando así un complejo
methemoglobina-cianuro. La administración de tiosulfato hace que el cianuro reaccione con el enzima
rodanasa y forma tiocianato, un compuesto no tóxico.
La methemoglobina compite con el citocromo a3 por el cianuro, se forma un complejo de methemoglobina-
cianuro. Esto es para evitar que se inhiba el complejo IV de la cadena de transporte de electrones.

17. ¿Por qué se inhibe el Ciclo de Krebs en un paciente que respiró monóxido de carbono CO? ¿Qué ocurre
con la Decarboxilación oxidativa del piruvato en ese mismo paciente?

El CO se une a la hemoglobina y estabiliza la forma R, disminuyendo la p50 y aumentando la afinidad de la

Hb por el oxígeno, así la Hb no entrega el oxígeno a las células. De esta manera, el oxígeno no puede ingresar
a la célula, haciendo que la cadena de transporte de electrones no tenga un último aceptor final de electrones
ni un oxidante para las coenzimas, por ello cesa la cadena de transporte de e- y a su vez, el ciclo de Krebs por

OM
falta de coenzimas oxidadas.

18. Si se monitorea el transporte electrónico midiendo la velocidad de consumo de O2 en una suspensión de

mitocondrias, dicha velocidad es alta solamente si se agrega un compuesto oxidable (donador de electrones),
ADP y Pi como se observa en la figura A:

.C
DD
LA
FI


I. Los resultados de este experimento demuestran que (marque la/s respuesta/s correcta/s):
a- La velocidad de la respiración mitocondrial se puede controlar por la [ADP]
b- La oxidación y la fosforilación están acopladas
c- La oxidación de succinato puede proceder sin la fosforilación concomitante de ADP

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