Escuela: Colegio de Integrantes del equipo 2: Fecha en que se realizó la

Estudios Científicos Y Areli Ordoñez Muñoz, David práctica: 1-06-2022

Tecnológicos del Estado de
México plantel Cuautitlán
Izcalli
Uriel Prez Sorroza, Joyce
Rangel Reyes, Michelle Fecha de entrega del
Areli De la Cruz Espinoza, reporte: 13-06-2022
Jennifer Medel Martinez,
Maritza Yireh Ordaz Catalan

Título de la práctica: Grupo: 406 Materia: S3: Cuantifica

Práctica 3 Curva de Microorganismos
calibración Carrera: Laboratorista
Químico

Semestre: 4 Periodo: Febrero-Julio Maestra: Arianna Romero

Flores

Introducción
Una curva de calibración es una función de transferencia que relaciona la entrada con la
salida. El método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica (propiedad). La curva de calibración es un método muy
utilizado en química analítica para determinar la concentración de una sustancia (analito)
en una muestra desconocida, sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación
proporcional entre la concentración y una determinada señal analítica (propiedad).
Conociendo esta relación, será posible conocer la concentración en una muestra dada
mediante la medida de esa señal. La relación concentración – señal se suele representar en
una gráfica a la que se le conoce como curva de calibración o curva de calibrado.(1)
Es imprescindible que la señal analítica utilizada mantenga una relación proporcional con la
concentración. Las señales más utilizadas son aquellas cuya relación con la concentración
es lineal, al menos en el rango de trabajo. Por ejemplo, una de las propiedades más
utilizadas es la absorbancia (absorción lumínica) que suele mantener una relación lineal con
la concentración de solutos en disoluciones. Al ser una relación lineal, se puede representar
mediante una recta, de ahí que este tipo específico de curva de calibración se conozca
también como recta de calibración. (2)
En muchas determinaciones se cumple una relación proporcional entre la magnitud o
intensidad de color que da una reacción y la cantidad del reactivo que la provoca. Por
ejemplo: si la presencia de 10 ug de proteínas en una solución genera la aparición de un
color azul pálido cuando es agregada a una mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de
proteína dará lugar a que la solución se torne azul más oscuro y así sucesivamente. Para
realizar la experiencia debemos preparar unas diluciones seriadas de albúmina sérica
bovina como las que hicimos antes (será nuestro estándar o patrón) y dispondremos así de
por lo menos 5 concentraciones, luego realizaremos la reacción química correspondiente
para desarrollar color y mediremos la intensidad de color de cada solución.(3)
La relación entre intensidad de color y concentración de la sustancia (una medida de la
cantidad de esa sustancia) es proporcional y así, si se grafica el valor de intensidad de color

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medido con un aparato adecuado (espectrofotómetro o colorímetro) en función de las
concentraciones crecientes de la sustancia se obtiene una recta. Es decir, a mayor
cantidad de proteína, mayor cantidad de producto de reacción y, por lo tanto, mayor
intensidad de color.
Curva de Calibración
Dado que se ha trabajado con datos reales, los gráficos que se obtienen no son tan ideales,
pero esta situación no es un obstáculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la
recta más probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de cálculo
de las computadoras.
Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de
concentraciones posibles si no dentro de un conjunto de valores que dependen de
numerosos factores dependientes del método de medición. Por otra parte, este tipo de
curvas no se limita solamente a la determinación de un elemento o compuesto químico,
sino que tiene múltiples aplicaciones.(4)

Objetivos
● Interpretar y relacionar variables a utilizar para efectuar el cálculo de contenido de
una sustancia en una muestra real.
● Determinar el calibrado del azul de metileno utilizando tres diluciones seriadas y
diluciones 1/10.
● Determinar la longitud de onda del azul de metileno y su absorbancia.
● Aprender el uso del espectrofotómetro.

Materiales:

● 2 vasos de precipitado de 100ml ● Benzal diluido 1-100

● 1 pipeta volumétrica de 1 ml de (ALTAMIRANO)
1/10 ● Agua destilada
● 1 pipeta volumétrica de 2 ml de ● Azul de metileno
1/10 ● Azul de metileno (All-Blue)
● 1 Gradilla ● Acetona (Laboratorios)
● 7 Tubos de ensayo ● Jabón para trastes (Vish)
● 2 Propipetas
● Espectrofotómetro (Fisher
scientific)
● Servitoallas

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Diagrama De Flujo

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 Resultados

(nm) (nm) (nm) (nm) (%)

nm

nm
nm

nm

nm
nm

nm

nm

nm

nm

nm

nm

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 Análisis de Resultados
La curva de calibración es un método muy utilizado para determinar la concentración de
un analito. En una muestra desconocida sobre todo en diluciones. El método se basa en la
relación proporcional entre la concentración y una determinada señal analítica (señal de
absorbancia), suele representarse en una gráfica a la que se le conoce como curva de
calibración o curva de calibrado, cuya concentración suele ser lineal. Esto se puede medir
a través de un aparato llamado espectrofotómetro es un instrumento usado en los
laboratorios, ya que es un aparato de análisis que fortalece la ciencia de la
espectrofotometría, sirve para medir la intensidad de la luz que es absorbida al pasar por
una solución. Su funcionamiento se basa en la luz de la lámpara especial que posee, que es
guiada por medio de un conector que selecciona y separa la luz de la longitud de onda,
para luego pasar por una muestra, para medir cuanta luz absorbe (absorbancia) y cuanta
transmite (transmitancia). Para calibrar se necesita agua destilada (solución blanco) y luego
se coloca la muestra a la cual se le medirá la absorbancia o la transmitancia.(5) Nuestra
muestra obtuvo una absorbancia de 1.131 al parecer obtuvimos una buena absorbancia.

Conclusión
Se empleó la técnica de disolución para poder obtener la curva de calibración del azul de
metileno, así podemos Interpretar y relacionar variables a utilizar para efectuar el cálculo de
contenido de una sustancia en una muestra real en la cual se necesitó calibrar el azul de
metileno utilizado en tres diluciones seriadas y diluciones 1/10 en la cual la forma del
pipeteado se tomó correctamente y la disolución fue la esperada para la determinación de
la longitud de onda del azul de metileno y su absorbancia cumpliendo los cálculos
necesarios obteniendo resultados positivos y con el menor margen de error.

Referencias
(1) Fajardo, J. J., Caicedo, R., & Pinilla, J. P. (2018). CURVA DE CALIBRACIÓN.
(2) Lopez, C. F. (2001). Curvas de calibración y validación por espectroscopia en el infrarrojo
cercano (EIC) para leches fluidas.
(3) Pérez-López, E. (2014). Idoneidad del método de análisis de magnesio en agua potable
por absorción atómica con curva de calibración cuadrática. Tecnología en marcha, 27(4),
22-29.
(4) Contero, R., Aquino, E. L., Simbaña, P. E., Gallardo, C., & Bueno, R. (2019). Estudio en el
Ecuador de la curva de calibración para el conteo total de bacterias por citometría de flujo
de leche cruda bovina. LA GRANJA. Revista de Ciencias de la Vida, 29(1), 97-104.
(5) Meléndez, H. A. (2006). Establecimiento y validación de curvas de calibración NIRS para
café oro de Honduras.

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