INFORME COMPONENTE PRACTICO

LINA LISETH SANCHEZ ILLERA COD: 1062909113

TUTOR

CARLOS EDUARDO BARRAGAN VIDAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)

ESCUELA DE CIENCIAS AGRICOLAS PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE. (ECAPMA)
DICIEMBRE 2021
 INTRODUCCION

El suelo es un hábitat propicio para muchos microorganismos que habitan en él, además las
plantas les proporcionan las condiciones para su reproducción y supervivencia y a cambio
estos microorganismos les facilitan a las plantas una mejor absorción de nutrientes,
protección contra patógenos y fertilidad del ecosistema, existiendo así una interacción entre
microorganismo y planta. La diversidad de microorganismos existentes en el planeta es
extensa, gracias a las diferentes condiciones fisicoquímicas presentes en cada ecosistema
por lo que la riqueza y abundancia de éstos dependen de esas condiciones y de la
disponibilidad de nutrientes que cada microambiente posee. En el siguiente trabajo
estudiaremos algunos microorganismos presentes en el suelo el cual los identificaremos
aislándolos en unos montajes como el de la columna de Winogradsky y las trampas de
arroz, además se analizará por medio de un laboratorio virtual las técnicas de la siembra en
agar y la tinción de Gram para la identificación de bacterias.

OBJETIVO GENERAL

Evaluar el conocimiento teórico a través de varios montajes que demuestran la

cuantificación de la actividad y diversidad microbiana presentes en el suelo.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Interpretar en la columna de Winogradsky, la diversidad de bacterias y

microorganismos autótrofos y heterótrofos presentes en el montaje.
 Explicar por medio de las trampas de arroz los microorganismos aislados que se
obtuvieron del montaje.
 Identificar las bacterias Gram positivas y Gram negativas por medio del laboratorio
virtual.
Metodología
B. Columna de Winogradsky
Utilicé una botella de plástico, la cual llené 1/3 de sustrato del jardín, con 1cm de papel
resma cortado en pedazos pequeños, 1 cm de cascara de huevo triturado y 1 cm de azufre
en polvo, compacté muy bien y llené 1/3 restante con agua hervida dejando espacio en la
parte superior, luego lo cubrí con un tipo de cinta que se usa para envolver alimentos y lo
aseguré con unas ligas. En esta metodología hice dos columnas Winogradsky con la gran
diferencia que en la primera usé yema de huevo cocido como fuente de azufre.

31 octubre montaje inicial 21 noviembre montaje inicial

Montaje final 20 noviembre montaje final 06 diciembre

 C.

Ensayo para el aislamiento de microorganismos del suelo

Para las trampas de arroz utilicé cuatro frascos de vidrio debidamente lavados y secos, los
cuales llené con 15 gramos de arroz medio cocido sin sal y sin aceite, y luego los tapé con
gasa esterilizada asegurándolos con unas ligas, de ahí los llevé a baño maría por veinte
minutos.

trampa de arroz puesta al lado de

una mata de plátano.
D. Laboratorio Virtual
Repique de colonias aisladas y siembra en agar

Se esteriliza el asa en la llama y se deja enfriar, luego se elige una colonia aislada de la
placa de agar y se extiende sobre la placa usando rayas paralelas y estrechas. Después se
esteriliza de nuevo el asa y se pasa al siguiente cuadrante sin superponer las rayas
anteriores, así hasta rayar toda la placa. De ultimo se coloca la placa en una incubadora a
una temperatura de 37°C donde a partir de 24 horas se podrán ver los resultados.

Muestreo de microorganismos usando almohadillas listas para sembrar

Se cultivan las bacterias de las muestras en un plato 3m “M petrifilm”. Luego se utiliza una
pipeta desechable para transferir las muestras, se utiliza un hisopo rápido de 3M. en una
placa petrifilm se cubre el cultivo, con una sustancia que lo hace crecer o cultivar las
bacterias, de ese modo se sabe cuántas y que tipos de cultivos de bacterias hay en una
muestra. Se realizó con una muestra de leche pasteurizada, y la segunda muestra con leche
cruda, se usó etanol para limpiar la mesa y un mechero bunsen para mantener el ambiente
estéril. Las placas de petrifilm deben etiquetarse con la fecha de la muestra, de donde es y
sus iniciales. Se usa una pipeta desechable para recoger 1 ml de leche cruda y pasteurizadas
y luego se vierten cada una por separado en placas de petrifilm la cual debe retirarse la
película superior para poder depositar la muestra. Se deja caer la película superior sobre la
muestra eso evita que se formen burbujas de aire, se pone encima un esparcidor sobre la
placa para distribuir uniformemente la muestra. Luego se colocan dentro de una incubadora
a 90° F(32°C), se esperan 48 horas para que las bacterias crezcan y formen colonias
visibles.

Tinción de Gram
Se recolectaron muestras de yogur las cuales se van a preparar para verse en el microscopio
haciéndole una tinción de gram. se usó etanol para limpiar la mesa y un mechero bunsen
para mantener el ambiente estéril. Se diluye el yogur antes de colocarlo en el portaobjetos
del microscopio, con un líquido PBS solución salina tamponada con fosfato, esto ayuda a
ver las bacterias en el microscopio, se coloca 1ml en un tubo de ensayo con una pipeta,
luego con un bucle de inoculación ya esterilizado se recolecta parte de la muestra y se
mezcla con la solución. Se usa el asa esterilizado para transferir una pequeña muestra del
tubo de ensayo al portaobjetos preparado. Se repara con calor la diapositiva antes de
comenzar el proceso de tinción, se usan cuatro productos químicos para teñir el
portaobjetos, se aplican en un orden especifico y se enjuaga el portaobjetos con agua
corriente en cada aplicación. Se utiliza primero el tinte violeta cristal que indicará bacterias
gram positivas se echan unas gotas y se espera 60 segundos, se enjuaga con agua y se echan
unas gotas de yodo de gram el cual fijará el tinte a las paredes celulares de las bacterias y lo
hará permanente, se deja reposar durante 60 segundos, se enjuaga, luego se utiliza la
solución de alcohol, esto eliminará el exceso de tinte, dejando solo el tinte fijado a las
bacterias, se deja reposar durante 30 segundos, con este procedimiento se han teñido las
bacterias gram positivas de color purpura, ahora en el último paso se teñirán de rosa con
safranina las bacterias restantes las gram negativas, y se deja reposar 60 segundos, se
enjuaga y se lleva entre dos hojas de papel absorbente presionando un poco para secarlo,
ahora ya estaría listo para mirar bajo el microscopio.

Identificación de bacterias Gram positivas y Gram negativas

Aquí se usa un microscopio óptico con lentes de 10X, 40X y 100X, la de 100X es un lente
de inmersión en aceite. La diapositiva se coloca en el escenario para su visualización se ve
la muestra ampliada a través del ocular, las lentes u objetivos se giran para cambiar de
aumento, la fuente de luz se proyecta hacia arriba a través del portaobjetos para iluminar la
muestra, se enfoca la imagen con dos botones uno que es el ajuste burdo y el otro el ajuste
fino.

Mientras se mira por el ocular, se gira la perilla de ajuste grueso para bajar la platina y
enfocar la muestra, luego se usa la perilla de ajuste fino para hacer que la imagen sea lo
más nítida posible.
Resultados y discusión
Sección B
https://youtu.be/96zWXPeb278

Sección C

Las trampas las enterré el 31 de

octubre y el día 07 de noviembre
saqué las trampas del suelo como
lo evidencia la imagen.
En esta trampa no se puede observar nada ya En esta trampa se presume de acuerdo al color
que por esos días llovió mucho y alcanzó a entrar que es blanco bacillus y también amarillo
agua en la trampa y se echó a perder. beauveria bassiana.

En esta trampa se puede presumir de

acuerdo al color que es blanco bacillus.

En esta trampa se puede presumir de acuerdo al

color que es grisDlo que significa que puede ser
Sección
rhizoctonia o phytophthora, también se nota
Capturas
como color de pantalla
rojo que puede serdefusarium.
su resultado del repique de colonias aisladas (siembra en agar)
Fotografía de observación al microscopio en 10X e indicar si observa bacterias Gram+ o
Gram-

Por este lente no se puede observar ni la forma, ni el color ni otras características de las
bacterias presentes porque el objetivo es de baja frecuencia, y las bacterias son demasiados
pequeñas para que se puedan ver.
Fotografía claramente enfocada de observación al microscopio en 100X, e indicar con una
flecha si observa cocos o bacilos, y cuáles son Gram+ y cuáles Gram-.

Este objetivo se utiliza con una pequeña cantidad de aceite de inmersión en el portaobjetos
lo que evita la distorsión de la luz y aclara la imagen. Se pueden observar bacterias bacilos
gram positivas lo que significa que el proceso de tinción de gram las tiñe de purpura. Las
bacterias gram negativas aparecen rosadas después de la tinción de gram.

Conclusiones
Sección B
Por medio de estas columnas de Winogradsky se puede crear pequeñas comunidades
bacterianas, ya sea para estudiarlos o para cultivarlas, además por medio del microscopio se
pueden observar la diversidad microbiana que crece ahí, en mi columna se pudo observar
que los desechos de una especie de bacterias como por ejemplo de las bacterias reductoras
de sulfato permiten el sustrato idóneo que permite crecer a otra especie como las bacterias
rojas y verdes del azufre, por lo que en estas columnas a parte de existir una
interdependencia entre todos los microrganismos allí existentes, ocupan micro espacios de
acuerdo a sus necesidades, mantenido todo el sistema por la energía de la luz.

Sección C

Las trampas de arroz son una manera de conocer qué tipo de microorganismos tenemos y
cual abunda más en el suelo donde se lleve a cabo los montajes, a partir de eso sabremos si
el suelo donde está nuestro cultivo tiene patógenos y microrganismos benéficos. A partir de
estas trampas de arroz y los colores observados se puede presumir los resultados los cuales
son confirmados en un laboratorio para tener mayor certeza de los resultados. Hay que
tener en cuenta que tanto los microrganismos patógenos como benéficos siempre se van a
encontrar en el suelo ya que es su hábitat natural, lo que se debe observar es que las plantas
o el cultivo no esté presentando síntomas a causa de la presencia de estos patógenos.

Sección D

El microscopio ha sido uno de los experimentos más importantes para la ciencia, porque sin
él nunca se hubiera podido estudiar los microrganismos existentes, en esta práctica de
laboratorio virtual se pudo conocer los diferentes objetivos que se utilizan para la
observación de microrganismos y además conocer el proceso de aislamiento de colonias
puras de bacterias, como también la forma de teñirlas para su respectiva identificación,
donde dependiendo del resultado se tomarían las medidas preventivas si las muestras
analizadas dieran presencia de alguna bacteria perjudicial para la vida humana.

Referencias

Referencias
T. Madigan, M., M. Martinko, J., S. Bender , K., H. Buckley , D., & A. Stahl, D. (2015).
Broch Biologia de los Microorganismos . Madrid : Miguel Martín-Romo.

Anexos
¿A qué se deben puntualmente cada uno de los patrones de color observados en la columna
de Wionogradsky?.
La Zona aeróbica esta es la parte de la columna más rica en oxígeno y más pobre en azufre,
es verde con amarillo por lo que ahí se encuentran las algas y las cianobacterias. También
se da el color rojo por las bacterias rojas del azufre y rojas no del azufre, en la parte
anaerobia se da el color negro por las bacterias reductoras del sulfato y el color verde por
las bacterias del azufre.

¿Qué microorganismos identificó en la rizósfera de las plantas donde instaló la trampa de

arroz?, ¿Por qué se usa arroz en la trampa?

Identifiqué varios microorganismos patógenos como el fusarium, rhizoctonia o

phytophthora y microorganismos benéficos como el bacillus y beauveria bassiana. Se usa
arroz porque así se va a simular lo que las bacterias van encontrar en su medio natural, y
como saben el suelo es rico en nutrientes entonces el arroz es una fuente de carbohidrato y
aminoácidos y ellos se van a desarrollar como si estuvieran en su hábitat natural.

Cuando se realiza la tinción de Gram y se observan las placas en el microscopio, ¿por qué
las bacterias Gram positivas se ven moradas y las Gram negativas se ven rosadas?

Porque las tinciones utilizadas reaccionan con componentes de la pared celular de las
bacterias, es decir que en las paredes celulares de las bacterias gram positivas tienen una
capa gruesa de peptidoglicano que se une con la tinción de violeta cristal. las bacterias gram
negativas contienen muy poco peptidoglicano, por lo que la tinción de violeta cristal no se
une de forma segura a sus paredes celulares, es por eso que éstas se tiñen con safranina
después de que el cristal violeta se haya lavado con alcohol, lo que le da el color rosado.