Curso de Biología Molecular

Carrera de Ingeniería en Biotecnología

RECOMBINACION DEL ADN

Luis Pouchucq Marinkovic

UTEM 2020
 RECOMBINACION DEL
ADN

Recombinación; Cambio físico de material entre dos

hebras de ADN

- Recombinación Homologa.

Recombinación cromosómica
Recombinación inmunitaria

- Recombinación Sitio Específica.

- Recombinación no Homologa.

Transposición
 RECOMBINACION
HOMOLOGA
Ocurre durante la profase I de la meiosis entre secuencias homologas de
cromosomas homólogos.
En el estado de “cuatro hebras” de la meiosis , dos de las hebras con
secuencias homólogas intercambian material.
Las enzimas responsables de esta recombinación pueden usar cualquier
par de secuencias homologas como sustratos
La frecuencia de recombinación no es constante dentro del genoma

La meiosis ocurre
durante la
gametogénesis
 RECOMBINACION
HOMOLOGA
Etapas de la profase I de la meiosis:

Comienza cuando los cromosomas empiezan a hacerse

visibles.
Antes del leptonema los cromosomas ya se han replicado.
Cada uno consiste en dos cromátidas hermanas.
Los cromosomas homólogos se aparean para formar
Bivalentes.
El apareamiento se expande a hasta que todos los
cromosomas homólogos están apareados (sinapsis
cromosómica)
Cuando el apareamiento está completo, los cromosomas
quedan apareados lateralmente en complejos
sinaptonémicos
La recombinación ocurre cuando dos cromátidas no
hermanas pero si homólogas intercambian material (involucra
la ruptura y la unión de ambas doble-hebras).
Cuando los cromosomas comienzan a separarse quedan
unidos por los sitios donde ocurrió recombinación, estos son
llamados quiasmas.
 RECOMBINACION
HOMOLOGA
- El evento clave es el intercambio de hebras simples
- Cuando una hebra simple de un duplex desplaza a su contraparte en el otro duplex, se crea una estructura ramificada.
- El intercambio genera una región hetero duplex que consiste en una hebra de cada duplex anterior.
- La moléculas unidas se “resuelven” en dos duplex por la ruptura de las hebras que las conectan
- La recombinación puede ocurrir o no, pero siempre queda una “cicatriz” heteroduplex donde ocurrió el evento.

La distancia
mínima para que
ocurra
recombinación
homóloga es de
75 pb.
 RECOMBINACION
HOMOLOGA
- La recombinación se inicia rompiendo la doble hebra de uno de los
ADN duplex (aceptor).

- Luego la exonucleasa genera extremos 3’ hebra simple que invaden

la el otro duplex (donante).

- La síntesis de novo de DNA reemplaza los fragmentos que han sido

degenerados

- Esto genera la unión de las dos moléculas de ADN duplex

conectadas por un ADN heteroduplex

Parte de la molécula La secuencia de la doble

“aceptora” convierte su hebra “donante” queda en
secuencia en la de la ambas moléculas
molécula donadora.
RECOMBINACION
HOMOLOGA

La recombinación ocurre cuando las hebras son rotas, antes

de la formación del sinaptonema.
La formación del sinaptonema no es necesaria para la
recombinación.
El sinaptonema no se forma si no ocurre recombinación.
 RECOMBINACION
HOMOLOGA
Rad51 y Spo11 son proteínas involucradas
en la ruptura del ADN para la
recombinación.

El sinaptonema está formado por cohesinas

y proteínas ZIP

La recombinación ocurre cuando las hebras son rotas, antes

de la formación del sinaptonema.
La formación del sinjaptonema no es necesaria para la
recombinación.
El sinaptonema no se forma si no ocurre recombianación.
RECOMBINACION BACTERIANA
sistema Rec
- Sistema utilizado por el Fago Lamba
- Utiliza regiones restringidas de la molécula de ADN

Secuencias chi;
5' GCTGGTGG3'
3' CGACCACC5‘

- Estimulan la recombinación en su vecindad

- Ocurren cada 10 a 15 kpb en E. coli.
- Están involucradas las proteínas de la familia Rec
- Necesita un extremo 3’hebra simple disponible

- El complejo RecBCD posee actividad nucleasa y helicasa

- Se une al ADN corriente debajo de las secuencias chi , desenrolla el
duplex y degrada una de las hebras en dirección 3’-5’ moviéndose
hacia el sitio chi
- El sitio chi gatilla la separación de RecD y la actividad nucleasa
- La actividad helicasa continua varias bases mas adelante
dejando una hebra simple con un extremo 3’ libre
RECOMBINACION BACTERIANA
sistema Rec

La recombinación bacteriana necesita un extremo 3’ hebra simple libre, una

molécula de ADN duplex y complementariedad de secuencias entre ellas;
ASIMILACION DE LA HERBRA SIMPLE

- RecA cataliza la asimilación de la hebra simple en un ADN duplex.

-Polimeriza formando filamentos con el ADN hebra simple que deja la
actividad de RecBCD en las inmediaciones de la secuencia chi
- Requiere la presencia de proteínas SSB
 RECOMBINACION BACTERIANA
sistema Rec
Luego de la asimilación de la hebra
simple por parte de RecA, se genera
una estructura de empalme
recombinante (Holliday junction)

Las dos moléculas unidas através del

empalme son separadas por el
sistema RuvABC

- RuvA actúa en los empalmes recombinantes (Holliday junctions).

- RuvB es una helicasa que cataliza la migración del empalme.

- RuvC cliva el empalme para generar dos intermediaros de recombianción

The prototypical DNA-strand-exchange reaction. Double-stranded DNA
(dsDNA) pairs with the RecA presynaptic filament, which consists of
RecA protein and single-stranded DNA (ssDNA), to produce
heteroduplex DNA bound by RecA and the exchanged ssDNA. b,
Structures of the participating DNA molecules: B-form dsDNA; ssDNA
within the presynaptic filament (as determined by Chen and
colleagues1, protein not shown); dsDNA within the filament1 (protein
not shown); and randomly coiled ssDNA.
 RECOMBINACION SITIO
ESPECIFICA
FAGO LAMDA
Involucra la reacción entre sitios específicos, que no
necesariamente tienen que ser homólogos
El fago lamda en estado lisogenico se integra en el cromosoma
bacteriano por recombinación entre un sitio en el fago llamado att
con el mismo en el cromosoma de E. coli (attB)
El fago para pasar a su estado lítico es escindido del cromosoma
por recombinación entre sitios que están en los extremos del
profago lineal (attP)
EL gen int del fago lamba codifica para una enzima integrasa
que cataliza la reacción de integración (integration host factor IHF)
attB = BOB
attP = POP
attL y attR = POB y BOP
O = núcleo
B y P = brazos
 RECOMBINACION SITIO
ESPECIFICA
Las secuencias son cortadas escalonadamente dejando extremos hebra simple libres de 7 pb en attB y
attP. Luego estos se unen de manera cruzada.
 RECOMBINACION SITIO
ESPECIFICA

- Las integrazas son parecidas a las topoisomerazas del tipo I, ya que

cortan una hebra del ADN a la vez. La diferencia radica en que las
integrazas ligan los extremos cruzados de dos hebras distintas y las
topoisomerazas ligan los dos extremos de la misma hebra

- Dos unidades de la enzima se unen a cada sitio de recombinación y los

dos dímeros hacen sinapsis para formar un complejo para que la
reacción de transferencia ocurra.