FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

Determinación de tartrazina en una bebida comercial

empleado diferentes tipos de curvas de calibración

OBJETIVO

• Emplear la espectroscopia visible para realizar diferentes tipos de curvas de

calibración y determinar el contenido de tartrazina en una bebida comercial

1. INTRODUCCIÓN

Los colorantes son un grupo de aditivos alimentarios que se utilizan para otorgarle a un alimento
el color deseado y esperado. Los alimentos naturales tienden a cambiar de color dependiendo de
la variación estacional de la materia prima y del proceso de fabricación, lo que puede afectar la
percepción del sabor y el color. Pero no todas las sustancias coloreadas son aptas para el
consumo humano, algunas incluso son perjudiciales para la salud (Ibañez, F; Torre, P y Irigoyen,
1963; Rodríguez, Schenone, Sobrero, & Marsili, 2014).
Según su origen, los colorantes pueden ser clasificados en naturales (como la curcumina y el
caramelo) o sintéticos (tartrazina, eritrosina), y todos ellos son regulados según normas
nacionales e internacionales y tienen un valor de concentración máxima aceptada. Si se agregan
cantidades superiores, los colorantes pueden representar un riesgo para la salud de la población.
Por dicha razón es de gran importancia conocer métodos analíticos que permitan cuantificar el
contenido de estos aditivos en distintos alimentos y bebidas (Ibañez, F; Torre, P y Irigoyen, 1963;
Rodríguez et al., 2014).

2. MARCO TEÓRICO
El término calibración, se refiere a la determinación de la relación entre la concentración del
analito y la respuesta generada por la técnica de medida. Existen diferentes tipos de curvas de
calibración (Sánchez Palacios, 2008):

Calibración sencilla o con estándares externos: Se emplean para la determinación de analitos

contenidos en una muestra cuyos componentes de matriz y reactivos empleados para la
preparación no interfieren en el análisis. Al graficar los resultados de la señal analítica versus
concentración del analito, se obtiene la siguiente ecuación de la recta (Sánchez Palacios, 2008):

𝐲𝐲 = 𝐦𝐦𝐦𝐦 + 𝐛𝐛 (1)

Modificado por Paola Alzate Calderon, 2022 - II

Aprobado por Giovanni Rojas
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Donde y es el resultado de la señal analítica, x es la concentración de analito y b la señal blanco.

Para determinar la concentración del analito en una muestra, se mide la señal analítica de ésta y
se calcula la concentración de la siguiente forma:

𝐲𝐲𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦 −𝐛𝐛
𝐱𝐱 𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦 = (2)
𝐦𝐦

Calibración con adición de estándares: Se emplea para analizar muestras cuya matriz puede
interferir significativamente en la medición de la señal analítica. Este método busca minimizar la
interferencia de matriz, por lo que se adiciona un volumen fijo de la muestra a las soluciones
estándar, y se diluye a un volumen final constante. Luego, se determina la señal de los estándares
y de una muestra preparada de la misma forma, en ausencia de estándar añadido. En cada
solución, las señales son afectadas de manera similar por los interferentes de la matriz. La
concentración de analito en la muestra, se determina según la ecuación 3 (Sánchez Palacios,
2008).

𝐛𝐛
𝐂𝐂𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦 = (3)
𝐦𝐦

Calibración con estándar interno: Se utiliza para compensar errores aleatorios y sistemáticos
como interferencias no espectrales de componentes de la matriz, fluctuaciones debidas del
método y errores instrumentales. El estándar interno es una sustancia diferente al analito y tiene
propiedades similares a este, tal que ambos sean afectados similarmente durante el análisis. La
matriz de la muestra no debe contener al compuesto seleccionado como estándar interno. La
aplicación de este método consiste en realizar medidas simultáneas de la respuesta del
instrumento al analito y al estándar interno. El estándar interno, se añade en una cantidad
conocida y constante a la muestra, y a los estándares del analito. En la gráfica de calibrado se
representa la relación Señal analito/Señal de estándar interno en función de la concentración del
analito en los estándares (Sánchez Palacios, 2008).

𝐲𝐲𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚 𝐟𝐟
= 𝐱𝐱 𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚 = 𝐦𝐦 𝐱𝐱 𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚𝐚 (4)
𝐲𝐲𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞 𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢 𝐂𝐂𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞 𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢

Donde y analito es la señal correspondiente al analito, y estándar interno la señal del analito interno,
f el factor de respuesta, 𝐂𝐂𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞 𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢 la concentración del estándar interno, y m la pendiente de
𝐟𝐟
la gráfica, que equivale a .
𝐂𝐂𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞 𝐢𝐢𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧𝐧

Al medir la señal analítica de la muestra se puede determinar su concentración mediante la

siguiente ecuación (Sánchez Palacios, 2008):

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𝐲𝐲𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦
= 𝐱𝐱 𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦𝐦 (5)
𝐦𝐦 𝐲𝐲𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞𝐞 𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢𝐢

3. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

3.1 Normas de seguridad

El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.

3.2 Equipos de protección personal

Usar durante todo el desarrollo de la práctica los siguientes elementos de seguridad:

• Bata de laboratorio
• Guantes de nitrilo
• Gafas de seguridad
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está prohibido su
intercambio con los demás compañeros de laboratorio.

3.3 Manejo de Residuos químicos

Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los
residuos generados en las prácticas del laboratorio de química en forma adecuada. Por ello el
estudiante debe:

1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los cuales
están debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar.

2. Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no

controladas y potencialmente peligrosas.

No arrojar por el desagüe los desechos o residuos químicos obtenidos durante el desarrollo de la
práctica. Si tiene alguna inquietud al respecto comuníquela al responsable del laboratorio, quien le
indicará la forma correcta de hacerlo

4. TRABAJO DE PREPARACIÓN PREVIA

4.1 Calcule la cantidad en gramos que debe pesar de tartrazina para preparar 100 mL de solución
con una concentración de 1000 ppm.

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4.2 Calcule el volumen en µL de las alícuotas necesarias para preparar los estándares de
tartrazina que se emplearán, para realizar las curvas de calibración. (Ver puntos 6.2.1, 6.4.1
y 6.5.1).

4.3 Calcule la concentración (en ppm) final del azul de metileno en los estándares y la muestra
de la línea de calibración con estándar interno (Ver puntos 6.5 y 6.6).

5. PROCEDIMIENTO
5.1 MATERIALES

Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo.

ITEM Cantidad
Balón aforado 100 mL 1
Balón aforado 25 mL 13
Balon aforado de 20mL 2
Vidrio reloj 1
Espátula acanalada 1
Beaker 50 mL 6
Micropipeta de 100 a 1000µL 1
Puntas para micropipeta 1
Frasco lavador 1

5.2 REACTIVOS

Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo.

Reactivo Cantidad
Tartrazina 0,1 g
Solución de azul de metileno al 0,01% 5mL

5.3 EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo.

Equipos Cantidad
Espectrofotómetro UV VIS 1
Balanza analítica 1

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6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

CLAVES PARA EL EXITOSO DESARROLLO DEL LABORATORIO

 Encender el espectrofotómetro 20 minutos antes de realizar las lecturas

 Realizar las mediciones de los patrones de las curvas de calibración y de la muestra
problema, empleando el agua como blanco
 Agitar muy bien las soluciones antes de ser medidas en el equipo
 Marcar perfectamente los patrones, realizando la diferenciación respecto al tipo de
curva de calibración que corresponde
 Ajustar con el blanco cada vez que se cambie la longitud de onda de trabajo

6.1 Preparación de soluciones

• Solución estándar de tartrazina 1000 mg/L (solución Patrón): Pese la cantidad

indicada de Tartrazina en la balanza analítica y prepare la solución patrón empleando un
balón aforado de 100 mL y completando con agua destilada.

6.2 Línea de Calibración sencilla

1. Marcar seis balones aforados de 25 mL numerándolos del 1 al 6, utilizando la micropipeta
adicione los volúmenes de solución patrón 1 requeridos para preparar disoluciones con las
siguientes concentraciones: 12 mg/L; 16 mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L, 28 mg/L, 32 mg/L y complete
con agua destilada hasta volumen y agite.

2. Purgue y llene la celda de 1 cm del espectrofotómetro con agua destilada (blanco) y configure
el cero.

3. Posteriormente purgue la celda con cada una de las soluciones anteriores y lea su absorbancia
a 426 nm.

6.3 Preparación de muestra (Bebida) para línea de calibración sencilla

Solución Problema (Muestra):

Trasfiera 10 mL de la muestra a un matraz de 20 mL, y complete volumen con agua destilada.
Tome un 1 mL de esa solución transfiéralos a un balón aforado de 20 mL y complete volumen
con agua destilada.
Trasfiera dicha solución a la celda y mida su absorbancia a 426 nm

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6.4 Línea de calibración por adición de estándar

1. Prepare seis balones aforados de 25 mL, márquelos del 1 al 6 y adicione a todos 1 mL de

la muestra problema suministrada en la práctica, el primero complételo a volumen con agua
destilada, a los demás balones adicione los volúmenes de solución patrón 1 requeridos para
preparar disoluciones con las siguientes concentraciones: 12 mg/L, 16 mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L y
28 mg/L respectivamente. Complete con agua destilada hasta el aforo y agite.

2. Purgue y llene la celda de 1 cm del espectrofotómetro con agua destilada (blanco) y

configure el cero.

3. Posteriormente purgue la celda con cada una de las soluciones preparadas en el punto 1,
incluyendo la que no contiene la solución patrón, y lea su absorbancia a 426nm.

NOTA: Para la curva de calibración por adición estándar no se prepara una muestra problema
por separado, ya que la muestra está incluida en esta curva.

6.5 Línea de Calibración con estándar interno

1. Marque 6 balones aforados de 25 mL del 1 al 6, agregue 450µL de solución de azul de metileno

al 0,01% y agregue los volúmenes de solución patrón 1 requeridos para preparar disoluciones
con las siguientes concentraciones: 12 mg/L; 16 mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L, 28 mg/L, 32 mg/L y
complete con agua destilada hasta volumen y agite.

2. Purgue y llene la celda de 1 cm del espectrofotómetro con agua destilada (blanco) y configure
el cero.

3. Posteriormente purgue la celda con cada una de las soluciones anteriores y lea su absorbancia
a 429 nm y 664 nm (Cuando cambie de longitud de onda, se debe ajustar de nuevo el blanco).

6.6 Preparación de Solución Problema (Bebida) para línea de calibración con estándar
interno:

1. Trasfiera 625 µL de la muestra problema suministrada en la práctica a un matraz de 25

mL y 450 µL de solución de azul de metileno al 0,01 % y complete volumen con agua destilada.

2. Trasfiera dicha solución a la celda y mida su absorbancia a 429nm y 664nm

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7. CÁLCULOS Y PAUTAS PARA EL ANÁLISIS DE RESULTADOS

7.1 Grafique las tres curvas de calibración (sencilla, adición de estándar y estándar interno),
compare el grado de linealidad (R2) y sensibilidad de las curvas (m). Haga uso de la estadística
para establecer diferencias.
7.2 Calcule la concentración de tartrazina en la muestra problema, para cada uno de los métodos
empleados. Compare los resultados obtenidos y determine cuál es el más exacto y cuál es el
más sensible.
7.3 Calcule el % error obtenido en la cuantificación de la muestra y compare el valor con la
Normatividad vigente en Colombia para contenido de tartrazina en alimentos.

8. REFERENCIAS

1) Ibañez, F; Torre, P y Irigoyen, A. (1963). Aditivos alimentarios. Universitas Navarrensis,

1–10. https://doi.org/10.1002/9780470996003.ch15
2) Rodríguez, M. C., Schenone, A. V., Sobrero, M. S., & Marsili, N. R. (2014). Cuantificación
simultánea de colorantes en bebidas deportivas utilizando espectroscopia visible y PLS–
1. Fabicib, 17, 74–84. https://doi.org/10.14409/fabicib.v17i0.4310
3) Sánchez Palacios, M. A. (2008). Métodos de Calibrado. Mérida. Retrieved from
http://webdelprofesor.ula.ve/ciencias/angelisa/Downloads/tecnicascalibracio_vr1.pdf
4) Resolución 10593 de julio 16 de 1985 (emitida por el Ministerio de Salud – actualmente
Ministerio de la Protección Social). Colombia.

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