MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

LABORATORIO No1: RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS

MESOFILOS.

JESUS DARIO BARROS ACUÑA

GADI DANIEL WOLF GUERRA
LUIS EMEL CONSTANTE MEDINA

DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR
VALLEDUPAR CESAR
2015
 RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS.

1 OBJETIVO: Determinar la presencia de microorganismos aerobios y facultativos

mesófilos en diferentes muestras de alimentos.

2 ALCANCE: Abarca a todos los microorganismos que tiene la propiedad de crecer

en presencia de oxigeno a una temperatura de 2O- 45 ºC.

3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer cumplir el procedimiento de análisis es

el docente del área de microbiología de alimentos, el cual debe tener una formación
de microbiólogo o bacteriólogo con una experiencia de 2 años como mínimo.

4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA:
4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de técnicas de análisis para el control de calidad
microbiológico para consumo humano. División de laboratorios de alimentos y bebidas
alcohólicas INVIMA 1998,2002, 2006.
4.2. LUNA, G. Manual Operativo de análisis microbiológico para alimentos universidad
de Pamplona 1998.

5. CONTENIDO:

5.1. FUNDAMENTO: Es el método comúnmente utilizado para determinar el número

de células viables o de unidades formadoras de colonias (ufc) en un alimento, e
incluye todos los géneros aerobios y facultativos que crecen en medios simples a una
temperatura entre 20 y 45 ºC.

5.2. DEFINICIONES:

5.2.1. Agar plate count: (agar peptona de caseína glucosa extracto de levadura)
medio simple que permite el crecimiento de muchos microorganismos el cual contiene
peptona de caseína extracto de levaduras, D glucosa y agar.
5.2.2. Microorganismos viables: son aquellos microorganismos que tienen la
propiedad de poder reproducirse, en el caso de las bacterias de formar colonias.
5.2.3. UFC: Unidades formadoras de colonias.

5.3. CONDICIONES GENERALES: Los microorganismos aerobios mesófilos se

consideran como indicador del grado de contaminación de los alimentos en cualquier
etapa del proceso de producción, permite también obtener información sobre la
alteración incipiente de los alimentos y su probable vida útil.

5.4. MATERIALES Y REACTIVOS:

5.4.1. Gradillas
5.4.2. Tubos de ensayo tapa rosca
5.4.3. Bolsas plásticas estériles
5.4.4. Agua peptonada al 0.1% estéril.
5.4.5. Agar Plate Count
5.4.6. Cajas de Petri estériles
5.4.7. Instrumentos para prepara las muestras: Cuchillos, Tenedores, Pinzas, Tijeras,
Cucharas, espátulas, Sacabocados, Morteros con sus respectivos pistilos etc.
Previamente esterilizados.
5.5. EQUIPOS:
5.5.1. Refrigerador
5.5.2. Contador de colonias
5.5.3. Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
5.5.4. Lo necesario para la preparación y dilución de los homogenizados de los
alimentos.

5.6. PROCEDIMIENTO:
5.6.1. Método de Recuento en Placa:
5.6.1.1. Mezclar muy bien la muestra (liquida) para asegurar su homogenización.
5.6.1.2. Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra.
5.6.1.3. Abrir asépticamente (con el mechero en medio) y adecuadamente la muestra.
5.6.1.4. Si es sólida tomar porciones de diferentes sitios de la muestra.
5.6.1.5. Pesar 11 gramos de la muestra en balanza analítica si es sólida, sobre un
papel graff estéril o medir 11 mililitros si es liquida en recipiente estéril.

5.6.1.6. Macerar, picar o triturar.

5.6.1.7. Añadir al recipiente de dilución que contiene 99 ml de agua peptonada para
obtener la dilución de 101.
5.6.1.8. Mezclar al agitar vigorosamente el recipiente para homogenizar.
5.6.1.9. Preparar la dilución 102 trasfiriendo 1 ml de la dilución 101 a un tubo de
ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente.
5.6.1.10. Preparar la dilución 103 trasfiriendo 1 ml de la dilución 102 a un tubo de
ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente.
5.6.1.11. Transferir por duplicado alícuotas de 1 ml de cada una de las diluciones
consecutivas en cajas de petri estériles.
5.6.1.12. Verter en las cajas de petri, 15 ml de agar plate count fundido y mantenido a
45ºC
5.6.1.13. Mezclar el inoculo con el medio de cultivo fundido. No debe transcurrir más
de 20 minutos entre la realización de las diluciones y el vertido del medio. La manera
más indicada de mezclar el inoculo con el medio es la siguiente:
Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces
Rotar la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj
Mover la caja 5 veces haciendo Angulo recto sobre el movimiento
Rotar la caja cinco veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.

5.6.1.14. Hacer control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja que
Contenga Agar plate count.
5.6.1.15. Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1 % incubando una caja
Que contenga 1 ml de agua peptonada y agar plate count.
5.6.1.16. Una vez solidificado el medio de cultivo, invertir las placas e incubarlas a
35ºC +/- 2ºC durante 48 horas.
5.6.1.17. Cálculo e interpretación de los resultados.

5.8 ANEXOS: N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificación y aprobación.
 PROCEDIMIENTO

La primera actividad que realizamos al momento de desarrollar la práctica de

laboratorio, fue Desinfectar todo el sitio de trabajo con alcohol en el cual se iban a
extraer las muestras. Seguidamente tomamos los materiales necesarios para
comenzar a desarrollar la práctica.

Luego contábamos con un recipiente que contenía 99 Ml de agua peptonada a este le

agregamos con un micropipeteador 11 ml de jugo pasteurizado formando la dilución
10−1 . Mesclamos agitando vigorosamente el recipiente para homogenizar.

Luego preparamos la dilución 10−2 trasfiriendo 1 ml de la dilución 10−1 a un tubo de

ensayo que contenía 9 ml de agua peptonada, de igual forma para Preparar la dilución
10−3 trasferimos 1 ml de la dilución 10−2 a otro tubo de ensayo también con 9 ml de
agua peptonada. Al realizar todo este procedimiento Transferimos por duplicado
alícuotas 1 ml de cada una de las diluciones consecutivas en cajas de Petri estériles.

A cada muestra de las diluciones le adicionamos 15 ml de Agar plate count y

procedimos a Mezclar el inoculo con el medio de cultivo fundido de La siguiente
manera:
 Moviendo la caja de arriba hacia abajo 5 veces
 Rotando la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj
 Moviendo la caja 5 veces haciendo Angulo recto sobre el movimiento
 Rotando la caja cinco veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.

Estos procedimientos se realizaron con el fin de que los microorganismos no se

adjuntaran en un solo lugar si no que se dispersaran por toda la cajilla y así se
facilitaría más su conteo.

Tomadas las muestras se empaquetan de forma adecuada según su naturaleza para

evitar su rotura o deterioro marcándolas de la siguiente manera:
 Nombre de los microorganismo
 Fecha
 numero de dilución
 Alumno
Y finalmente se incuban a 37°c por 24 horas.

CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.

En el caso de que dos diluciones consecutivas estén dentro del rango 30 -300
colonias, se hace el recuento para cada una de las diluciones y se reporta la media
aritmética de los dos valores obtenidos, a menos que el recuento mayor contenga dos
veces el menor, en este caso se reporta el recuento menor
Dilución 10−2 Dilución 10−3

Caja de Petri N°1= 187 Caja de Petri N°1= 67

Caja de Petri N°2= 210 Caja de Petri N°2= 53

Cálculos:
a) 10−2 = 210×100 = 21000 b) 10−2 = 187×100= 18700
10−3 = 67×1000= 67000 10−3 = 53×1000= 53000

67000÷21000= 3.19 (mayor de 3) 53000÷18700= 2.8( mayor de 2)

Medida aritmética: - Recuento menor 18700 ufc/ml

67000+21000
= 44000ufc/ml
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