FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

CUANTIFICACIÓN DE TERPENOS EN MATERIAL

VEGETAL MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE GASES CON
HEADSPACE

OBJETIVO

• Tener una primera aproximación al uso rutinario de un cromatógrafo de gases con Head
Space.

1. INTRODUCCIÓN

En la clase de teoría se estudió como se separan los analitos mediante una columna cromatográfica.
Sin embargo, una corrida cromatográfica tiene muchos más aspectos que la separación, por ejemplo:
la importancia de hacer un pretratamiento a la muestra, la escogencia del gas de arrastre, las
condiciones de temperatura en el horno y el tipo de detector a usar. Todos estos aspectos se tratarán
durante la práctica, además de la programación del equipo para una rutina de trabajo típica.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

La cromatografía de gases es más simple y robusta que la cromatografía liquida HPLC, típicamente
dependiendo del analito, el tipo de tecnología usada en la columna, y el tamaño de columna, de esta
manera las corridas en cromatografía de gases pueden presentar la ventaja de ser más rápidas y
económicas, pues no requieren el uso de solventes orgánicos. Sin embargo, esta técnica de
separación y cuantificación debe ser usada en analitos de bajo peso molecular y alta volatilidad, que
le permitan al analito superar el punto de ebullición fácilmente mediante calentamiento. El analito
pasa a través de una columna capilar de varios metros de longitud empujada por un gas de arrastre,
separando la muestra. Al final de la columna se dispone un detector de acuerdo con la química del
analito a estudiar. Típicamente el detector más común es el FID, de sus siglas en inglés: detector de
ionización de llama. Un dispositivo extra que se puede acoplar a un cromatógrafo de gases es el
HeadSpace, el cual es un aditamento previo al sistema de inyección que controla la temperatura, la
agitación y parámetros sistemáticos que permiten la volatilización del analito en un vial de manera
reproducible, disminuyendo considerablemente el tiempo empleado en la preparación de la muestra
por fuera del equipo de cromatografía.

Creado por Giovanni Rojas, 2022-2

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3. SEGURIDAD DURANTE LA PRÁCTICA

3.1 Normas de seguridad

El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.

3.2 Equipos de protección personal

Usar durante todo el desarrollo de la práctica los siguientes elementos de seguridad:

• Bata de laboratorio
• Guantes de nitrilo
• Gafas de seguridad

Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Está prohibido su intercambio
con los demás compañeros de laboratorio.

3.2 Manejo de Residuos químicos

Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante desechar los residuos
generados en las prácticas del laboratorio de química en forma adecuada. Por ello el estudiante debe:

1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los cuales están
debidamente identificados según el tipo de sustancia a desechar.

2. Verter únicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no controladas y
potencialmente peligrosas.

4. CONSULTAS PREVIAS

4.1. ¿Cuáles son las restricciones técnicas que debe cumplir un analito para ser separado mediante
cromatografía de gases?

4.2. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de un Head Space?

5. PROCEDIMIENTO

5.1. MATERIALES

Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.

ITEM Cantidad
Viales de headspace de 20 mL 6
Espátula pequeña 1

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5.2. REACTIVOS

Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la práctica por pareja.

Reactivo Cantidad
Estándar #1 2500 µg/mL terpenos 40 µL
Estándar #2 2500 µg/mL terpenos 40 µL
Isopropanol 5 mL
Gases grado 5.0 (He, N 2 , y aire comprimido) N/A

5.3 EQUIPOS

Tabla 3. Listado de equipos necesarios para el desarrollo de la práctica por grupo

Equipos Cantidad
Balanza Analítica 1
Cromatógrafo de gases con headspace 1
Columna Cromatográfica 1

CLAVES PARA EL EXITOSO DESARROLLO DEL LABORATORIO

 Reconocer la importancia de la preparación de estándares y por qué son ellos necesarios en

una cuantificación.
 Realizar adecuadamente los cálculos para encontrar la concentración del analito teniendo
presente las diluciones realizadas.

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6.1. COMPONENTES Y CUIDADOS DEL CG

Se realizará una presentación de los componentes del cromatógrafo de gases indicando cuales son
las diferencias y semejanzas con el cromatógrafo líquido. Posteriormente se indicará como se debe
realizar el acondicionamiento del sistema cromatográfico incluyendo la columna.

6.2. MANEJO BÁSICO SOFTWARE OPEN LAB

Se realizará la descripción de los componentes de un método cromatográfico en el software Open

Lab, configurando los parámetros requeridos para la realización del análisis. Se crearán secuencias
de trabajo y corridas simples para explicar las ventajas y diferencias de cada una.

6.3. ANÁLISIS DE MATERIAL VEGETAL

6.3.1. Preparación de las soluciones patrones

Solución Stock (1000 µg/mL). Adicionar 40 µL de Estándar #1 de 2500 µg/mL y 40 µL de Estándar
#2 de 2500 µg/mL a 20 µL de isopropanol en un vial de 2 mL con inserto de vidrio de 250 µL.

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Curva de calibración. Determinar la cantidad que se requiere de solución stock, para obtener una
concentración de 25, 50, 100, 250 y 500 µg/mL para cada analito.
Nota: La preparación de la curva la realizará el personal del LIQ, por lo que no es necesario que los
estudiantes preparen nuevamente la curva de calibración.

6.4. Medidas para la cuantificación (construcción de la curva de calibración)

Cada uno de los estándares se deben filtrar con membrana de 0,2 micras en viales con tapa no
ranurada para luego inyectar de manera individual en el cromatógrafo de gases, así se determinará
el tiempo de retención del analito en las condiciones cromatográficas utilizadas. Se representarán
las áreas del pico cromatográfico vs la correspondiente concentración, para cada uno de los
estándares.

6.5. Preparación de la muestra

Pesar 50 mg de muestra directamente en el Vial de Headspace de 20 mL y agrafar.

7. PAUTAS PARA EL ANÁLISIS DE RESULTADOS

7.1. Se debe realizar los cálculos con los resultados obtenidos en el laboratorio incluyendo la
información de los cromatogramas de la curva de calibración para determinar la concentración
inicial del analito en la muestra original.

8. REFERENCIAS

1) H. Ayres. Análisis químico cuantitativo. ed. harla. 1989

2) Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F, J., Crouch, S.R., Fundamentos de química analítica.
Octava Edición.Ed. Thomsom 2004.
3) Skoog, D, A., Holler, F, Crouch, S.R Principios de Análisis Instrumental. sexta Edición. Ed.
Thomsom 2004
4) Supelco Chromatography 2001. Aplications Alcohols.
5) D. Harvey. Química analítica moderna. Primera edición. Editorial Mc Graw Hill. 2002.
6) Day. R, A., Underwood A, L., Química analítica Cuantitativa. Quinta Edición. Editorial
Prentice Hall 1989.
7) Harris D. C., "Análisis Químico Cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamérica". México. 1992.

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