Clase 21

Antígenos fúngicos y antimicóticos

Antígenos fúngicos
Infecciones fúngicas:

Infecciones leves superficiales.

Infecciones fúngicas invasoras (IFI).

Huésped:

Inmunodeprimido infectado por IFI.

Menor grado de inmunosupresión (catéteres, corticoides) IFI.

Imunidad intacta, hongos dimórficos regionales.

Diagnóstico:

El cultivo presenta limitaciones (crecimiento lento, potencial riesgo al tomar

muestras de micosis profundas, etc)

La detección de antígenos, anticuerpos o componentes estructurales es una

alternativa.

La detección de ADN de hongos IFI también tiene limitantes (costo, falta de

estandarización).

Clase 21 1
 💡 Antígenos fúngicos con buena reactividad y especificidad son
indispensables para las pruebas inmunológicas de diagnóstico.

Esporotricosis
Intradermoreacción a esporotriquina.

Producida por Sporothrix schenkii.

Cultivo
Obtención de antígenos mediante cultivo.

Antígenos:

Metabólica/Clásica: Extracto péptidopolisacárido.

37°C levadura, mayor sensibilidad.

28°C micelio, mayor especificidad.

Celular: Suspensión del hongo.

Inyección de peptidopolisacárido.

Prueba de hipersensibilidad cutánea.

Respuesta esperada de inmunidad celular.

Si crece una pápula indurada >5mm, es positivo.

Resultado positivo NO indica enfermedad activa.

Posibilidades:

Paciente curado.

Clase 21 2
 Contacto previo con Sporothrix.

Exposición a grandes n°s de conidias: posible infección.

Exposición a bajos n°s de conidias: inmunidad.

Sensibilidad de 76% y especificidad de 100%.

💡 Para esporotricosis, el mejor examen de laboratorio es el cultivo en agar

sabourand glucosado/cerebro-corazón, ya que crece y se aísla en menos
de 5 días.

Detección de anticuerpos Sporothrix schenckii: aglutinación en

látex
Las partículas de látex van a rodear a las levaduras Sporothrix.

Se agrega el suero del paciente, y de tener antígenos contra la levadura, se va

a formar un precipitado.

Clase 21 3
 Paracoccidioidomicosis o Histoplasmosis
diseminada
Inmunodifusión
Detecta anticuerpos.

No sustituye pruebas convencionales (cultivo), las complementa.

Clase 21 4
 En el centro de la cavidad se coloca un pozo donde se añade el antígeno de
interés, y se hacen cavidades adicionales alrededor del pozo central, donde se
añaden sueros que contienen los anticuerpos específicos para ese antígeno.

Si el antígeno y el anticuerpo son compatibles, se formarán complejos

inmunológicos visibles en forma de una línea o una banda de precipitación en la
región de interacción.

En la primera imagen se puede observar un kit de inmunodifusion, se encuentra

una banda entre el antígeno y el suero control, que sirve para verificar el
funcionamiento correcto.

Primera y a veces única evidencia de infección.

Muy especifica: aparición de bandas de precipitación H y M entre 4-6 semanas

después de la exposición:
▪ Banda M: infección activa o pasadal, anticuerpos persisten años.
▪ Banda H, aparece después de M: infección activa, anticuerpos desaparecen
rápido.

Método inmunoenzimático
Detecta antígeno polisacárido específico de Histoplasma capsulatum.

Detecta en suero, líquido pleural, LBA, LCR y orina.

Clase 21 5
 Detección rápida de Histoplasmosis.

Funciona en pacientes inmunosuprimidos.

Sensibilidad variable, varía de acuerdo a la muestra (orina es la sensible y LCR

el menor)

Reacción cruzada con otras micosis.

Pruebas moleculares
No hay métodos estandarizados.

Detección de ADN Histoplasma capsulatum.

Criptoccocus neoformans
Aglutinación en látex
Detección de antígeno Criptococócico mediante anticuerpos mono o
policlonales con antiglucoroxilomanano.

Partículas de látex revestidas con globulina anti - criptococal (látex de

detección).

Este látex de detección va a formar aglutinación con los antígenos del paciente.

LCR, sangre (LCR más sensible y específica):

Suero positivo a una dilución >1/4 = infección, >1/8 = enfermedad activa,

>1/1024 = mal pronóstico.

Candidiasis invasiva
Detección de antígenos (paciente inmunosuprimido).

Clase 21 6
 Se usa el manano:

Presente en la pared celular en la mayoría de especies Candida spp.

Capacidad de detección variable x especie.

Se elimina rápidamente de la circulación, necesario muestras seriadas.

Su detección permite diagnóstico específico pero poco sensible debido a su

corta duración.

Aspergiliosis invasiva
Detección de galactomanano (suero, orina).

Galactomanano:

Presente en la pared celular de Aspergillus spp.

Exoantígeno, se libera durante la invasión celular.

Aglutinación en látex (15ng/L):

Técnica más usada.

Sensibilidad variable.

Suero se toma dos veces por semana, test positivo con dos
determinaciones positivas consecutivas.

Falsos negativos:

Encapsulación del proceso infeccioso.

Menor grado de angioinvasión.

Tratamiento antifúngico.

Falso positivo:

Colonización masiva de Aspergillus en el tracto digestivo.

Infecciones por hongos como Paecilomyces spp, Penicilum sp y

Candida spp.

💡 En los pacientes inmunosuprimidos se deberían usar pruebas de

antígenos y NO de anticuerpos.

Clase 21 7
 Antimicóticos
La mayoría son fungistáticos (inhibidores de Buen antimicótico:
crecimiento).
Específico para
La administración prolongada puede hongos.
producir clones resistentes.
Sin efectos
Desarrollo de mecanismos de resistencia colaterales.
primaria y secundaria.
Baja toxicidad.
Mecanismos de resistencia:
Amplio espectro.
Sobreproducción de enzimas.
Accesible.
Uso de vías metabólicas.
Bajo costo.
Bombas de flujo externo.

Historia

Clasificación de antimicóticos de uso sistémico

Clase 21 8
 Familias y objetivos

Clase 21 9
 Los antifúngicos pueden:

Impedir la síntesis de la pared celular (Equinocandinas).

Alterando la permeabilidad, síntesis o componentes de la membrana

(Polienos).

Sobre mecanismos de división celular (Análogos)

Inhibir la síntesis del ergosterol, componente de la pared celular (Alilaminas:

escualeno, Azoles: lanosterol).

Estructura celular
Pared celular

Clase 21 10
 Quitina: polímero de N-acetilglucosamina, uniones glicosídicas similares a
residuos de glucosa.

Glucano: polisacárido insoluble, formados por residuos de D-glucosa.

Manano: polisacárido soluble, formados por residuos de D-manosa.

Estos componentes son posibles objetivos de los antifúngicos.

Membrana celular

Ergosterol:

Sitio objetivo de la mayoría de antifúngicos.

Sintetizado a partir de lanosterol.

Permite función de enzimas unidas a membrana que favorecen el

crecimiento y división celular al permitir la función de la quitina sintasa.

Déficit de ergosterol:

Clase 21 11
 Permeabilidad excesiva al flujo iónico, en especial a hidrogeniones.

Gran fragilidad y degradación de la membrana, ocasionando lisis.

Anfotericin B
Producido a partir de actinomiceto Streptomyces nodosus.

Se van a formar complejos afotericin B - ergosterol, causando la

permeabilización de membrana.

Triazoles
Fluconazol y Voriconzaol son los antimicóticos más usados en los hospitales.

Los nuevos azoles inhiben la enzima citocromo P-450 que tiene un papel en
la síntesis del ergosterol (nuevos azoles son selectivos).

La selectividad es debido a la unión del N1 del grupo aromático de los azoles a

aminoácidos específicos de la membrana celular del hongo.

la unión del N1 del grupo aromático de los azoles a aminoácidos específicos de

la membrana celular del hongo.

Mecanismos de resistencia a los azoles

Clase 21 12
 Inducción de bombas de expulsión:

El hongo expulsa al antimicótico.

Asociada con sobreexpresión de MDR (Fluconazol)

Sobreexpresión de CDR (azoles)

Muraciones puntuales:

Gen ERG11: altera la afinidad a la 14-alfa desmetilasa.

Gen ERG3: repara membranas lesionadas.

Los mecanismos pueden coexistir.

Equinocandinas
Actúan a nivel de pared.

Inhiben de manera específica y no competitiva a la enzima B[1, 3]-D- glucan

sintetasa.

Impide la formación de polímeros de glucano (mayor componente de la pared

celular).

Se unen directamente a la proteína FKS1P.

Clase 21 13
 Mecanismos de resistencia:

Solo se ha detectado resistencia a la Caspofungina por cepas de Candida

albicans con mutación de la FKS1P.

No se conocen bombas que funcionen contra este antifúngico.

Pirimidinas fluoradas
Actúan a nivel del núcleo.

Cuando la 5-Fluorocitosina atraviesa la membrana celular, se convierte en 5FU

(5-fluoro-uracil) mediante la citosina permeasa.

Clase 21 14
 Dos vías:

Incorporación en el RNA: inhibición de síntesis de proteína.

Inhibición de tidimilato sintetasa: inhibición de síntesis del ADN.

30% de hongos tienen resistencia debido a que carecen de citosina permeasa,

por esto debe ser usado con otros antifúngicos.

💡 C. auris
- Hongo multidrogo resistente, totalmente resistente a todos los azoles.
- Las equinocandinas no son fungicidas frente a C auris.
- Anfotericina B: único fungicida.

Clase 21 15
 Interpretación de resistencia antimicótica

Estado del paciente.

Infecciones fúngicas mixtas.

Igual cepa o especie.

Aumento de la concentración mínima inhibitoria (CMI) con el tiempo.

Resultados diferentes in vitro e in vivo.

Identificación de genes de resistencia.

Clase 21 16