Colegio Las Amricas Sector Ciencias Subsector Biologa Profesor: Juan Carlos Gonzlez Mio.

Gua de trabajo 4 Medio Biologa Punto Base Para La Prueba C-2 1-MICROBIOLOGA y BIOTECNOLOGA 1. CONCEPTO DE MICROORGANISMO Los microorganismos o microbios son organismos de pequeo tamao, observables nicamente con la ayuda del microscopio. La Microbiologa es la rama de la Biologa que se encarga del estudio de los microorganismos. TIPOS DE MICROORGANISMOS Y CLASIFICACIN Los microorganismos se clasifican en:

2. LAS BACTERIAS CLASIFICACIN, MORFOLOGA, FISIOLOGA Y ECOLOGA BACTERIANAS 1) ARQUEOBACTERIAS: Bacterias consideradas "fsiles vivientes" pues viven en hbitats que parecen corresponder con los que existieron en la Tierra primitiva, por ejemplo, se encuentran en ambientes termales donde se alcanzan temperaturas por encima del punto de ebullicin del agua, en fumarolas, etc. Un ejemplo es el de Pyrococcus furiosus que tiene su ptimo de crecimiento a 1041C. Tambin pueden vivir en medios halfilos (muy salados), por ejemplo: Halobacterium, que son halfilos estrictos. 2) EUBACTERIAS: Son las bacterias tpicas. Por ejemplo Escherichia coli. Se trata de microorganismos unicelulares procariotas, cuyo tamao oscila entre 1 y 10 micras (como son muy pequeas no necesitan citoesqueleto), adaptados a vivir en cualquier ambiente, terrestre o acutico, pues en las diferentes estirpes bacterianas pueden observarse todas las formas de nutricin conocidas. Las hay auttrofas: fotosintticas y quimiosintticas, y hetertrofas: saprfitas, simbiticas y parasitarias. Esta notable diversidad de funciones convierte a las bacterias en organismos indispensables para el mantenimiento del equilibrio ecolgico, ya que, como se ver ms adelante, contribuyen al mantenimiento de los ciclos biogeoqumicos que permiten el reciclaje de la materia en la biosfera. La mayor parte de las bacterias adoptan formas caractersticas,

aunque en ocasiones la configuracin puede verse influida por las condiciones del medio de cultivo. Son unicelulares, pero tambin aparecen agrupadas cuando se mantienen unidas tras la biparticin. Entre las formas ms comunes destacan las siguientes: * Cocos, de aspecto redondeado, que aparecen aislados o en grupos de dos: diplococos, otras veces forman cadenas arrosariadas: estreptococos, grupos arracimados: estafilococos, o masas cbicas: sarcinas. Esta diversidad depende de que la divisin de las clulas se d a lo largo de uno, dos o tres ejes. Las bacterias con forma de cocos tienen una relacin superficie/volumen mnima, son bacterias con poca relacin con el exterior, muy resistentes y se transmiten por el aire. Son pequeas y exigentes con el medio de cultivo. Suelen ser patgenas: Streptococcus, Staphylococcus, etc. * Bacilos, alargados y cilndricos, en forma de bastn; a veces se presentan en cadenas lineales o ramificadas. Presentan mayor relacin superficie/volumen que los cocos y obtienen nutrientes con mucha mayor efectividad, por lo que pueden vivir en lugares pobres en nutrientes (vas urinarias, agua ....). Por el contrario, son menos resistentes, susceptibles a los cambios ambientales y no pueden transmitirse por el aire, slo lo hacen por lquidos o superficies hmedas. Los ms grandes (Baccillus y Clostridium) desarrollan endosporas para resistir los perodos de condiciones precarias. * Espirilos, con forma de hlice o espiral; las espiroquetas tienen un aspecto similar, pero con la espiral ms acusada. Las formas espirales se mueven en medios viscosos avanzando en tornillo. Su dimetro es muy pequeo, lo hace que puedan atravesar las mucosas; por ejemplo: Treponema pallidum, causante de la sfilis. Son ms sensibles a las condiciones ambientales que los bacilos, por eso cuando son patgenas se transmiten por contacto directo (va sexual) o mediante vectores, normalmente artrpodos hematfagos. * Vibrios, que son muy cortos y curvados, en forma de coma. Ejemplo: Vibrio cholerae. ESTRUCTURA DE UNA BACTERIA TIPO La ultraestructura y la actividad fisiolgica de las bacterias solo se puede apreciar con el microscopio electrnico en conjuncin con las tcnicas bioqumicas y citolgicas adecuadas, como la ultracentrifugacin, tcnicas isotpicas de marcaje, utilizacin de medios de cultivo diferenciales, etc. Los componentes estructurales bsicos de las bacterias son: * Pared bacteriana: Estructura presente en todas las bacterias. Es una envoltura rgida exterior a la membrana. Da forma a la bacteria y sobre todo soporta las fuertes presiones osmticas de su interior. Los componentes fundamentales de la pared son los peptidoglucanos o murenas, formados por anillos de polisacridos complejos enlazados con oligopptidos. Adems contiene otros elementos diferentes segn pertenezca al grupo de las Gram negativas o al de las Gram positivas: En las Gram negativas hay una sola capa de pptidoglucanos sobre la que se dispone una membrana externa constituida por una capa de fosfolpidos y otra de glicolpidos asociados, estos ltimos, a polisacridos que se proyectan hacia el exterior. En las bacterias Gram positivas la red de peptidoglucanos origina varias capas superpuestas, es gruesa y homognea y no hay membrana externa. * Cpsula bacteriana. En numerosas bacterias se forma en la parte externa de la pared una cpsula viscosa compuesta por sustancias glucdicas. Esta envoltura, que se presenta en casi todas las bacterias patgenas, las protege de la desecacin y de la fagocitosis por los leucocitos del hospedador, as como del ataque de los anticuerpos, lo que aumenta la virulencia de las bacterias encapsuladas. La presencia de la cpsula no es, sin embargo, un carcter diferenciador, pues determinadas bacterias pueden o no formarla en funcin de los medios de cultivo.

Informacin: El estudio de las bacterias se realiza mediante cultivos, que consisten en esencia, en extractos nutritivos estriles, ya sean lquidos o slidos. Los lquidos, preparados en tubos de ensayo debidamente tapados con algodn graso y esterilizados, suelen ser caldo de carne, suero sanguneo y sangre, enriquecidos con ciertas sustancias sin las cuales no pueden reproducirse (aminocidos, peptona, etc.). Los slidos se obtienen a partir de los lquidos mediante adicin de agar-agar o gelatina en caliente, luego se vierte sobre tubos de ensayo inclinados o sobre cajas de Petri; posteriormente se esterilizan, se siembran utilizando el asa de platino y se colocan en la estufa de cultivo a la temperatura adecuada que favorezca su multiplicacin. INFORMACIN Observacin de microorganismos. Tincin de Gram: Fundamento INTRODUCCIN El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tincin simple. Sin embargo, a menudo se utilizan mtodos que no tienen de igual modo todas las clulas, es el proceso denominado tincin diferencial. Uno muy usado en microbiologa es la tincin Gram. Basndose en su reaccin a la tincin Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Esta tincin tiene gran importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han propuesto varias hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes celulares de los microorganismos. TINCIN DE GRAM. Mtodo. Extensin: En un porta bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se coloca una gota de agua destilada a la que, con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequea cantidad de suspensin de bacterias o, en su caso, de una colonia. Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta y se fija la extensin por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque. Coloracin: a) 1 minuto en cristal violeta de Hucker (colorante inicial) b) se lava con agua destilada c) 1 minuto en lugol (mordiente) d) se decolora con alcohol de 951 (decolorante) e) se lava con agua destilada f) 1 minuto en fucsina (colorante de contraste) g) se lava con agua corriente h) se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner una gota muy pequea de aceite de cedro y observar al microscopio con el objetivo de inmersin. Observacin:

Las bacterias que aparecen coloreadas de violeta son Gram+ y las que aparecen coloreadas de rojo ms o menos intenso, son Gram-.

I.

Actividad En tu Cuaderno, responde las siguientes Preguntas:

1. Que caracteriza a los organismos con organizacin celular y aquellos sin organizacin celular? Explique y ejemplifique. 2. Realice un cuadro comparativo de Bacterias del tipo Arquebacterias y Eubacterias 3. Explique cmo se clasifican las Eubacterias segn su forma de nutricin? 4. Realice un esquema (dibujo) de uno de cada tipo de agrupacin de las bacterias que aparecen mencionadas en la gua 5. Cmo se permite que se realice el estudio de las bacterias? Explique 6. Realice una comparacin conceptual entre una bacteria gram + y una gram esquematice (dibuje) las estructura que los diferencia. 7. Para qu sirve la capsula bacteriana? Defina 8. Explique, en que consiste la tincin de gram.