Breve discusión Antigeno-Anticuerpo

¿Qué es un antígeno?
¿Qué es un anticuerpo?
¿Cuál es la naturaleza química de los anticuerpos?
¿Se pueden aislar los Ac? ¿Cómo? (pensar en biomol)
¿Qué permite la unión Ag-Ac?
¿Es reversible dicha unión? ¿Por qué?
La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es
una de las reacciones moleculares angulares
en la respuesta inmunitaria del organismo El
reconocimiento Ag-Ac es una reacción de
complementariedad, por lo que se efectúa a
través de múltiples enlaces no covalentes entre
una parte del antígeno y los aminoácidos del
sitio de unión del anticuerpo. La reacción se
caracteriza por su especificidad, rapidez,
espontaneidad y reversibilidad.

Capacidad del anticuerpo de unirse al antígeno

que lo estimuló a través del epítopo o
determinante antigénico mediante uniones
intermoleculares débiles. La unión dada por la
especificidad es muy precisa y permite distinguir
entre grupos químicos con diferencias mínimas a
pesar de su similitud; además, permite la
detención de un solo antígeno..
¿Qué es una preciptación?
¿Qué tipos de precipitados conocemos?
¿Cómo podemo relacionar los anticuerpos (Ab) con las precipitaciones?
Reacciones de precipitación

El anticuerpo y el antígeno soluble que interactúan en una solución acuosa forman un retículo que por último se convierte en un
precipitado visible.

Aunque la formación del complejo soluble Ag-Ab ocurre en el transcurso de minutos, la del precipitado visible se lleva a cabo con mayor
lentitud y a menudo requiere uno o dos días para completarse.

La formación de un retículo de Ag-Ab depende de la valencia tanto del anticuerpo como del antígeno:
El anticuerpo debe ser bivalente; no se forma un precipitado con fragmentos Fab monovalentes.
El antígeno debe ser bivalente o polivalente; es decir, debe tener cuando menos dos copias del mismo epítopo o presentar diferentes
epítopos que reaccionan con distintos anticuerpos presentes en antisuero policlonal.

Aunque en alguna época los principales tipos de valoración empleados en inmunología fueron diversas modificaciones de la reacción de
precipitación, se sustituyeron en gran parte por métodos más rápidos y que sólo requieren cantidades muy pequeñas de antígeno o
anticuerpo porque son mucho más sensibles. Además, estos métodos modernos de valoración no se limitan a las reacciones antígeno-
anticuerpo que producen un precipitado. En el cuadro 6-3 se compara la sensibilidad o cantidad mínima de anticuerpo detectable por
varios inmunoensayos
Los precipitados inmunitarios no sólo pueden formarse en solución sino también en una matriz de agar.

Cuando el antígeno y el anticuerpo se difunden uno hacia el otro en agar, o cuando el anticuerpo se incorpora dentro del agar y el
antígeno se difunde hacia la matriz que contiene anticuerpo, se forma una línea visible de precipitación.

Como en la reacción de precipitación en líquido, ocurre una precipitación visible en la región de equivalencia, en tanto que no se
observa precipitado visible en las regiones de exceso de anticuerpo o antígeno.

Es posible utilizar dos tipos de reacciones de inmunodifusión para determinar las concentraciones relativas de anticuerpos o antígenos,
comparar antígenos o determinar la pureza relativa de una preparación de antígeno.

Éstos son la inmunodifusión radial (método de Mancini) y la inmunodifusión doble (método de Ouchterlony); ambos se efectúan en un
medio semisólido como el agar.
Procedimiento:

1. Sobre un porta o placa de petri colocar agar-agar líquido y formar una película delgada, ya sea circular o capaz
de cubrir el total de la superfice.
2. Una vez solidificado, realizar los posillos necesarios cortando el gel
3. Sembrar las muestra a estudiar
4. Colocar en una cámara con humedad y temperatura controlada.

1 2 3 4

Se siembran las muestras

 En la inmunodifusión radial

En la inmunodifusión radial se coloca una muestra de antígeno en un

posillo y se deja difundir en agar que contiene una dilución conveniente
de un antisuero.
Conforme el antígeno se difunde dentro del agar, la región de
equivalencia se establece y alrededor del foso se forma un anillo de
precipitación, un anillo (fi g. 6-6, parte superior).

El área del anillo es proporcional a la concentración de antígeno.

La comparación del área del anillo de con una curva estándar (que se
obtiene al medir las áreas de precipitina de concentraciones conocidas
del antígeno) permite determinar la concentración en la muestra de
antígeno.

En anticuerpo se encuentra
diluido de forma uniforme en
el agar.
En el método de Ouchterlony o inmunodifusión doble, tanto el antígeno como
el anticuerpo se difunden radialmente desde los fosos uno hacia el otro y por
tanto se establece un gradiente de concentración. Conforme la equivalencia
se alcanza, se produce una línea visible de precipitación, una línea de
precipitina (fi g. 6-6, parte inferior)
 Ejemplo de inmunodifusión doble

https://www.youtube.com/watch?v=U5fYBFgOJAE

https://www.youtube.com/watch?v=9rzefdsL-mQ https://www.youtube.com/watch?v=Fnx5CkGRBEM
La inmunoelectroforesis combina electroforesis e inmunodifusión doble.

Usos: La inmunoelectroforesis se usa en laboratorios clínicos para detectar la presencia o

ausencia de proteínas en el suero. Esta técnica es útil para determinar si un paciente
produce cantidades anormalmente bajas de uno o más isotipos, características de ciertas
enfermedades de inmunodeficiencia. Asimismo puede mostrarse si un paciente produce en
exceso cierta proteína sérica, como albúmina, inmunoglobulina o transferrina.

En la inmunoelectroforesis, la mezcla de antígeno se somete primero a electroforesis a fin

de separar sus componentes por carga.

A continuación se cortan cuencos en el gel de agar paralelos a la dirección del campo

eléctrico y se les añade antisuero.

Luego el anticuerpo y el antígeno se difunden uno hacia el otro y producen líneas de

precipitación donde se encuentran en proporciones apropiadas (fi g. 6-7).

Una muestra de suero se somete a electroforesis y los componentes séricos individuales se

identifican con antisueros específicos para una proteína o una clase de inmunoglobulina
determinada.
Como la inmunoelectroforesis es una técnica estrictamente cualitativa y su utilidad se limita
a la detección de anormalidades cuantitativas sólo cuando la desviación respecto de lo
normal es notable, como en los estados de inmunodeficiencia o los trastornos
inmunoproliferativos.