PRACTICA N° 03

MÉTODOS DE CALIBRACIÓN- PARTE 1

I.LOGRO DE APRENDIZAJE

Aplica los métodos de calibración considerando los fundamentos teóricos y los cálculos
químicos según tipos de muestras y matriz
Utiliza la ecuación de la curva y la gráfica de la curva en las determinaciones cuantitativas

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Calibración metodológica. La calibración metodológica o analítica, es una operación necesaria
para algunos métodos de análisis en los cuales no basta con una calibración instrumental. Los
métodos utilizados en un laboratorio analítico se pueden clasificar en dos grandes grupos:
Métodos clásicos: son los métodos más antiguos utilizados para medir la cantidad de sustancia
en una muestra. La gravimetría y volumetría son ejemplos de ellos. Se caracterizan por ser
métodos de alta precisión, mayor que la de los análisis instrumentales. Son considerados
métodos absolutos porque es posible encontrar una relación directa entre la medida analítica y
la concentración analítica sin necesitar de estándares o patrones que contengan el analito en
cuestión, tan solo utilizan reacciones químicas y coeficientes estequiométricos para calcular la
concentración final de analito (Valcárcel y Ríos, 1992).
Métodos instrumentales: son métodos que utilizan técnicas más modernas, como son las
técnicas ópticas, térmicas, radioquímicas, másicas, etc. Suelen tener gran sensibilidad y gran
capacidad de analizar, de forma rápida, muchas muestras. Además, al usar instrumentos y
técnicas más avanzadas, los resultados de los análisis están computarizados y automatizados.
Aun así, los métodos instrumentales presentan una desventaja frente a los clásicos, son menos
precisos y esto es debido al error de calibración. Las técnicas instrumentales son técnicas
relativas, la señal obtenida de la medición de la muestra a analizar se compara con otras
medidas para determinar la concentración analítica.
Los patrones utilizados ya contienen un error de medida, y este error se arrastra y se añade al
resto de errores, tanto aleatorios como sistemáticos, que aparecen en el proceso de calibración,
incrementando el posible error de la determinación de la concentración (Valcárcel, 1999). A
diferencia de lo que ocurre con los métodos clásicos, los métodos instrumentales requieren el
uso de estándares químico- analíticos adecuados que contengan el analito a estudiar. Y la
forma más común de determinar la concentración de una muestra usando estándares pasa
por la
elaboración de gráficas de calibrado con la correspondiente recta de calibración. El
procedimiento para elaborar las gráficas de calibrado es el siguiente: se toman una serie de
patrones de calibración de los que se conoce la concentración del analito. Estos patrones se
miden en el instrumento analítico, y se representa gráficamente la concentración de cada uno
de los patrones frente a las respuestas de medición. Una vez elaborada la gráfica de calibrado,
se puede obtener mediante interpolación (menos en algún caso que se hace por extrapolación)
la concentración de la muestra a determinar midiendo ésta con el instrumental analítico en las
mismas condiciones en las que se hizo la medida de los patrones (Miller y Miller, 2002). Para
ello, es necesario encontrar la forma de obtener una curva de calibración lo más recta posible,
ajustándose a una serie de puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por
una variable X (variable independiente, concentración del analito) y una variable Y (variable
dependiente, respuesta instrumental) (Riu y Boqué, 2003)

MÉTODO SIMPLE, DIRECTO O DEL ESTÁNDAR EXTERNO: Un estándar o patrón

externo, es aquel que se prepara fuera de la muestra problema. Se aplica este método cuando
se desea determinar la concentración de un analito en la que, ni los componentes de la matriz
de la muestra ni los reactivos usados en el procedimiento interfieren en el análisis. También se
puede usar en el caso en que las interferencias se conozcan y se mantengan siempre constantes
en las medidas, con lo cual se podrán corregir estas posteriormente (Sánchez, 2016).
Procedimiento: se preparan una serie de estándares externos de concentración conocida. La
cantidad óptima de estándares debe ser como mínimo de tres a cinco, aunque en análisis
rutinarios se podrá confiar en calibraciones con dos patrones. Se mide las señales y se
representan frente a la concentración de los patrones obteniendo una línea recta. Previa a las
medidas de los estándares, se utiliza un blanco, que es una muestra idéntica al problema pero
sin el analito. El blanco corrige la respuesta analítica original.
Ventajas: método simple y rápido. Usando un número necesario de patrones se puede
analizar múltiples muestras. Inconvenientes: este método se basa en la suposición de que la
respuesta instrumental del analito en la muestra será la misma que la respuesta del analito en la
muestra patrón. Aunque se corrige con blanco, hay muchos factores que pueden hacer que esta
suposición no se cumpla. Los más comunes son: los efectos de la matriz, la contaminación de
muestras durante la preparación y la incorrecta elaboración de blancos o patrones.
A partir de la ecuación de la recta de calibrado se calculan las concentraciones de las muestras
problemas por interpolación en la misma

.
MÉTODO ADICIÓN PATRÓN : El método de adición estándar es un tipo de enfoque de
análisis cuantitativo que se usa a menudo en química analítica, en el que el estándar se agrega
directamente a las alícuotas de la muestra analizada. Este método se usa en situaciones donde
la matriz de muestra también contribuye a la señal analítica, una situación conocida como el
efecto de matriz, lo que hace que sea imposible comparar la señal analítica entre muestra y
estándar utilizando el enfoque tradicional de curva de calibración.
Al usar soluciones puras para establecer el gráfico de calibración, se supone que no hay
"efectos de matriz", es decir, no hay reducción o mejora de la señal de absorbancia de plata por
parte de otros componentes. En muchas áreas de análisis, tal suposición es frecuentemente
inválida. Los efectos de la matriz se producen incluso con métodos como la espectrometría de
plasma, que tienen una reputación de estar relativamente libres de interferencias. El método de
las adiciones estándar generalmente se sigue para eliminar los efectos de la matriz.
Experimentalmente, se toman volúmenes iguales de la solución de la muestra, todos menos
uno están "enriquecidos" por separado con cantidades conocidas y diferentes del analito, y
todos se diluyen al mismo volumen. Las señales del instrumento se determinan para todas
estas soluciones y se trazan los resultados. Como de costumbre, la señal se traza en el eje y; en
este caso, el eje x se gradúa en términos de las cantidades de analito agregado (ya sea como un
peso absoluto o como una concentración). La línea de regresión (no ponderada) se calcula de
la manera normal, pero se proporciona espacio para que se extrapole al punto en el eje x en el
que y = 0. Esta intersección negativa en el eje x corresponde a la cantidad de analito en la
muestra de prueba. Este valor viene dado por b / a, la relación de la intersección y la pendiente
de la línea de regresión.

Un procedimiento típico consiste en preparar varias soluciones que contienen la misma

cantidad de desconocido, pero diferentes cantidades de estándar. Por ejemplo, cinco matraces
volumétricos de 25 ml se llenan cada uno con 10 ml de lo desconocido. Luego, el estándar se
agrega en cantidades diferentes, como 0, 1, 2, 3 y 4 ml. Los matraces se diluyen entonces hasta
la marca y se mezclan bien.

La idea de este procedimiento es que la concentración total del analito es la combinación de lo

desconocido y el estándar, y que la concentración total varía linealmente. Si la respuesta de la
señal es lineal en este rango de concentración, se genera una gráfica similar a la que se
muestra arriba
III. EQUIPOS Y MATERIALES
Enlistar y graficar los materiales, reactivos y equipos utilizados en la práctica de
laboratorio.

-Agua destilada

-vaso de precipitación

-una fiola

-un diker de 250 ml y de 400 ml

-vidrio de reloj

-matrazes aforados de 50 ml y 250 ml

-equipo que nos va a permitir calcular la absorbancia y la curva de calibración de la muestra

problema (el espectofotometro)

Muestras Proporcionadas por el Estudiante:

03 Muestras de agua potable

01 Botella de vino

Sustancias

-dicromato de potasio

-
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A. MÉTODO DIRECTO, SIMPLE O DEL PATRÓN EXTERNO

1.- Elabore un organizador gráfico con el material audiovisual observado

2.-Experiencia # 1: PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN MADRE: Fe+2

a.
Calcular los gramos de FeSO4.(NH4)2SO4.6H2O (sulfato ferroso amoniacal) necesarios
para preparar 1000 ml de una solución con una concentración de 10 ppm de Fe+2 que
permita preparar las soluciones patrón deseadas posteriormente.
b.
Realice los cálculos correspondientes para determinar la masa de reactivo, luego pesar y
disolver la sal en agua destilada, hasta completar el volumen deseado en una fiola.
DATOS DEL REACTIVO:
Fórmula del patrón primario:
% pureza:98%
Densidad:
Precauciones para utilizarlo:
Otros:
CÁLCULOS QUÍMICOS:
DECISIÓN (Fundamentación):
Evaluar datos obtenidos y tomar decisiones de viabilidad y confiabilidad para la
minimización de errores para la preparación de la solución madre; Se recomienda evaluar
pesada de reactivo (Wsto) y volumen de solución. Según sea la decisión a aplicar,
justifíquela con los respectivos cálculos.

GRÁFICOS

Esquematice el procedimiento a seguir para la preparación de la solución madre, tener en

cuenta la técnica apropiada en la preparación de soluciones

3.-Experiencia # 2: PREPARACIÓN DE PATRONES EXTERNOS PARA

DETERMINACIÓN DE Fe+2 EN AGUA POTABLE

a.- Utilizando la solución preparada en la experiencia 1, Calcular el volumen de las alícuota

necesaria, para preparar 100 ml de solución con las concentraciones indicadas en la tabla
adjunta y/o el cálculo de las concentraciones según convenga.

CÁLCULOS QUÍMICOS:
Tabla: Soluciones Patrones: completar
Concentración de 0,2 0,4 1,5 3,5 10,0
Fe+2 (ppm)

Volumen de 0 1 5 10 25 50 75
alícuota de la
solución madre
(ml)
 Volumen de
H2O (destilada)

Volumen Total 100 100 100 100 100 100 100

Señal del equipo 0,00 0,011 0,102 0,217 0,555 1,131 1,704
ABSORBANCIA

CÁLCULOS QUÍMICOS:

DECISIÓN (Fundamentación):

Evaluar datos obtenidos y tomar decisiones de viabilidad y minimización de errores para la

preparación de la solución deseada; Se recomienda evaluar volumén de alícuota vs
concentración de solución madre. Según sea la decisión a aplicar, justifíquela con los
respectivos cálculos.

GRÁFICOS:

Procedimientos : Esquematice el procedimiento a seguir para la preparación de las

soluciones patrones, tener en cuenta la técnica apropiada en la preparación de soluciones y
diluciones.

Curva de calibración:

Elabore la curva de calibración: Absorbancia vs concentración y determine la ecuación de la

curva
Interpretación de la Curva de calibración

B. MÉTODO ADICIÓN PATRÓN

1.- Elabore un organizador gráfico con la información del material audiovisual
mostrado.

2.-Experiencia # 3: Preparación de la solución Patrón para la determinación de

Fe+3 en vinos.
Para la elaboración de la curva de calibración por adición Patrón, para la determinación
de Fe+3 en vinos, se utilizará la sal de FeCl3 con 98% de pureza.

a.
Determinar la masa del reactivo para preparar la solución madre de Fe+3 con
concentración de 10 ppm de Fe+3

DATOS DEL REACTIVO:

Fórmula del patrón primario:
% pureza:98%
Densidad:
Precauciones para utilizarlo:
Otros:

CÁLCULOS QUÍMICOS:

Proponga el volumen de solución madre a preparar de tal manera que se obtenga una solución
viable y confiable.

DECISIÓN (Fundamentación):
Evaluar datos obtenidos y tomar decisiones de viabilidad y minimización de errores para la
preparación de la solución deseada; Se recomienda evaluar volumén de alícuota ,
concentración de solución madre. Según sea la decisión a aplicar, justifíquela con los
respectivos cálculos.
GRÁFICOS

Procedimientos : Esquematice el procedimiento a seguir para la preparación de las

soluciones patrones, tener en cuenta la técnica apropiada en la preparación de soluciones y
diluciones

2.-Calibración por Método Adición de Patrón para la determinación de Fe +3

en vinos

Utilizando la solución preparada en la experiencia 1, Calcular las concentraciones de Fe+3 para

cada sol. Patrón para preparar 50 ml de solución , según datos indicadas en la tabla adjunta

Tabla: Soluciones Patrones: completar:

Volumen de
solución de Fe+3
0 5 10 15 20
(patrón) (ml)

Concentración de
Fe+3 de los patrones
en ppm

Volumen de vino 10 10 10 10 10
(ml)

Volumen de H2O

Volumen total a 50 50 50 50 50
enrazar

Señal del equipo 0.040 0.062 0.081 0.102 0.135

CÁLCULOS QUÍMICOS:

DECISIÓN (Fundamentación):

Evaluar datos obtenidos y tomar decisiones de viabilidad y minimización de errores para la

preparación de la solución deseada; Se recomienda evaluar volumén de alícuota ,
concentración de solución madre. Según sea la decisión a aplicar, justifíquela con los
respectivos cálculos

GRÁFICOS
 Procedimientos : Esquematice el procedimiento a seguir para la preparación de las
soluciones patrones, tener en cuenta la técnica apropiada en la preparación de soluciones y
diluciones

Curva de calibración:

Elabore la curva de calibración: señal del equipo vs concentración y determine la

ecuación de la curva

Interpretación de la Curva de calibración

Determinación de Fe+3 en la muestra de vino :

A partir de la muestra de 10 ml de vino utilizada en la curva de calibración , determine la

concentración de Fe+3 en el vino puro.

V.- RESULTADOS

Tabulación de datos y resultados de cada experiencia, deberá consignar cálculos , gráficos

estadísticos, curvas de calibración, ecuación de la curva, reacciones químicas involucradas
etc. Adjunto a cada tabla deberá indicarse una discusión de los datos y resultados obtenidos.

VI.-CONCLUSIONES

1° Conclusión: El estudiante debe argumentar en qué medida se alcanzó el logro de aprendizaje

de la práctica integrando los resultados con la base teórica.

Experiencia N°1: preparación de solución madre ( Fe+2 ¿

Para realizar la solución madre deseada tuvimos que calcular una nueva solución madre 1 de mayor
concentración de 50 ppm ya que al inicio los gramos de sulfato ferroso amoniacal con concentración de 10 ppm
no eran viable y por lo tanto no se podía realizar los cálculos de una manera precisa y exacta.

Experiencia N°2: preparación de patrones externos para determinación de Fe+2 en agua potable.

Se tuvo que preparar soluciones de 100 ml y en algunos casos ya teníamos los volúmenes de la
alícuota de la solución madre y en otros las concentraciones de Fe+2 asi que se tuvo que calcular
las concentraciones de Fe+2 y volúmenes de alícuota de la solución madre restantes aparte del
volumen del agua destilada para completar los 100 ml de solución. Finalmente realizamos nuestra
curva de calibración en función de las concentraciones y señal(absorbancia).

Experiencia N°3: determinación de Fe+3 en vinos para esto utilizaremos la sal de FeCl+3 con
98% de pureza

Para realizar la solución madre deseada tuvimos que calcular una nueva solución madre 1 de una
mayor concentración de 40 ppm ya que al inicio los gramos de la sal
de FeCL3 con concentración de 10 ppm no era viable y por lo tanto no se podía realizar los cálculos de una
manera precisa y exacta. Después de obtener la solución madre deseada se extrajeron cinco alícuotas de
diferentes volúmenes donde a cada uno le agregamos 10 ml de vino y asi preparar las soluciones patrones para
hallar las concentraciones de Fe+3 de cada una y el volumen de agua destilada para enrazar un total de 50 ml
, finalmente realizamos nuestra curva de calibración en función de las concentraciones y señal.
2° Conclusión: El estudiante debe argumentar las aplicaciones del tema estudiado en su futuro
desempeño profesional.

3ero- Establezca una comparación de las curvas de calibración obtenidas en estos métodos y
relaciónelos con las características de las muestras utilizadas

VII.- RESPONDA LO SIGUIENTE

7.1. ¿Por qué son necesarias las curvas de calibración?

La curva de calibración es la representación grafica que va relacionar una señal instrumental en

función de la concentración del analito por lo tanto es necesario para poder hallar dicha concentración
en una muestra desconocida.
7.2. ¿Cuándo se utiliza los patrones externos?
Este método se va autilizar para determinar la concentración de un analito cuando en la disolución los
componentes de una muestra principal no van a interferir en el análisis ni los reactivos que se van a
utilizar en el procedimiento.
7.3. ¿Cuándo se utiliza calibración por adición de patrón?
Este método es utilizado cuando se pretende minimizar los efectos de la matriz que interfieren con las
señales de medición de analitos. Este método consiste en añadir cantidades de concentración conocida
de analito a la muestra a determinar.

7.4. ¿Cuándo se utiliza el método estándar interno?

Este método es utilizado para compensar errores debido a las fluctuaciones debido a la técnica
analítica utilizada se debe utilizar como estándar externo una sustancia diferente al analito para que
contenga propiedades físico-quimicas similares ya que deben verse afectadas de manera similar en el
análisis.
7.5. ¿Qué parámetros se debe considerar para decidir el método de calibración?
- El tipo de muestra que necesitamos analizar.
- La humedad de la muestra.
- La pureza
- La selectividad
- La precisión.
7.6. ¿Qué datos debe considerar, además de la información obtenida para elaborar curvas de
calibración?

- La concentración de los estándares

- La señal obtenida del equipo

- El coeficiente de correlación

- El comportamiento lineal de las graficas.

VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (Según APA)

Docente
-Harris, Daniel C. (2003). Quantitative Chemical Analysis 6th Edition. New York: W.H.
Freeman.
-https://es.wikipedia.org/wiki/Adici%C3%B3n_de_est%C3%A1ndar
Estudiante:

Harris, Daniel C. “Quantitative Chemical Analisis” 6th Edition. New York: W.H Freeman
(2003).

https://es.wikipedia.org/wiki/Adici%C3%B3n_de_est%C3%A1ndar

Eppejo C, Manuel “Importancia de la Calibración en los Laboratorios de Quimica

Analitica” Sevilla – España. 2016

Sanchez P, Maria A. “Metodos de Calibrado” Merida – Venezuela.

VIII.-ANEXO