1

ESPECTROSCOPIA INFRARROJA

2
ESPECTROSCOPIA
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA.- Introducción.- Tipos de vibraciones.- Frecuencias
características de grupos funcionales.- Interpretación de espectros.

ESPECTROSCOPIA DE RAMAN.- Introducción.- Principios básicos de la RMN.-

Desplazamiento químico.- Acoplamiento spin-spin.- Constante de acoplamiento.-
Intercambio químico.

3
 Introducción a espectroscopía
VIDEO infrarroja
VIDEO Enlaces como resortes
 Características de las
VIDEO señales-número de onda
VIDEO Espectros de IR para hidrocarburos
 Características de las señales.
VIDEO Intensidad
 Características de las señales.
VIDEO Forma
VIDEO Estiramiento simétrico y asimétrico
 Señales IR para compuestos con
VIDEO carbonilo
VIDEO Práctica de espectroscopía IR
 ESPECTROSCOPIA
INFRARROJA

1. Introducción. El espectro electromagnético

2. Fundamentos de la espectroscopia infrarroja
3. Espectrofotómetros de IR
4. Vibraciones moleculares y tipos de vibraciones
5. Frecuencias características de los grupos funcionales
6. Interpretación de espectros. Ejemplos

13
 1. Introducción
ESPECTROSCOPÍAS Se estudian los cambios producidos en las
moléculas debidos a la absorción de energía
Y ESPECTROMETRÍA

Absorción de una parte

Energía Materia
Transmisión del resto

ESPECTROSCOPÍAS: Radiación electromagnética

ESPECTROMETRÍA: Electrones de alta energía o iones

La luz visible, infrarroja, ultravioleta, las microondas y las ondas de radio son ejemplos de
radiación electromagnética. CARACTERÍSTICAS DE LAS RADIACIONES:
λ = longitud de onda (1μ = 10-6 m = 10-3 mm = 104 Å)
ν = frecuencia (Hertzios, Hz)
c = velocidad de la luz (3 x 108 m/s)
Número de onda:

E = h·ν = h·c/λ
h = constante de Planck (6.62 x 10-34 J.s)

“Técnica de análisis que hace uso de la interacción entre la radiación

ESPECTROSCOPÍA: electromagnética y la materia para estudiar la composición de ésta”
14
 El espectro electromagnético
Conjunto de todas las frecuencias posibles
ENERGY

Las energías en el rango ultravioleta-visible excitan los electrones a niveles de energía

superiores dentro de las moléculas. Las energías infrarrojas provocan las vibraciones
moleculares y las energías de microondas provocan las rotaciones. Las frecuencias de
onda de radio provocan transiciones en el espín nuclear, las que se observan en la
espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear (RMN, tema 8).
15
 El espectro electromagnético

RAYOS GAMMA RAYOS X UV VISIBLE INFRARROJO MICROONDAS ONDAS DE RADIO

LONGITUD
DE ONDA (λ) 10 −13 10 −11 10 −9 10 −7 10 −5 10 −3 10 −2 10 −1 10 0 10 2 10 3 metros (m)

FRECUENCIA (ν) 10 21 10 19 10 17 10 15 10 13 10 11 10 10 10 9 10 8 10 6 10 5 Hertz (Hz)

Transiciones Vibraciones de Movimientos Transiciones de
EFECTO PRODUCIDO electrónicas de átomos dentro del conjunto espín nuclear
EN LA MATERIA
electrones de valencia de las moléculas de la molécula

Espectroscopía Espectroscopía Espectroscopía Espectroscopía

TIPO DE TÉCNICA
de UV-visible de IR de microondas de RMN

Ionizantes No ionizantes
16
 Determinación estructural

TÉCNICA INFORMACIÓN OBTENIDA

ESPECTROSCÓPICA

Estructura total de la molécula incluida la estereoquímica de la

Rayos X misma a partir de las posiciones relativas de los átomos.

Existencia de cromóforos y/o conjugación en la molécula a

Ultravioleta-Visible partir de las absorciones observadas.

Grupos funcionales a partir de las

Infrarrojo
absorciones observadas.
Espectrometría de masas Formula molecular y subestructuras a partir de los iones
observados.
(*)
Grupos funcionales, subestructuras, conectividades,
estereoquímica, etc. a partir de datos de desplazamiento
Resonancia magnética
químico, áreas de los picos y constantes de acoplamiento
nuclear observadas.

17
 Espectro electromagnético

Longitud de onda Tipo de radiación Tipos de transición

Frecuencia (Hz)
1020 - 1024 10-12 - 10-16 m Rayos gamma Nuclear
1017 - 1020 1 nm - 1 pm Rayos X Electrones internos
1015 - 1017 400 - 1 nm Ultravioleta Electrones externos
4.3x1014 - 7.5x1014 700 - 400 nm Visible Electrones externos
1012-1014 2.5 µm - 700 nm Infrarrojo Vibraciones
108 - 1012 1 mm - 2.5 µm Microondas Rotaciones
100 - 108 108 - 1 m Radiofrecuencia Inversión de spin

18
 Absorción Infrarroja.
Todas las moléculas orgánicas absorben la radiación IR.

La espectroscopía IR es uno de los métodos analíticos mas utilizados.

La absorción IR implica transiciones entre niveles de energía

vibracional asociados con el estado electrónico excitado más bajo
de las moléculas.

El número de vibraciones posibles de una molécula se relaciona con

el número de enlaces que contiene y por tanto con el número de
átomos que la conforman.

El número de vibraciones es grande, aún para la molécula más simple,

con distintos niveles de energía.

La absorción IR ocurre no sólo con moléculas orgánicas, sino también

con compuestos inorgánicos sencillos (CO2, CO, H2S, SO2), así como
con distintos tipos de complejos metálicos unidos covalentemente.
 Absorción en el IR

E=h.ν Interacción sólo si: EREM = ΔEMateria

interacción ΔE
Radiación electromagnética
cuantizada MATERIA cuantizada ΔE = h . ν

E2 E2

Intensidad
Absorción
hν E1 E1

E0 E0
ν (ο λ)
ΔE = hν = hc / λ
ΔE = h c ν ΔE ∝ ν
–
ν = 1/λ
–
ν: nº de ondas (se expresa en cm-1)

IR Vibraciones de átomos dentro de las moléculas 20

 3. El espectrofotómetro de IR

La fuente de radiación es un filamento calentado electricamente. Mediante el empleo de

espejos el haz se divide en dos, de manera que uno atraviesa la muestra y otro la referencia.
Después, ambos haces pasan alternativamente (mediante el empleo de un espejo giratorio) por
un monocromador y la diferencia de intensidades es captada por un detector.
21
 El espectro de IR
Un espectro de IR consiste en una representación de la energía emitida por la
molécula (transmitancia) frente a la longitud de onda (λ en μm) ó al nº de
ondas (ν en cm-1).
Una banda de absorción de un espectro se caracteriza por dos parámetros:
- La λ a la que se produce el máximo de absorción
- La intensidad de la absorción o transmitancia a esa λ
Transmitancia ( % )

–
Número de onda (ν)
• SI LAS TRANSICIONES NO SUPONEN CAMBIOS EN EL
MOMENTO DIPOLAR, NO SE OBSERVAN EN EL ESPECTRO. Por
ello, moléculas diatómicas simétricas (ej.: X2) no absorben en el IR.
• Cuanto mayor es el cambio en el momento dipolar, mayor es la 22
absorción.
 Vibración de tensión en moléculas diatómicas

Ley de Hooke

ν= k/μ
k: constante de fuerza
μ: masa reducida

mA x mB
μ=
mA + mB

La frecuencia de
vibración de tensión
depende de la fuerza
Modo de vibración de tensión:
alargamiento y compresión del enlace
de los enlaces y de
(Molécula diatómica) las masas relativas
de los átomos.

23
Relación entre la frecuencia, las masas atómicas
y la fuerza de los enlaces:

24
 Tipos de vibraciones en moléculas poliatómicas, 1
Hay dos tipos de vibración
molecular: tensión (σ) y TENSIÓN FLEXIÓN
flexión (δ) según que un
átomo vibre en la misma En el plano Fuera del plano
dirección del enlace
(tensión) o
perpendicu-larmente a él
(flexión)

SIMÉTRICA
(tijera) (torsión)

ASIMÉTRICA
(balanceo) (aleteo)

25
Tipos de vibraciones en moléculas poliatómicas, 2

Vibración de tensión simétrica

del formaldehído: los dos
enlaces se alargan o acortan
simultáneamente
26
 Vibraciones de tensión

• Anillo aromático (respiración)

Dentro de las vibraciones de tensión es muy característica la del

anillo de benceno, los enlaces del anillo bencénico se acortan o se
alargan todos a la vez, se llama también respiración (breathing):

27
Modos fundamentales de vibración.
Tipos de vibraciones

Vibración de flexión simétrica

del formaldehído en el plano

28
Modos fundamentales de vibración.
Tipos de vibraciones

Vibración de flexión del

formaldehído fuera del
plano
29
 Vibraciones de flexión

• En los compuestos aromáticos también existen vibraciones de flexión,

que son muy características, es un movimiento de H:

30
5. Frecuencias características de los grupos funcionales

31
 Espectros de IR de hidrocarburos: alcanos,
alquenos y alquinos

¿Por qué aumenta el número de onda al pasar de enlace

simple a doble y de éste a triple? El enlace doble es más
fuerte que el simple y el triple más aún. Al aumentar la
fuerza del enlace, aumenta el valor de la constante de
fuerza y por tanto el número de onda aumenta. Cuanto
más fuerte es un enlace, vibra a mayor frecuencia

32
 Espectros de IR de derivados del benceno
Muestran varias frecuencias características:
Tensión de C-H aprox. 3030 cm-1
Tensión de C=C del anillo origina bandas a 1450-1600 cm -1
Derivados monosustituídos del benceno muestran dos absorciones:
a 690-710 cm-1 y 730-770 cm-1
Los derivados disustituídos del benceno muestran las siguientes
absorciones:

33
 Estados vibracionales y energía

Frecuencia de la vibración

k = constante de fuerza del enlace F = -kx

µ = masa reducida, para un sistema diatómico

34
Modos normales de vibración (3N - 5)

cm-1 IR RAMAN

estiramiento
O C O 1340 - +
(sim)

estiramiento
O C O 2349 + -
(asim)

deformación O C O 667 + -

deformación O C O 667 + -

35
 FTIR
Espectrometría IR con Transformada de
Fourier

1. Mejor relación señal/ruido ya

que la luz no debe pasar por un
monocromador.
2. Se miden todas las frecuencias
a la vez lo que da mucha
mayor rapidez
3. Puede tener una resolución de
menos de 0.01 cm-1
4. Los espectros pasan
necesariamente por una
computadora lo que facilita el
análisis y manejo espectral
36
 Espectroscopía infrarroja por
VIDEO transformada de Fourier FTIR

Chapter 14 37
Alcanos y Alquenos

38
Alquinos

39
 Alcoholes

n-butanol

40
 Aminas

Dipropilamina

41
 Compuestos carbonílicos

No conjugados

Conjugados

42
Compuestos carbonílicos

43
 Ácidos carboxílicos

Ácido hexanoico

44
 Nitrilos

Butironitrilo

45
 Ésteres
Butanoato de etilo

46
 Amidas
N,N-dimetilpropanamida

47
Ejemplo 1

48
Ejemplo 2

49
Ejemplo 3

50
Ejemplo 4

51
Ejemplo 5

52
Ejemplo 6

sp2 C-H sp2 C-H

aldehido δsp2 C-H
sp3 C-H
fuera del
plano

ν O-H The gap in the spectrum

between 700 & 800 cm-1 is due
to solvent (CCl4) absorption
ν C=O

ν C=C

ν C-O y =C-O-C

53
ESPECTROSCOPIA RAMAN
 Biomateriales Espectroscopia
VIDEO Raman
 Técnicas: Raman
Dispersión inelástica de fotones

estados electrónicos virtuales

Sir Chandrasekhara Venkata Raman,

(ச திரேசகர ெவ கடராம )
Tiruchirapalli, Tamil Nadu -7/11/1888
Bangalore, Karnataka - 21/11/1970

Premio Nobel de Física 1930

56
El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una
molécula e interactúa con la nube de electrones de los
átomos de esa molécula. El fotón incidente excita uno de los
electrones a un estado virtual. La molécula se excita desde el
estado basal a un estado de energía virtual, y se relaja a un
estado vibracional excitado, lo que genera la dispersión de
Raman Stokes. Si la molécula ya se encontraba en un
estado elevado de energía vibracional, la dispersión Raman
se llama entonces dispersión Raman anti-Stokes.

57
Para que la molécula exhiba el efecto Raman es necesario un
desplazamiento en la polarizabilidad molecular, o cantidad de
deformación de la nube de electrones con respecto a la
coordenada vibracional. La cantidad del desplazamiento de
polarizabilidad determinará la intensidad de la dispersión
Raman, siempre que el desplazamiento Raman sea igual al
nivel vibracional que está involucrado.

58
 muestra
Láser, luz monocromática

Regla de selección:
Para que la vibración sea
Monocromador,
activa en Raman debe
provocar un cambio en la espectrógrafo
polarizabilidad de la
molécula.

Ventajas de Raman con respecto a IR

1. Se mide en el visible o el UV donde los detectores son mucho
más sensibles
2. El agua produce una dispersión Raman muy débil
3. La resonancia Raman permite sondear grupos asociados a
cromóforos con una sensibilidad 102- 104 veces mayor
59
N N

60
61
62
 Resonancia Raman

estado electrónico excitado

estado energético virtual

Resonancia
Raman Raman

estado electrónico basal

La resonancia Raman es más intensa que la dispersión Raman,

pero necesita que exista un cromóforo y sólo se intensifican las
bandas debidas al cromóforo
63
λ = 406.7 nm

Das, T. K., S. Mazumdar and S. Mitra (1998).

64 Eur
J Biochem 254(3): 662-70
 [hemo] = 0.34 mM
[SO42-] = 400 mM
SO42-

Spiro, T. C. and Strekas, T. G.

(1973) JACS 96: 338

65
Uso de isótopos

Unión de óxido nítrico a

superóxido reductasa de
Pyrococcus furiosus

λ = 476 nm

66
Espectro IR de BSA sólida (azul) y espectro Raman de BSA en
solución en amortiguador de fosfato (rojo).

67
VIDEO Microscopía Raman e Infrarroja
 Infrarrojo y Raman

⧫ El fenómeno de ⧫ Se mide en el visible o

absorción es más intenso UV donde los detectores
por lo que se requieren son mucho más sensibles
muestras menores ⧫ El agua produce una
⧫ El equipamiento es más dispersión Raman muy
sencillo y de uso más débil
flexible ⧫ El Raman resonante
⧫ No presenta permite sondear grupos
interferencias con otros asociados a cromóforos
fenómenos físicos (p. ej. con una sensibilidad
fluorescencia) varios órdenes de
magnitud mayor

69
 Espectroscopias ópticas
Son versátiles para
medición y monitoreo de
muestras biológicas.

Es posible obtener
información
bioquímica y No son invasivas
estructural de la ni destructivas.
muestra.
 stokes Estiramiento
twisting simétrico

Láser λ Estiramiento
asimétrico scissoring

Anti-stokes
Físico Indú rocking wagging
Chandrasekhara Figura 1. Dispersión Rayleigh y Raman Figura 2. Modos diferentes de vibración
Raman de una molécula tri-atómica
Nobel 1930
Raman
Raman Anti-stokes
stokes Rayleigh Figura 3.
Descripción del
estado virtual del
esparcimiento
Raman
Espectrómetro
Di-Cloroaceptofenona
Raman

IR

Raman
Fuente de luz
monocromática
 Espectrómetro para Micro-Raman

Raman Portatil Detector Raman

Laser rojo 785nm a 300mW Laser verde 532nm
 Notch Filters

Láser rojo 632nm He-Ne 30mW

Diodo Láser azul 473nm 100mW Diodo Láser Verde 532nm 50mW
Espectroscopia Raman “Amplificada” para la detección, caracterización y
análisis de aminoácidos y Proteínas

Volumen reducido y bajas

concentraciones
Raman convencional

⚫ P. C. Painter and L. Koenig, “Raman spectroscopy study of the structure of antibodies,” Biopolymers 14, 457-468 (1975).
⚫ J. Duarte, M. T. T. Pacheco, R. Z. Machado, L. Silveira Jr, R. A. Zangaro and A. B. Villaverde, “Use of near-infrared Raman spectroscopy to detect IgG and IgM
antibodies against Toxoplasma gondii in serum samples of domestic cats,” Cell. Mol. Biol. 48 (5), 585-589 (2002).
 Amplificación Raman (SERS)

Espectroscopia Raman Amplificada por Superficie (SERS, por sus siglas en inglés).
donde el analito es puesto sobre la superficie de una nano-particula metálica, amplificando
las señales en 10^4 –10^8 y en algunos casos a 10^15.

anilina

mercapt

*J. De Gelder, K. De Gussem, P. Vandenabeele, L. Moens, "Reference database of Raman spectra of biological molecules," Journal of Raman Spectroscopy 38 (9), 1133-1147
(2007).
 Amplificación Raman (SERS)
⧫ Trabajar con analitos diluidos en solución acuosa proporciona señal Raman
muy débil o nula.

* Espectros Raman y SERS de Piridina, cafeína, ácido Acetíl-salicílico y Aspártico

•Laboratorio de Materiales y Sensores, Centro de Ciencias Aplicadas y Desarrollo Tecnológico - UNAM, México - D.F. “Variations in Optical Properties of Silver Nanoparticles. Application in Surface
Enhanced Raman Spectroscopy” by Dres . Roberto Sato, Rocío Redón, América Vázquez, Ocotlán Flores, Rodolfo Zanella and José Saniger.
 SERS: para aminoácidos y proteínas

Aminoácidos: se establece por la presencia de un carbono central alfa unido a: un grupo

carboxilo (COOH), un grupo amino (H2N), un hidrógeno y la cadena lateral (R):

*G. J. Thomas Jr. and D. A. Agard, “Quantitative analysis of nucleic acids, proteins, and viruses by Raman and deconvolution,” Biophysical Journal. 46, 763-768 (1
*A. Torreggiani and G. Fini, “Raman spectroscopic studies of ligand-protein interactions: the binding of biotin analogues by avidin,” J. Raman Spectrosc. 29(3), 229-236 (19
 SERS: para aminoácidos y proteínas

Proteínas : Antígeno Prostático (PSA)

Serina

Isoleucina

Las proteínas: son macromoléculas formadas por La complejidad de una proteína puede ser analizada mediante
cadenas lineales de aminoácidos. la espectroscopia Raman: Estructura, enlaces, forma, etc.
http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do
 SERS : Resultado con Piridina

* Bandas típicas de la piridina

La banda a 234 cm-1 1006 y 1035 cm-1
se asigna a la
vibración Ag-Cl.
*

Espectro Raman y SERS de la piridina diluida a 2000PPM

*Journal of Raman Spectroscopy Published online inWiley Interscience: 20 October 2008 "Silver nanoparticles synthesized by direct" by Dr. Roberto Sato-Berrú
 Raman: Serina

Propiedades de la Serina:
Fórmula molecular: C3H7NO3
Masa molar: 105.09 g mol−1

*
* The Chemical Educator, Vol. 13, No. 2, Published on Web 2/25/2007, 10.1333/s00897082113a, © 2008 The Chemical Educator by Debra Jhonson
 Coloides: Evaluación
Las nano-partículas son caracterizadas, mediante el plasmon de absorción uv vis, el
cual es característico al metal y su forma.

Plasmón mediante
absorción uv-vis del coloide
de Ag, de tamaño promedio
de 40nm
 Coloides: Evaluación
Tamaño y forma de las nanopartículas
Nano-sizer: Tamaño

Microscopio electrónico de transmisión

(TEM): Forma y tamaño