Las plaquetas reticuladas medidas por

citometría de flujo: Un marcador indirecto

de actividad trombocitopoyética
 Las plaquetas fueron
descritas en 1841 por
Addison como pequeñas
partículas sanguíneas
 G. Bizzozero en 1882:
Denominación de
plaquetas, adhesividad.
 Osler y Hayem al final del
siglo XIX, identifico los
mismos elementos al
examinar al microscopio
muestras de sangre
 Trombopoyetina de
riñones e hígado

 Fragmentos celulares anucleadas

de morfología discoide.

 VR: 150 000 a 450 000 x mm3

 Tamaño: de 2 a 4 micras
 MEGACARIOPOYESIS:
Generacion y maduración de los
megacariocitos.
 TROMBOPOYESIS:
producción y liberación de
plaquetas a los sinusoides de la
médula ósea.
Las plaquetas están implicadas principalmente en la
hemostasia primaria mediante sus funciones de
adhesión, agregación, cambio de forma y secreción.
De forma directa e indirecta en:
 Coagulación
 Inflamación
 Cicatrización de las heridas
 Fibrosis tisular
 Trombosis
 Arteriosclerosis
 Diseminación neoplásica (ligando de la selectina)
PATOLOGIA PLAQUETARIA

TROMBOCITOS

Trombosis

TROMBOCITOPENIA

Hemorragias
 TROMBOCITOPENIA
Reducción de la
producción plaquetaria
CAUSA
RECUENTO DE
Aumento de la destrucción
PLAQUETAS
plaquetaria
< 150000 /mm3

Aumento del secuestro

Son más frecuentes y en la mayoría se esplénico
reconoce un mecanismo inmune

Causada por autoanticuerpos: Purpura

Trombocitopenica Autoinmune (PTA)

70 % DE LOS PACIENTES TIENEN

ANTECEDENTE DE ALGUNA ENF.
VIRAL
 Hematomas

Palidez

Epistaxis
MANIFESTACIONES

Gingivorragia
CLÍNICAS

Hematuria

Melena

Petequias
Ampollas
cutáneas con
contenido
hemático
Hemorragia

Equimosis
Origen de las trombocitopenias
 TROMBOCITOPENIAS CENTRALES
Se producen por alteración en alguno de los precursores
plaquetarios
. Cuando el problema afecta la “stem cell” pluripotente se
asocia a otras citopenias. En cambio, si el precursor afectado
ya está comprometido en la línea megacariocítica suele
desarrollarse una trombocitopenia aislada. Según el tipo e
intensidad de la lesión celular puede existir desde una aplasia
total de la línea megacariocítica a una trombocitopoyesis
ineficaz, en la que los progenitores y megacariocitos están
presentes pero no son capaces de producir plaquetas en
cantidades adecuadas.
Trombocitopenias periféricas:
Son producidas básicamente por dos mecanismos:
1. Incremento de la destrucción.
2. Consumo.
Ambas situaciones provocan respuestas compensadoras similares:
a). En las primeras horas aumenta el VPM y se producen
citoquinas estimuladoras de la megacariocitopoyesis y de la
producción de plaquetas, principalmente la trombopoyetina (TPO).
Este aumento de VPM puede estar relacionado con un incremento
del número de plaquetas reticuladas y plaquetas de estrés (o
proplaquetas) por desprendimiento acelerado de estructuras
plaquetares desde el citoplasma megacariocítico.
b. Si la causa de la trombocitopenia persiste en el tiempo, se
induce un aumento de la producción de citoquinas estimuladoras y,
seguidamente una estimulación de la proliferación de progenitores
en un intento de mantener la hiperproducción de plaquetas.
Pseudotrombocitopenias:
 EDTA Fenómeno de aglutinación in vitro de las plaquetas. es
un fenómeno causado por anticuerpos IgG
antiplaqueta EDTA dependientes.
 Satelitismo plaquetario: o adhesión de las plaquetas a
la superficie de los polimorfonucleares neutrófilos.
 Las crioaglutininas: poseen la propiedad de aglutinar
in Vitro a las plaquetas cuando la temperatura de la
muestra desciende por debajo de la fisiológica (37 °C).
 DIAGNOSTICO:

A LO LARGO DE HISTORIA…

Aspirado de medula ósea

1969 1990 1995 2011

Estudio de la IPF%
Se Canal
cinética Plaquet Colorant
de las pudieron de PLT-
plaquetas as e
marcadas medir por F
reticula fluoresce
con citometría Mayor
radionucleido das nte de
s de flujo SyE
RNA
La primera descripción se realizó en 1969, a partir de su visión directa en extensiones
periféricas de un modelo animal de pérdida de sangre. Los primeros trabajos que investigan
su aplicación clínica no aparecen hasta 1990, cuando es posible utilizar la citometría de flujo
para su identificación.
 Plaquetas reticuladas: (Marcador indirecto que
evalua la actividad megacariocitica)

Las plaquetas reticuladas (PR) son las formas

más jóvenes de las plaquetas circulantes, que
contienen ARN residual, y por tanto
constituyen el equivalente plaquetario de los
reticulocitos de la serie roja.

Reflejan la actividad megacariocitopoyética

de la médula ósea a tiempo real: Vida media
24 horas.
 Los niveles de la fracción de plaquetas inmaduras suben a medida
que aumenta la producción de plaquetas de la médula ósea. Por lo
tanto, su medición ofrece una evaluación de la producción de
plaquetas de la médula ósea a partir de una muestra de sangre
periférica, de modo parecido a cómo un recuento de reticulocitos
puede dar la medida de la producción de eritrocitos.

 El %FPI tiene una alta utilidad clínica en el diagnóstico de

laboratorio y el tratamiento de la trombocitopenia, debido a su
capacidad de relacionar niveles elevados en el % FPI con un
aumento de la destrucción de plaquetas periféricas. Es de
especial utilidad para apoyar el diagnóstico de la púrpura
trombocitopénica idiopática y la púrpura trombocitopénica
trombótica, así como para distinguir entre estos trastornos y una
inhibición o una insuficiencia de la médula ósea. En éste último
caso, el valor de la %FPI debería ser bajo.
Plaquetas reticuladas
Por citometría de flujo
Gold estándar
Dificultad en la estandarización
y realización en laboratorios de
rutina.
Se consideran grandes cuando son
mayores de 4 a 8 um de diámetro y
gigantes cuando su diámetro es mayor.
Fracción de plaquetas Inmaduras (IPF)

Proveedores de contadores hematológicos

automatizado: Abbott y Sysmex
OXACIN
Sysmex XE2100 y XE5000 AY
Abbott Cell-Dyn Sapphire POLIME
TINA
Sysmex XE2100 Abbott Cell-Dyn Sapphire
 Citometría de flujo. Principios generales. Aplicación al estudio de las plaquetas.

La citometría de flujo es una técnica con gran potencial analítico, que reside principalmente en la posibilidad
de medir diversos parámetros en decenas de millares de células individuales en pocos segundos. Básicamente
el citómetro de flujo mide propiedades de absorción y dispersión de luz por la célula o partícula subcelular, y
fluorescencia emitida por fluorocromos unidos a componentes celulares de interés, inducidas por una
iluminación apropiada .  

Los componentes básicos de un citómetro de flujo:

1. Fuente de luz, que en general es un rayo láser, por tratarse de una fuente de luz altamente
direccionada, monocromática, coherente e intensa. La luz emitida, además, está concentrada en
un haz estrecho. La mayoría de los citómetros actuales disponen de un láser de ión argón.  

2. Cámara de flujo, en la que se orienta el flujo de células y se consigue el paso de éstas en

forma individual.  

3. Sistema óptico, constituido por lentes, espejos dicroicos y filtros, que enfocan el haz de luz
para iluminar la muestra y descomponen la emisión de fluorescencia en sus componentes
individuales.  

4. Fotomultiplicadores y convertidores analógicos digitales, que detectan y convierten las

señales luminosas en impulsos eléctricos y estos en señales digitales.  

5. Ordenador para adquisición, almacenamiento y análisis de los datos en tiempo real o en

modo de matriz de datos.
CITOMETRÍA DE FLUJO

Es una técnica de
análisis celular

permite la medida
el
simultánea de múltiples
características fisiológicas y cual
químicas de una sola célula

Fundamento : se basa en hacer

pasar una suspensión de
partículas  (generalmente
células) alineadas y de una en
una por delante de un haz de
láser focalizado
Citometria de flujo
 Analisis celular
multiparamétrico
 Laser focalizado =
señales celulares
recogidas por diferentes
detectores
 Tamaño y complejidad
 Inmunofenotipo
 Señales de dispersión
 Señales de fluorescencia
Fluorcromo: Molécula
química que absorbe la luz
a una determinada
longitud de onda
(ENERGIA ) energía de
excitación y emite a una
longitud superior
Representación gráfica de datos
citométricos
 FRACCIÓN DE PLAQUETAS INMADURAS
 PR detectadas de
forma automatizada
a través del canal
de PLT-F utilizando
un colorante
fluorescente de
RNA.
 Se expresan en
porcentaje con
respecto al valor
total de plaquetas y
en valor absoluto

PFI: VR:  1 a 5% del recuento total de

plaquetas.
Interpretación del dispersograma
VENTAJAS:

El recuento de la FPI permite que

se diferencien entre motivos de
consumo frente a motivos de
producción para la
trombocitopenia, y ayuda a evitar
una biopsia de la médula ósea,
Tiene utilidad en la
monitorización del paciente tras
CONCLUSIONES:

o La plaqueta reticulada (PR) se ha incorporado como un nuevo parámetro para

determinar las plaquetas inmaduras, con el uso de colorantes fluorescentes que tienen
la capacidad de teñir el ácido ribonucleico (ARN) de las plaquetas jóvenes.
o De acuerdo con la intensidad de fluorescencia se clasifican en plaquetas maduras o
inmaduras.
o Este nuevo parámetro permite diferenciar si la trombocitopenia se debe a un problema
de producción o de destrucción periférica, dado que valores aumentados de plaquetas
reticuladas indican una gran actividad trombopoyética
o En el caso de trombocitopenias por destrucción, este parámetro es mucho más útil que
el VPM para reflejar el estado clínico de la enfermedad.
o Los valores bajos de PR se asocian con anemia aplástica, síndrome mielodisplásicos
(SMD), leucemias agudas, y postratamiento con quimioterapia y radioterapia;
o Los valores altos se observan en trombocitopenias mediadas por anticuerpos, infección
con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), lupus eritematosos sistémico
(LES)
o En caso de consumo de plaquetas como en la coagulación intravascular diseminada
(CID), púrpura trombocitopénica trombótica (PTT) y síndrome hemolítico urémico
(SHU), entre otras. Igualmente están relacionadas con arterioesclerosis y sus
complicaciones, incluyendo el síndrome coronario agudo, también las PR se
encuentran elevadas.
Gracias