FISIOLOGÍA II LABORATORIO

SISTEMA
CARDIOVASCULAR
OBSERVACIÓN DE CÉLULAS
SANGUÍNEAS
 FROTIS SANGUÍNEO

Técnica hematológica que permite obtener una valiosa información sobre los elementos formes de
la sangre. En general un frotis podemos evaluar:

Morfología eritrocitaria.
Concentración y distribución de hemoglobina.
Distribución de los eritrocitos.
Morfología y recuento diferencial de los leucocitos.

El frotis sanguíneo es fácil de realizar porque necesita pocos elementos para llevarse a cabo: un
portaobjetos, un cubreobjetos y una gotita de sangre, una tinción (la más básica es hematoxilina-
eosina) y un microscopio.

El frotis sanguíneo lo que hace es extender una gota de sangre a través de un portaobjetos.

Se observa la
Es donde se morfología de los
observan todas eritrocitos. Además,
las células del se ve más en detalle
punto de vista los neutrófilos y
inmune monocitos

No permite distinguir Se pierde mucho

los elementos material
presentes en la
sangre
El frotis sanguíneo se utiliza para evaluar:

Morfología eritrocitaria: si está en su forma bicóncava normal, si tiene el color adecuado y

tamaño, etc.
Concentración y distribución de hemoglobina: se observa principalmente por la colorimetría
de la célula.
Distribución de los eritrocitos: al observar la cola del frotis sanguíneo, los eritrocitos deben
estar extendidos, no aglutinados, no aglomerados, y tener una forma adecuada.
Inclusiones y artificios de los eritrocitos.
Morfología y recuento diferencial de los leucocitos.
Inclusiones y artificios de los leucocitos.
Morfología y apreciación cualitativa del número de plaquetas: se cuentan a nivel de la cola del
frotis.
Artificios y agrupación de plaquetas.

¿Qué debo de observar?

10x:

Calidad global de la preparación.

Anormalidades:
-Rouleaux.
-Autoaglutinación.

40x:

Monocapa.
Anormalidades: aumento de células nucleadas.

100x:

Diferencial y evaluar morfología.

200-250 eritrocitos por campo.
5-10 plaquetas por campo.

Frotis óptimo:

Un frotis de sangre óptimo tiene las siguientes características:

Longitud mínima de 2,5 cm.

Transición gradual de un frotis grueso a uno delgado.
Borde cuadrado o recto.
Márgenes lisos y continuos.
Márgenes más estrechos que el portaobjetos del microscopio.
Ausencia de estrías, ondas o interrupciones.
La presencia de ciertos trastornos fisiológicos como anemia, policitemia, mieloma múltiple y
enfermedad de aglutininas frías da lugar a frotis los cuales son menos óptimos. El espesor o
delgadez del frotis de sangre puede ser regulado al ajustar la cantidad de sangre de la gota, al
modificar la velocidad con la cual se esparce, o al cambiar el ángulo en el cual se coloca el
portaobjetos de esparcimiento.

TIPO CELULAR FUNCIÓN NÚMERO VIDA MEDIA

6 3
Eritrocito Transporte de O2 y CO 2 4,2 - 5,8 x 10 /mm 120 días
2
3 3
5-9 x 10 /mm
Neutrófilo Fagocitosis 12-72 h
60-70%
3 3
5-9 x 10 /mm
Eosinófilos Defensa contra parásitos 12-72 h
2-4%
3 3
5-9 x 10 /mm
Basófilos Respuesta inflamatoria 12-72 h
0,5-1%
3 3
Precursor de macrófagos 5-9 x 10 /mm
Monocitos 100-300 días
(fagocitosis) 3-8%
3 3
5-9 x 10 /mm
Linfocitos B Producción de anticuerpos 100-300 días
20-25%
3 3
5-9 x 10 /mm
Linfocitos T Respuesta inmune celular 100-300 días
20-25%
4 3
Plaquetas Tapón plaquetario 25-40 x 10 /mm 5-9 días

Eritrocitos: Eosinófilos:
Forma bicóncava. Núcleo violeta.
Color rosa o rosa-anaranjado. Citoplasma azul con gránulos
Se mira en la cola del frotis. rojos o rojo anaranjado.

Basófilos: Núcleo azul oscuro o

Plaquetas: púrpura, gránulos púrpura casi
Color violeta pálido o púrpura. negros.
Linfocitos: Núcleo púrpura y
citoplasma azul celeste.
Neutrófilos:
Monocitos:
Núcleo violeta oscuro.
Núcleo laxo violeta.
Citoplasma rosado con
Citoplasma azul celeste.
granulaciones rojo violeta.
 Neutrófilos
segmentados

Neutrófilos
en cayado

Linfocitos

Monocitos

Eosinófilos

Basófilos

CAUSAS DE DISMINUCIÓN DEL CAUSAS DE AUMENTO DEL

PRUEBA INTERVALO DE REFERENCIA
RECUENTO DE HEMATÍES RECUENTO DE HEMATÍES

Conocido como policitemia:

Conocido como anemia:

Unidades convencionales:
6 eritropoyetina.
Hombres: 4,5-5,9 x 10 /microlitro
6 Tabaquismo.
Recuento Mujer: 4,1-5,1 x 10 /microlitro
de
hematíes Unidades sistema internacional:
12
Hombres: 4,5-5,9 x 10 /L
12
Mujeres: 4,1-5,1 x 10 /L
Deshidratación.
Enfermedades pulmonares.
Sangrados agudos o crónicos.
Tumores renales que
Destrucción de eritrocitos, por
producen un exceso de
ejemplo, por una anemia
hemolítica.
Déficits nutricionales, por
Vivir a grandes altitudes.
ejemplo, de hierro, vitamina B12
Trastornos genéticos
o folato.
(alteración de la capacidad
Trastornos de la médula ósea
de detección de las
como leucemia o mieloma
necesidades de oxígeno,
múltiple.
anomalías en la liberación de
Enfermedades inflamatorias
oxígeno).
crónicas.
Policitemia vera-enfermedad
Enfermedad renal crónica.
poco frecuente.
Conteo celular en cámara de Neubauer:
El hemograma consta de dos partes: el frotis y la
cámara de conteo de Neubauer.

También conocido como hemocitómetro. Es un

portaobjetos especial para contar células bajo el
microscopio.
Cada porta tiene dos cámaras de recuento.
Las muestras se aplican en el borde del cubre y
entrará por capilaridad al espacio entre el porta y
el cubre, llenando una de las cámaras.
La altura de este espacio en una cámara de
Neubauer es habitualmente de 0,1 mm.
Hay retículas trazadas en cada cámara de
recuento que la dividen en 9 zonas cuadradas, de
1 mm de lado cada una.
La forma en que se cuenta depende de la célula que se desea contar.

Eritrocitos se cuenta de la cámara del medio.

Células inmunitarias se cuentan en L1, L2, L3 o L4.

Preparación de muestra y conteo celular de eritrocitos:

1. Se toma la muestra sanguínea del paciente.
2. Se ocupa una pipeta para sacar un poco de sangre (0,5 ml).
3. Se debe diluir en un rango de 1:100 o 1:200.
4. Las primeras cuatro gotitas que vienen en la pipeta se eliminar porque puede ser que esta no
esté totalmente limpia, y de esta manera se evita que entren desechos a la cámara de
Neubauer.
5. Se pone el líquido a través del biselaje que tiene la cámara de Neubauer. Generalmente se
ponen 10 microlitros (la cámara no aguanta más).
6. Es importante que la muestra se asiente y se mantenga en su estado unos minutos, para luego
observarla en el microscopio.

Importante:
Se debe diluir la muestra sanguínea porque de lo contrario no podría observar nada,
ya que la sangre es extremadamente espesa por los elementos forme que tiene, por lo
cual la disolución sirve para tener un paneo general, en especial para realizar el
conteo.
 En el caso del recuento de eritrocitos se realiza en el cuadrante del medio (cuadrante 5).
En el caso del recuento de leucocitos, al ser el número de leucocitos mucho menor, no se
necesita un campo tan preciso para el conteo, por lo que se realiza en los cuadrantes 1, 3, 7 y 9.

Se observa un conteo eritrocitario normal. Se deben contar todos los eritrocitos que están dentro
del cuadrante (color rosado). Los eritrocitos que quedan en las orillas del cuadrante rosado, se
toman solo los de dos lados: la orilla superior y la orilla izquierda.

Ejemplo:
Eritrocitos/mm3 = Eritrocitos contados x Dilución x 10 x 5
Eritrocitos/mm3 = 350 x 200 x 10 x 5
Eritrocitos/mm3 = 3.500.000
Eritrocitos/mm3 = 3.5 x 106 /mm3
En el caso de las células inmunes, el proceso es el mismo, solo varía en el factor de dilución, ya que
las células inmunes se encuentran en menor cantidad, entonces la dilución no puede ser 1:200
como en los eritrocitos, sino que es 1:20.

1. Se toma la muestra sanguínea del paciente.

2. Se ocupa una pipeta para sacar un poco de sangre (0,5 ml).
3. Se debe diluir en 1:20
4. Al buffer en el cual se va diluir se le ponen unas gotitas de colorante, porque se necesitan
observar las células inmunes con coloración adecuada.
5. Las primeras cuatro gotitas que vienen en la pipeta se eliminar porque puede ser que esta no
esté totalmente limpia, y de esta manera se evita que entren desechos a la cámara de
Neubauer.
6. Se pone el líquido a través del biselaje que tiene la cámara de Neubauer. Generalmente se
ponen 10 microlitros (la cámara no aguanta más).
7. Es importante que la muestra se asiente y se mantenga en su estado unos minutos, para luego
observarla en el microscopio.

Ejemplo:
Leucocitos/mm3 = Leucocitos contados x Dilución x 2.5
Leucocitos/mm3 = Leucocitos contados x 50
Leucocitos/mm3 = 120 x 50
Leucocitos/mm3 = 6.000
Leucocitos/mm3 = 6.0 x 103 /mm 3
Realización de frotis sanguíneo:
Procedimiento:

1. Con una lanceta estéril realizar una punción en el

pulgar.
2. Depositar una gota de sangre en la parte central de
un portaobjetos.
3. Colocar el portaobjetos como se indica en el dibujo y
deslizarlo sobre toda la superficie del portaobjeto de
manera que se pueda obtener una fina película de
sangre.
4. El porta absorbe la gota y la arrastra, pero sin pasar
nunca por encima para no dañar los hematíes.
5. Colocar unas gotas de alcohol absoluto sobre el
frotis y dejar que el alcohol se evapore para fijar la
preparación.
6. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar
durante unos 15 min. Evitar la desecación del
colorante agregando más líquido.
7. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina
dejándola actuar 1 min.
8. Volver a lavar hasta que no queden restos de
colorante.
9. Dejar secando aireando el porta.
10. Observar al microscopio.