INMUNODIFUSIÓN RADIAL

INMUNODIFUSIÓN DE OUCHTERLONY

INMUNOLOGÍA GENERAL
semana 6

Blgo. Carmen Rosa Silupú García

INMUNODIFUSIÓN
Técnica que se utiliza para la identificación y cuantificación de cualquiera de las
inmunoglobulinas.
Se basa en la presencia de un precipitado visible resultado de la combinación de
antígeno – anticuerpo en determinadas circunstancias.

UTILIDADES DE LOS INMUNOENSAYOS:

Diagnóstico de enfermedades

Monitoreo de la respuesta inmune humoral

Identificación de las moléculas biológicas de

interés médico
 COMPOSICIÓN DE LOS COMPLEJOS:

 Cuando un Ag en solución es agregado

progresivamente a un antisuero forman
pp del complejo Ag-Ac.

 El entrecruzamiento Ags y Acs da

origen a estructuras enrejadas
tridimensionales que forman grandes
agregados que pp.

 A medida que se agregan más Ag se

alcanza un óptimo después del cual, se
forma menos pp.
En esta etapa puede demostrarse que el
sobrenadante contiene complejos
solubles de Ag-Ac.
 Técnicas inmunológicas de
precipitación

Precipitación en medio líquido,

detecta la presencia de Ags ó Acs,
cuando se mezclan en fase líquida.

Precipitación en medio sólido,

utiliza un soporte sólido gelificado
en el que difunden el Ags y Acs. Se
distinguen 2 dos categorías:
inmunodifusión y técnicas
inmunoelectroforéticas
INMUNODIFUSIÓN RADIAL- OBJETIVO DEL EXPERIMENTO:

 La inmunodifusión radial es una técnica cuantitativa muy

sensible que se utiliza a menudo clínicamente para detectar los
niveles de proteínas sanguíneas de los pacientes.
 En esta práctica, los estudiantes aprenderán a determinar
cuantitativamente una concentración desconocida de un
antígeno.
 DIFUSIÓN SIMPLE MONODIMENSIONAL O INMUNODIFUSIÓN SIMPLE
( MÉTODO DE OUDIN)

Se utiliza agarosa, la mayoría de los tipos se disuelven a poco más de 90°C y gelifican
a 45°C

En el soporte de agarosa se coloca el antígeno y el anticuerpo ( es necesario conocer

uno de ellos para identificar el otro.

Ambos migran en todas las direcciones y cuando encuentran a su contrario presentan

una banda de precipitación fácilmente observable.

Esta técnica constituye la base común de una gran variedad de técnicas que permite
realizar desde un análisis cualitativo hasta una estimación cuantitativa de un
antígeno.
INMUNODIFUSIÓN RADIAL

Técnica que cuantifica de manera sencilla y económica Ig de isotipo G, M y A o

antígenos solubles ( C3, C4, transferrina, proteína C reactiva ), presentes en muestras
biológicas.

La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el Ag a medir o en una

matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac. Específico.
 Doble difusión en placa (Ouchterlony)-IDD

Base del método: Difusión de macromoléculas en gel de agar.

Difusión depende de: concentración del gel, concentración de reactantes,
tamaño de las moléculas Ag y Ac.

Se basa en el principio de que cuando el antígeno y el anticuerpo se

difunden en un medio sólido (agar) y en la zona de equivalencia forman
complejos inmunitarios estables que se pueden analizar visualmente.

En algunos casos, también nos sirve para realizar análisis de comparación

de Ags.
(I) Antígenos idénticos: las líneas no se cruzan (Identidad total)
(II) Antígenos diferentes: las líneas se cruzan (No identidad)
(III) Antígenos relacionados: las líneas se unen parcialmente (Id. parcial)
Los dos Ag. Tienen los
mismos epítopos
reconocidos por el suero y
se forma una banda de
precipitación con forma
de arco continuo
Los Ag son distintos y se
forman bandas de
precipitación
independientes y no dan
un arco continuo.
Aparece una figura con
forma de aspa.
Los dos Ag comparten
un epítopo, pero uno
de ellos tienen un
epítopo extra que es
reconocido por el
suero y se forma un
arco de precipitación al
que le sale un espolón.
 Aplicaciones de la Inmunodifusión

 Principalmente comparación de antígenos

 Cuantificación de niveles de Ig G, Ig A, Ig M e Ig E

 Los niveles de Ig D no se relacionan con enfermedad

 La Ig E se relaciona con estados alérgicos y parasitarios

 Los niveles de inmunoglobulinas pueden variar con la edad, sexo, raza, factores
geográficos, etc.