TEMA 2:

REACCIONES DE AGLUTINACIÓN Y Olga M. García

PRECIPITACIÓN
Fernández

2º CURS O DE GRA DO S UPERIOR EN LABORATORIO

CLÍN ICO Y BIOMÉDICO
 CONTENIDOS
• ¿En qué consisten las técnicas
de aglutinación?
• Tipos de reacciones de
aglutinación y técnicas.
• ¿En qué consisten las técnicas
de precipitación?.
• Tipos de reacciones de
precipitación y técnicas.
APROBADO: 6,63

2
 REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
Las reacciones de aglutinación son aquellas en las
que se produce la formación de enlaces covalentes entre
anticuerpos bivalentes o multivalentes y antígenos
multivalentes.

Lo que observamos en
este tipo de reacciones es
la agrupación visible de
los complejos formados
entre los antígenos y los
anticuerpos.
3
 REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
ANTICUERPOS AGLUTINAN AGLUTININAS

ANTÍGENO PROVOCA AGLUTINÓGENO

Las reacciones de
aglutinación se producen
entre partículas en
suspensión. El
aglutinógeno debe estar
presente sobre la
superficie de la partícula
y además debe presentar
varios epítopos. 4
 REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
Las aglutininas pueden ser de dos tipos:

COMPLETAS INCOMPLETAS

5
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Las pruebas de aglutinación directa son aquellas en
las que la aglutinina reacciona con un aglutinógeno
presente de forma natural en la superficie de las
células.

6
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Un claro ejemplo de prueba de aglutinación directa
es la reacción de hemaglutinación que se produce
cuando determinados anticuerpos se unen a antígenos
sobre la superficie de los eritrocitos.

7
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Las pruebas de aglutinación indirecta son aquellas
en las que la aglutinina reacciona con un aglutinógeno
que ha sido transferido previamente a la superficie de
una partícula.

8
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Para llevar a cabo la sensibilización de las partículas,
existen distintos sistemas que facilitan la sensibilización
de las células:
• Exponer a las partículas a alguna sustancia que
favorezca la adsorción del aglutinógeno a la
superficie celular.
• Utilizar moléculas bifuncionales que primero se
fijan a la superficie celular y luego fijan el
aglutinógeno por una reacción covalente.

9
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Un ejemplo de las pruebas de aglutinación indirecta es
el que se produce al poner en contacto un suero problema,
que contiene aglutininas antitoxoplasma, con hematíes
de cordero sensibilizados con aglutinógenos procedentes
de un lisado de toxoplasma.

10
 TIPOS DE AGLUTINACIÓN
Las pruebas de aglutinación indirecta reversa son un
tipo de prueba de aglutinación indirecta en la cual el
aglutinógeno está libre en la muestra problema y la
aglutinina está fijada a la superficie de la partícula.

Antígeno Aglutinina fijada

libre a partícula Aglutinación
11
 TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
Las reacciones de aglutinación pueden llevarse a
cabo de distintas formas:

En porta En tarjetas
visualizadoras

En placas de
microtitulación 12
 VALORACIÓN DE AGLUTINACIÓN
Las reacciones de aglutinación tienen un alto grado
de sensibilidad pero tienen el inconveniente de que no
permiten cuantificar la concentración de la sustancia
investigada en la muestra problema.

SON PRUEBAS CUALITATIVAS

13
 REACCIONES DE INHIBICIÓN
DE LA AGLUTINACIÓN
Las técnicas de inhibición de la aglutinación son una
modificación de las técnicas de aglutinación que
permiten detectar antígenos solubles.

14
 REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
Las reacciones de precipitación se producen cuando
el antígeno es soluble y al interaccionar con su
anticuerpo específico se forma el complejo AG-AC y da
lugar a un entramado insoluble que precipita.
Para que ocurra, el
anticuerpo y el antígeno
SOLUBLES
tienen que ser bivalentes
o multivalentes.
Además, necesitamos
unas concentraciones de
AG y AC equivalentes.
15
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN

16
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
A medida que los
anticuerpos se une a
los determinantes
antigénicos de distintas
moléculas, se forman
complejos inmunes
más grandes que
acaban precipitando.

17
 TIPOS DE PRECIPITACIÓN
Las reacciones de precipitación se pueden producir
en medio líquido o medio semisólido (gel).

Reacciones de Inmunodifusión
floculación ML MG

18
Inmunodifusión INMUNODIFUSIÓN

Radial
Espontánea
Doble

Inmunoelectroforesis
Forzada
Inmunoelectroforesis
en cohete

19
 INMUNODIFUSIÓN
Las reacciones en medio semisólido consisten en la
difusión (a través de una matriz de agarosa) del
antígeno, o antígeno y anticuerpo simultáneamente;
produciendo una banda de precipitación cuando ambos
están en la concentración adecuada.

20
 INMUNODIFUSIÓN RADIAL
En la inmunodifusión radial se produce la difusión
del antígeno hacia el anticuerpo produciéndose un anillo
de precipitación en la zona de equivalencia.
En ocasiones el gel
de agarosa se puede
colorear para
visualizar mejor los
anillos de
precipitación.
SON PRUEBAS
CUALITATIVAS Y
CUANTITATIVAS
21
INMUNODIFUSIÓN RADIAL

22
 INMUNODIFUSIÓN RADIAL
Una vez finalizada la difusión, se mide el radio al
cuadrado (R2) de los anillos de precipitación que es
proporcional a la concentración de antígeno (C).

23
 INMUNODIFUSIÓN DOBLE
En la inmunodifusión doble se produce la difusión
del antígeno hacia el anticuerpo y viceversa, formando
un halo de precipitación visible en las zonas de
equivalencia.
Se taladran
pocillos de forma
que haya uno central
y varios periféricos.
Normalmente se
coloca en el centro el
anticuerpo.
24
 INMUNODIFUSIÓN DOBLE
Si el antisuero no es muy específico y la muestra tiene
varios antígenos, pueden aparecer varias líneas de
precipitado.

25
 INMUNOELECTROFORESIS
La técnica de inmunoelectroforesis se basa en la
separación de los antígenos mediante electroforesis
antes de visualizar la región de precipitación.

AC
AG

26
 INMUNOELECTROFORESIS

Las bandas de precipitación de los inmunocomplejos

presentan forma de arcos. Suelen utilizarse para
comprobar si un paciente produce cantidades anormales
de una proteína sérica.

PRUEBA CUALITATIVA 27
INMUNOELECTROFORESIS EN COHETE
La técnica de
electroforesis en cohete
permite medir las
concentraciones de
antígeno, sometiendo un
antígeno con carga
negativa en un gel (pH
neutro) que contiene
anticuerpo.

28
INMUNOELECTROFORESIS EN COHETE

PRUEBA CUALITATIVA Y CUANTITATIVA

29
 REACCIONES EN M. LÍQUIDO
Las reacciones de precipitación que se producen en
medios líquidos se denominan de floculación, en ellas
los complejos antígeno-anticuerpo quedan en suspensión
en la muestra dando un aspecto turbio.

Inmunoturbidimetría Nefelometría 30
 INMUNOTURBIDIMETRÍA
La inmunoturbidimetría mide el número de
inmunocomplejos basándose en la medición de la
cantidad de luz que es absorbida al atravesar la
suspensión.

31
 NEFELOMETRÍA
La inmunonefelometría mide la cantidad de luz
dispersada por los inmunocomplejos, es decir, se
cuantifica la cantidad de luz desviada por estas
partículas (con un ángulo de entre 30-90º).

32