Sesión 02. Espectroscopía UV-VIS Componentes Ópticos 2024-A

ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERÍA PESQUERA
ESPECTROSCOPÍA UV – VIS
COMPONENTES ÓPTICOS
CURSO : ANÁLISIS DE PRODUCTOS PESQUEROS POR

INSTRUMENTACIÓN
DOCENTE : Ing. Mg. RICARDO RODRIGUEZ VILCHEZ
SEMESTRE ACADÉMICO
Abril del 2024 2024 A
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS

2
Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

MÉTODOS ÓPTICOS
Se define Métodos Ópticos de análisis aquellos, que miden la

radiación electromagnética que emana de la materia o que
interacciona con ella. Se incluyen, todos los campos del
espectro electro - magnético desde los rayos gamma a las ondas
de radio.
MÉTODOS ÓPTICOS ESPECTROSCÓPICOS
Basados en la medida de la Intensidad y la Longitud de onda de

la energía radiante.
La característica común a todos los métodos espectroscópicos
es que se miden espectros y además, que estos espectros son
debidos a transiciones entre estados de energía característicos.

MÉTODOS ÓPTICOS NO ESPECTROSCÓPICOS
No miden espectros, ni están relacionados con las transiciones

entre estados de energía característicos, se basan en una
interacción entre la radiación electromagnética y la materia que
produce como resultado un cambio en la dirección o en las
propiedades físicas de la radiación electromagnética.
Ejemplo: La refracción, difracción y polarización.
ESPECTROFOMETRÍA DE ABSORCIÓN
MOLECULAR UV-VIS
Einstein: La radiación electromagnética está constituida por

partículas discretas llamadas “ FOTONES” que tienen energías
definidas y se desplazan en el espacio con la velocidad de la luz.
El uso de la dualidad partícula-onda para la explicación del
funcionamiento del electrón como naturaleza de la radiación
electromagnética.

La energía radiante se produce o se absorbe siempre en múltiplos
de una unidad denominada “CUANTO”.
Para la producción de radiación un átomo a una molécula debe
perder energía y recíprocamente cuando se absorbe la reacción un
átomo a una molécula gana energía. E =
ergios (erg)
𝑐
𝐸 = ℎ𝑣 = ℎ  = ciclos / seg
𝜆
h = Planck: 6.6256x10-27 erg/seg.
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ONDA ELECTROMAGNÉTICA
Longitud de onda (). Distancia en línea recta a lo largo de la línea

de propagación entre dos puntos que están en dos ondas
adyacentes.
Å=0.1 m=104=107mm=10-8cm=10-10m.

Frecuencia(). Número de oscilaciones por segundo, descritas por
una onda.
Hertz = ciclo/seg  = c/ c = velocidad de la luz en el vacío
2.9979 x1010 cm/seg.
ഥ ). Número de ondas por centímetro.
Número de Onda (𝑽
Unidad: cm-1 𝑣ҧ = 1/𝜆
COLOR - COLORIMETRÍA
Color. Respuesta a una serie de estímulos combinados.

Físicos, químicos, biológicos. De ciertas partes de la retina del
ojo para la energía radiante de determinadas longitudes de onda.
Colorimetría. Para designar la medida de la fracción de “LUZ
BLANCA”, de una lámpara incandescente que pasa a través de un
medio líquido o disolución.
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10

Ejemplo 1:
Fe+3 + KSCN ⟶ FeSCN+2 Color rojo (en disolución)
 = 480 nm Absorbe onda corta (azul)
Transmite onda larga (rojo)
Ejemplo 2:
Disolución de Cu(NH3)4++ es azul.  = 650 nm
Absorbe ondas largas (rojo)
Transmite ondas cortas (azul)
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Ejemplo 3:
Disolución de KMnO4 es púrpura.
Absorbe ondas intermedias (verde, amarillo)
Transmite ondas cortas (azul) 𝜆 = 525 𝑛𝑚
Transmite ondas largas (rojo)
El color aparente de la solución es siempre el complemento del
color absorbido.
Es posible determinar una sustancia que sea incolora o muy poco
coloreada, al agregar un reactivo que lo convierta en un compuesto
intensamente coloreado.
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EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
La radiación electromagnética, puede considerarse como una forma

de energía radiante que se propaga como una onda transversal.
Vibra perpendicularmente con respecto a la dirección de
propagación y esto imparte un movimiento ondulatorio a la
radiación.
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1022Hz Frecuencia 103 Hz
Micro ondas
Visible 400 – 800 nm
Rayos  Rayos X UV IR Radio

(radar)
Rayos  Longitud de Onda
(gamma)
c 1 pm
Rayos X Ultravioleta Infrarrojo Microondas Ondas de
1 pm – 10 10 – 400 nm 0.8  - 1 nm 0.1 – 50 cm. radio
nm > 50 cm.
Amarillo
UV Violeta Azul Verde Anaranjado Rojo IR
400 500 600 700 nm

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ABSORCIÓN DE LA RADIACIÓN
Para comprender cualitativamente la absorción de la radiación se

considerará la absorción en la región visible. Los objetos “se ven”
porque transmiten o reflejan sólo una porción de luz de esta región.
Una luz policroma(luz blanca),que contiene todo el espectro de
longitudes de onda de la región visible, se hace pasar a través de un
objeto, el objeto absorbe algunas longitudes de onda y transmite las
longitudes que no absorbe.
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Estas longitudes de onda residuales que se transmiten se ven como

color. El color será complementario de los colores absorbidos.
COLORES DE LAS REGIONES DE LONG. ONDA
Long Color Color
Absorbida(nm) Absorbido Complementario
380-450 Violeta Amarillo verdoso
450-495 Azul Amarillo
495-570 Verde Violeta
570-590 Amarillo Azul
590-620 Naranja Verde-azulado
620-750 Rojo Azul-verdoso
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TRANSMISIÓN - EXTINCIÓN
Soluto + Solvente
Refracción
P0 Haz
P Haz
Incidente transmitido
Dispersión
P0 haz de radiación de potencia, incide en el bloque perpendicular a la

superficie, después de atravesar un trecho b del material. Su potencia se
reduce a P por absorción.
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17
P0 P
dx
b
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18

dP= Potencia absorbida en el nivel P
𝑑𝑃 dn = número de moléculas absorbentes
= 𝜅𝑝
𝑑𝑛
 = constante de proporcionalidad
𝑝 𝑁
𝑑𝑝 Signo (-) Debido a que el poder radiante
න = 𝜅 න 𝑑𝑁
𝑝
𝑃0 0 decrece a medida que la cantidad de
radiación absorbida aumenta.
𝑃 N = número de moléculas absorbentes
𝐼𝑛 = = −𝜅𝑁
𝑃0
donde la potencia se reduce a P.
P0 = Potencia radiante que entra en la celda.
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19
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S = rayo transversal en cm2.

𝑃 Ns = número de partículas efectivas que absorben
𝐼𝑛 = = −𝜅𝑁𝑆
𝑃0 la radiación.
Ns = b = c = Proyecto de la concentración (c) y
𝑃
𝐼𝑛 = 𝜅′′𝑏𝐶 longitud de trayectoria (b)
𝑃0
’’ = unidades de masa por unidad de área
𝑃0
log = 𝐴 = 𝑎𝑏𝑐 transversal. Reemplazando ’’ por la
𝑃
constante a, que incluye el factor de
𝑃0 conversión de los logaritmos naturales.
log = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝑃 𝑷𝟎
Se ha invertido para eliminar el signo (-)
𝑷
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LEY DE LAMBERT (1760)
Establece que para un haz paralelo de radiación monocromática
penetra en un medio absorbente al plano paralelo A la superficie de
medio disminuye la intensidad del haz luminoso que penetra en la
𝐼0
capa en una fracción constante. log = 𝜅𝑏
𝐼
 constante que depende  longitud de onda
Naturaleza del medio
Tipo de molécula
Espesor de la celda que contiene la
sustancia absorbente.
21
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LEY DE BEER (1852)

Establece que la intensidad de un haz de radiación monocromática
paralela disminuye exponencialmente a medida que la
𝐼0
concentración del material absorbente aumenta. log 𝐼
= 𝜅𝐶
𝐼0
log = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝐼
𝐼𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
Lambert – Beer 𝐴 = log 𝐼 I0 igual para ambos casos.
𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝐼𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝐴 = log 𝐼 = 𝑎𝑠 𝑏𝐶
𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝐴𝑠
𝑎𝑠 = 𝑏𝐶(𝑔𝑟/𝑙𝑡) (𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑)
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as = Índice de absorbancia
As = Absorbancia de la solución
b = Espesor de la celda, cm.
C = Concentración
𝐴𝑠
𝜀= (𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑐𝑖ó𝑛𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟)
𝑏𝐶(𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠/𝑙𝑡)
𝐼0
log10 = = 𝜀𝑏𝐶 → 𝐴 = 𝜀𝑏𝐶
𝐼
A = abC T = 10-abC
= axM A = lt/grcm
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Absorbancia (A): log en base 10el poder de radiación que incide

del recíproco de la transmitanciasobre la muestra.
𝑃
(T) en el que el disolvente puro es 𝑇=
𝑃0
−𝑎𝑏𝐶
el material de referencia. 𝑇= 10
A = bC
𝐴= log10 1Τ𝑇 = − log10 𝑇 𝐴 = − log% 𝑇
Transmitancia (T): Relación A = abC
𝑃
%𝑇 = 𝑃 𝑥100
entre el poder de radiación 0
transmitido por la muestra (P) y
24
24

Absortividad (a): Constante que depende de la longitud de onda
de la radiación y es característica para una combinación (soluto –
solvente) sus unidades dependen de b y C.
b = cm C = gr/lt a = lt/gr cm
Absortividad molar (): Absortividad cuando la concentración se
expresa en moles/lt y el paso de luz 1 cm
 =lt/mol cm
(1760) Lambert:P = P0x10-k’b . . . . . . . . . . (1)
(1852) Beer: P = P0x10-’’C . . . . . . . . (2)
25
25
Lambert – Beer:
P = P0x10-abC ......... (3)
b = Trayecto óptico
P0 = Flujo luminoso inicial
El proyecto de la absortividad y el peso molecular de una sustancia
se denomina Absortividad molar () usada para comparar
cuantitativamente la absorción de varias sustancias de peso
molecular conocido.
 = axPM
A = bC ó A = abC
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ULTRAVIOLETA Y VISIBLE
Regiones UV-VIS del espectro y tipos de bandas de absorción más
frecuentes.
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UV lejano (10 – 200 nm)

UV. Próximo (200 – 400 nm)
Llamado UV de vacío, porque el oxígeno absorbe por debajo de 200
nm y es preciso eliminarlo (pasando nitrógeno).
Para interpretar y comprender los espectros electrónicos es
necesario tener en cuenta que tipo de transiciones electrónicas
puede tener lugar cuando se absorbe radiación UV o VIS.
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En esta región se pueden dar bandas de absorción (sin tener en
cuenta los espectros de resonancia de carga y resonancia
electrónica de los iones y radicales orgánicos inestables) que se
deben a las transiciones electrónicas:
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* antienlazante
 →* * antienlazante
ENERGÍA
→ * n → * n no enlazante
 enlazante
 enlazante
30
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Los valores  para las transiciones están en orden:
n→* <  →* n → * < <  → *
Banda de Absorción  → * y n → *
Es conveniente tratar simultáneamente las transiciones →* y las
n → * ya que muchos grupos poseen electrones n y  y ambos
pueden contribuir al espectro UV-VIS.
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Todos los enlaces múltiples C = C, C  C, C=N poseen electrones  y

todos los átomos que están situados a la derecha del carbono en la
Tabla Periódica como Nitrógeno, Oxígeno, Azufre y halógenos,
poseen electrones .
En las moléculas los electrones de valencia que no forman parte de
enlaces químicos se conocen como electrones NO ENLAZANTES
(No compartidos) o “”. Presenta absorciones →* y  → * el
grupo carbonilo.
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*
C O
C O
*
C O
* = Electrones excitados
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Máximos de Absorción de ∥ത⟶∥෨ ∗ y 𝓷 ⟶∥෨ ∗ para grupos

funcionales
Grupo Transición, nm
Funcional ത
∥⟶ ∥෨ ∗  ⟶∥෨ ∗
C =C 170 No Absorbe
C C 170 No Absorbe
C =O 166 280
C =N 190 300
N =N 340
C =S 500
N =O 665
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La tabla indica las longitudes de onda correspondientes al máximo
de absorción, max, para las transiciones ∥ത⟶∥෨∗ * y  ⟶∥෨ ∗ de varios
grupos funcionales.
Destacamos que max es independiente de la naturaleza de los
átomos que intervienen en el enlace múltiple para las transiciones
∥ത − ⟶∥෨ ∗; está influida por ella en el caso de las transiciones ⟶∥෨ ∗ .
Esto se explica teniendo en cuenta que mientras que los electrones
 están localizados y son independientes de los átomos que forman
el enlace.
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los electrones  están cada uno asociado a su átomo y un aumento

en la electronegatividad de éste implica que los electrones no
compartidos (o electrones 𝑛 sean atraídos por el primer átomo lo
que supone un desplazamiento de max, hacia longitudes de onda
más cortas observándose al comparar las longitudes de onda de
absorción de los grupos C = S, C = n y C = 0.
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Estos datos son aproximados, ya que los sustituyentes influyen en
la longitud de onda en las transiciones →* y especialmente en la
de las n → * .
Ejemplo:
max para transiciones →* del CH3COCH3 es 272 nm mientras
que para el CH3CHO es 294 nm.
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Sistema con electrones 

Poseen enlaces dobles y sencillos de forma alternada.
Ejemplo, - C = C – C = C ó -C=C–C=0
La conjugación produce un desplazamiento, de las transiciones  →
*, hacia longitudes de onda más largas y un aumento de
intensidad, que es función del grado de la conjugación.
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Máximos de Absorción y Absortividades Molares para
transiciones ∥෨ ⟶∥෨ ∗ Enlaces Carbono Carbono
Estructura max, nm 
–CC– 170 16 000
–CC–C=C– 220 21 000
–C=C–C=C–C=C– 260 35 000
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Máximos de Absorción
Para transiciones ∥⟶∥ y ⟶∥෨ ∗ en algunas moléculas que contienen
෨ ෨ ∗
oxígeno
Transición, nm
∥෨ ⟶∥
෨∗
Estructura  ⟶∥෨ ∗
(Absorción
(Absorción Débil)
Intensa)
-C=0 166 280
–C=C–C=O 240 320
–C =C–C=C–C=O 270 350
O= =O 245 435
𝓅-benzoquinona
40
40

Las tablas muestran que la conjugación desplaza la banda intensa
correspondiente a la Transición →* para el estudio de sistema
aromáticos y conjugados.
La 𝓅-benzoquinona en la banda de absorción →* entra en la
zona correspondiente al azul del espectro visible, para entra en la
zona correspondiente al azul del espectro visible, 435 nm. Los
compuestos orgánicos coloreados poseen siempre una conjugación
considerable.
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CROMÓFOROS
Grupo de átomos responsables de bandas de absorción en las

regiones UV o VIS.
Los sistemas con electrones  son cromóforos en las regiones UV-
VIS.
Los sistemas con electrones  son cromóforos en la región UV
lejano (de vacío) Grupos absorbentes dentro de una molécula.
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Grupos auxócromos comunes:
Hidróxilo, amino, sulfhídrico, halógenos.
Todos estos grupos poseen electrones no enlazantes y su efecto se
atribuye a transiciones n→*
Efecto auxocrómico en la molécula de benceno:
El anillo bencénico es un grupo cromóforo con max a 255 nm y
=230 (→*) y la sustitución de uno de sus hidrógenos por un
grupo –OH da lugar a una banda con max a 270 nm y =1450.
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AUXÓCROMOS
Grupos saturados que, cuando se unen a grupos cromóforos,
desplazan su banda de absorción hacia longitudes de onda
mayores y aumenta la intensidad del pico.
Efecto batocrómico – desplazamiento hacia el rojo:
Desplazamiento del máximo de absorción hacia longitudes de
ondas mayores. Los espectros de los iones y radicales libres
(efecto batocrómico) con relación a los de sus correspondientes
moléculas no disociadas y neutras.
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Por ello es frecuente que iones o radicales cuyas moléculas neutras
(no disociadas) sean incoloras, presenten coloración.
Efecto Hipsocrómico – Desplazamiento hacia el azul:
Desplazamiento hacia longitudes de onda más cortas.
Efecto hipercrómico. Es el aumento en la intensidad de la
absorción.
Efecto hipocrómico. Es una disminución en la intensidad de la
absorción.
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Comportamiento individual de los cromóforos:

Los cromóforos  pueden unirse en una molécula de tres formas:
1. Si dos cromóforos A y B están unidos directamente, el espectro
no; normalmente es distinto que los espectros de A y B, ya que A
– B debe considerarse como un nuevo cromóforo.
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Ejemplo:
Grupo etileno (C = C) max cerca de 170 nm,  = 1000
Grupo aleno (C=C=C) max cerca de 225 nm,  = 500
Si los dos cromóforos están conjugados, separados por un enlace
sencillo, cada cromóforo tiende a mantener su individualidad.
Si los dos cromóforos están separados por más de un enlace
sencillo, los electrones  se dice que están aislados y el espectro
es prácticamente la suma de los de A y B.
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Banda de Absorción  →*

Los electrones sigma son los electrones enlazantes de los enlaces
sencillos y las transiciones →* se producen a causa de absorción
del UV Lejano.
Banda de absorción n → *
Un sustituyente con pares de electrones no compartidos introduce
la posibilidad de transiciones n → *
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Los efectos más comunes son compuestos saturados que contienen
heteroátomos tales como azufre, nitrógeno, bromo o yodo
(Absorben la longitud de onda de 200 nm) y compuestos con
oxígeno o cloro (que absorben a longitudes de ondas más cortas.
Un aumento en la electronegatividad del heteroátomo produce un
desplazamiento del máximo de absorción hacia longitudes de onda
más cortas, debido a la mayor energía de unión de los electrones en
estado fundamental.
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El hecho de que la mayoría de los compuestos saturados que

contienen oxígeno, absorban por debajo de 200 nm permite utilizar,
compuestos como agua, alcoholes y éteres como disolventes en la
zona del UV próximo.
Los análisis de absorción ultravioleta son bastantes sensibles y es
posible detectar sustancias a concentraciones tan bajas como 1
ppm.
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50

Longitudes de Onda e Intensidades para Transiciones 𝛈 ⟶ 𝝈 ∗
Moléculas saturadas que posee heteroátomos
Heteroátomos Compuesto max, nm max
– Cl CH3Cl 173 200
/
–O CH3OH 184 150
– Br CH3Br 204 200

 – Prr 208 320
CH3I 259 365
–I CH3I2 292 1320
CHI3 349 230
–N
/ CH3NH 215 600
\ (CH3)3N 227 820
/ (CH3)2S 210 1020
–S Et2S 215 1600
– S – S – acíclico C2H5S5C2H5 202 2100
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EN RESUMEN
La espectroscopia molecular de absorción UV. Es muy útil en la

identificación de moléculas que contengan enlaces  o electrones n,
tales como olefinas conjugadas, compuestos orgánicos aromáticos y
muchos productos naturales, animales y vegetales. El método es
sensible y los resultados reproducibles, pero su aplicación al
análisis cualitativo es muy limitada.
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APLICACIONES DE LA ESPECTROSCOPÍA
UV
Son determinaciones de:

1. Compuestos aromáticos polinucleares de carácter cancerígeno.
2. Productos naturales, como esteroides o clorofila.
3. Vitaminas .
4. Diferenciar estructuras tales como la aromática, quinónica.
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5. Constituyente de diversas partes de las plantas (polen, raíces).

6. Tejidos animales y otras partes del cuerpo.
7. En agricultura: determinación de pesticidas en plantas, ríos y
animales que comen y beben sustancias contaminadas.
8. Todos los productos como drogas y barbitúricos comunes.
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DESVIACIÓN DE LA LEY DE BEER - LAMBERT
1. La absorbancia varía en forma no lineal respecto a la

concentración.
2. Se requiere de una curva de calibración trazada con valores de
muestras de concentración conocida.
3. La concentración de las especies absorbentes es tan alta
haciendo que el índice de refracción de la radiación absorbida
varíe.
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4. Concentraciones requeridas para que se cumpla la ley de B-L,

indica que deberán ser inferiores a 10-2 M.
5. Controlar su temperatura, pH (OH-, H3O+).
6. Las absorbancias de dos o más sustancias de una misma
solución son aditivas, siempre que no haya reacción entre ellas o
interacciones.
7. Se puede cuantificar 2 o más sustancias en mezcla siempre que
ninguna de ellas absorba a la longitud () de máxima absorción
de la otra apreciablemente.
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8. Cuando cada uno de los dos solutos absorbe apreciablemente a
 (long. de onda) de absorción máxima del otro, es posible
plantear dos ecuaciones simultaneas y resolver la concentración
de cada sustancia, puesto que las absorbancias son aditivas.
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57
𝐴𝜆1 = 𝐴𝐼𝜆1 + 𝐴𝐼𝐼

𝜆1
= 𝜀𝐼𝜆1 𝑏𝐶𝐼 + 𝜀𝐼𝐼𝜆1 𝑏𝐶𝐼𝐼 . . . (1)
𝐴𝜆2 = 𝐴𝐼𝜆2 + 𝐴𝐼𝐼
𝜆2
= 𝜀𝐼𝜆2 𝑏𝐶𝐼 + 𝜀𝐼𝐼𝜆2 𝑏𝐶𝐼𝐼 . . . (2)
Donde:
A1 y A2 Absorbancias de la mezcla a longitud de onda 1 y 2.
AI1 y AI2 Absorbancias del componente I en la mezcla, a 1 y 2
AII1 y AII2 Absorbancias del componente II en la mezcla, a 1 y 2
𝜀𝐼𝜆1 , 𝜀𝐼𝜆2 , 𝜀𝐼𝐼𝜆1 , 𝜀𝐼𝜆1 , 𝜀𝐼𝐼𝜆2 Absorción Molar de los componentes I y II a 1 y 2
CI y CII Concentraciones respectivas de los componentes I y II en la
mezcla.
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COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS
ÓPTICOS
1. Fuente estable de energía radiante.
2. Recipiente transparente para contener la muestra.
3. Selector de longitud de onda.
4. Detector de radiación.
5. Tratamiento y lectura de la señal.(Ej.)
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COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO
Fuentes de radiación
1. Haz de radiación con potencia suficiente en el rango de
longitud de onda de interés
2. Estable
Tipos:
• Fuentes continuas. Emiten radiación cuya intensidad varia
sólo de forma gradual en función de la longitud de onda.
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• Fuentes de líneas. Emiten un número limitado de bandas

de radiación, con un intervalo muy reducido de longitud de
onda.
• Láser (Light amplification by stimulated emission of
radiation). Haces de radiación estrechos y muy intenso,
altamente monocromático y muy coherente.
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FUENTES DE RADIACIÓN
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FUENTES CONTINUAS
Producen un amplio intervalo de longitudes de onda.

Sólido incandescente (Globar, hilo de nicromio) (1-40 μm).
Lámpara de tungsteno (300 - 3000 nm).
Lámpara de cuarzo de tungsteno y halógenos (QTH) (200-3000
nm).
▪Alta temperatura (3500 K).
Lámpara de deuterio D2 o lámpara- arco de Hg/Xe – (160-400
nm).
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FUENTES DE LÍNEAS
Producen un número limitado de longitudes de onda.

Lámpara de cátodo hueco:
▪Cátodo bombardeado con electrones.
▪Salto (sputtering) de átomos desde el cátodo.
▪Emisión de r.em. a partir de los átomos excitado del cátodo.
Lámpara de descarga sin electrodos.
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65
SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA
Filtros:
Interferencia
➢(UV, Vis, IR)
Absorción (Vis)
➢Absorben ciertas porciones del espectro mediante el uso
de vidrios coloreados o colorantes suspendidos en gelatina
inmovilizada entre platos de vidrio.
Monocromadores.
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66

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67
67
MONOCROMADORES
En muchos métodos espectroscópicos, es necesario o deseable

poder variar, de forme continua y en un amplio intervalo, la
longitud de onda de la radiación.
Varían la longitud de onda de la radiación en un amplio rango
mediante un proceso denominado scan o barrido.
Tipos:
Rejilla
Prisma
68
68

MONOCROMADOR DE RED DE CZERNEY-TUNER
69
69
MONOCROMADOR DE PRISMA DE BUNSEN
70
70

TRANSDUCTORES
Convierten la energía radiante en una señal eléctrica.

Características:
Alta sensibilidad
Alta razón señal/ruido.
Respuesta constante en un rango amplio de longitudes de onda
Señal directamente proporcional a la potencia de radiación en
ausencia de radiación la señal debe ser cero (darck current).
71
71
Los transductores más utilizados para las regiones UV/Vis son:

Celda fotovoltaica
Fototubo
Fotomultiplicador
Fotodiodo ( serie de fotodiodos)
72
72

CELDA FOTOVOLTAICA
73
73
73
FOTOTUBO
74
74
74

FOTO DIODO
75
75
75
DISPOSITIVO DE ACOPLAMIENTO DE CARGA

(CCD)
76
76
76

TIPOS DE INSTRUMENTOS ÓPTICOS
1. Espectroscopio: Instrumento óptico utilizado para la identificación visual
de las líneas de emisión.
2. Colorímetro: Instrumento para la medida de absorción en la que el ojo
humano sirve como detector usando uno o más estándares de comparación
de color.
3. Fotómetro: Instrumento para medidas de absorción (UV, VIS, IR)
Fluorímetro ( medidas de fluorescencia).
4. Espectrómetro: Instrumento que provee información sobre la intensidad
de radiación como función de la longitud de onda o frecuencia.
77
77
Ejemplos
Espectroscopia Infrarroja
Espectroscopia de
Fluorescencia Molecular
78
78
78

ESPECTROMETRÍA ATÓMICA DE RAYOS X
Al igual que la espectroscopia óptica, se basa en la medida de la

emisión, absorción, dispersión, fluorescencia y difracción de la
radiación electromagnética.
Los métodos de fluorescencia y de absorción de rayos X son
muy utilizados para la determinación cualitativa y cuantitativa
de todos los elementos de la tabla periódica con números
atómicos superiores al del sodio.
79
79
RAYOS X
Rayos X: radiación electromagnética de longitud de onda corta

producida por el frenado de electrones de elevada energía o
por transiciones de electrones que se encuentran en los
orbitales internos de los átomos.
80
80

PRODUCCIÓN DE RAYOS X
Si un electrón interior es expulsado, el hueco que se produce

puede ser ocupado por otro electrón más externo.
La diferencia de energía se pone de manifiesto como una
radiación X.
Esta diferencia se relaciona con el tipo de átomo, por lo que se
relaciona siempre con el número atómico Z .
81
81
VENTAJAS
1. Espectros sencillos.
2. Método no destructivo.
3. Análisis desde partículas a grandes objetos.
4. Velocidad.
5. Exactitud y precisión.
82
82

DESVENTAJAS
1. Sensibilidad inferior que los métodos ópticos (0.01 a 100%)

2. No adecuado para elementos ligeros
3. Costos elevados
83
83
ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA
84
84
84

DROGAS Y NARCÓTICOS COMUNES
Clasificación
Barbituratos Anfetaminas Alcaloides Alucinógenos
• Amobarbital (Dexamil) • Metanfetamina · HCl • Metadona • Marihuana
• Barbital (Dexosin) • Cocaína • Dietilamina del ácido
• Butabarbital • Sulfato de anfetamina • Morfina lisérgico (LSD)
• Fenobarbital (Bencedrina) • Quinina • Mescalina
• Pentobarbital (Nembutal) • Sulfato de • Codeína
• Secobarbital (Seconal) dextroanfetamina • Procaina
• Metripilon (Noludar) (Dexedrina) • Heroína
• Difenilhidantína (Dilatina) • Fenacetina
• Glutetimida (Doriden) (Empirina)
85
85
BARBITURATOS
Se conocen como “depresores” y actúan como sedantes,

constituyen el compuesto de las pastillas para dormir de uso
común.
El compuesto del cual proceden, el ácido barbitúrico, es
inactivo, pero sus derivados suelen tener propiedades
farmacológicas.
86
86

Se han sintetizado miles de derivados, los más comunes son los
que tienen sustituyentes en el carbono número 5 del anillo,
otros derivados se obtienen mutilando los nitrógenos del anillo
y sustituyendo al oxígeno por azufre en el carbono número dos.
Las formas ácidas (ceto) de los barbituratos son insolubles en
agua, pero solubles en disolventes orgánicos, mientras que las
sales (enoles) son solubles en agua.
87
87
Una vez en el cuerpo, se transforman en la forma ácida y se

absorben sobre las proteínas del plasma.
El compuesto relacionado, la glutetinida (Doriden), también se
incluye en la mayoría de los procedimientos analíticos para
barbituratos.
88
88

ANFETAMINAS
Actúan como “estimulantes” o “antidepresivos” los más

comunes son anfetamina y metanfetamina.
Estructuralmente son fenilisopropilaminas.
La forma anfetamina (dexedrina) es más activa que la forma
racémica (benzedrina).
89
89
ALCALOIDES
Los narcóticos tienen la propiedad de crear adicción, de ser

analgésicos y provocar euforia. Los alcaloides del opio se usan
con frecuencia, el principal ingrediente activo del opio es la
morfina.
Al acetilar los dos grupos hidróxilo (sustituyéndolos con grupos
𝑂 − 𝐶 − 𝐶𝐻
acetilo: || se obtiene el derivado diacetilado de mayor
3
𝑂
solubilidad en agua, la heroína.
90
90

La metadona se emplea para rehabilitación de adictos.
La cocaína es el alcaloide que se deriva de las hojas de coca.
91
91
ALUCINÓGENOS
Parecidos a las anfetaminas, actúan como estimulantes, pero a
menudo presentan efectos pocos comunes e impredecibles.
La marihuana, alucinógeno más antiguo y de mayor circulación,
es un extracto natural del cáñamo o planta cannabis sativa. Es
una mezcla compleja de compuestos cuya composición varía
considerablemente de una a otra muestra.
92
92

Esto complica la química analítica y la detección suele basarse
en examen morfológico y no en métodos químicos.
Compuestos llamados cannabinoides especialmente los
tetrahidrocanabinoles.
El 9 – 3,4 – trans – THC (9 – THC) y el 8 – 3,4 – trans – THC
(8 – THC) siendo el 9 – 3,4 – trans – THC (9 – THC) es más
abundante en la marihuana.
93
93
Alucinógeno sintético es la dietilamida del ácido lisérgico

(LSD).
No es fácil detectarla una vez que ha sido ingerida porque sólo
se necesitan microgramos para que tenga acción fisiológica.
Se degrada con rapidez en presencia de luz y calor, por lo que la
muestra debe manejarse con sumo cuidado.
94
94

Solo la forma D del LSD es activa. El LSD generalmente se
encuentra como tartrato u otra sal y no como compuesto puro.
Los sedantes (barbitúricos), tranquilizantes y compuestos
neutros tienden a concentrarse en la sangre, mientras que las
anfetaminas y narcóticos (alcaloides) se encuentran más
concentrados en la orina.
95
95
ESTRUCTURAS DE ALGUNAS DROGAS Y

NARCÓTICOS COMUNES
Barbiturato Anfetamina Morfina
96
96

Metadona LSD
97
97
97
EJERCICIOS
98
98

1. Una disolución de permanganato de potasio tiene A=0.539 leído
a 540 nm (b=1 cm). Hallar su concentración.
Estándar KMnO4
Abs
(M)
0.03 0.162
0.06 0.330
0.09 0.499
0.12 0.670
0.15 0.840
99
99
2. Determinar la concentración del Mn usando el método analítico,

usando 0.03 mol/L y A= 0.162, si Ax = 0.539 .
𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
𝐴 0.162 0.539
𝜀= = = 5.4 ⇛ 𝐶𝑥 = = 0.0998 ≅ 1 𝑚𝑜𝑙/𝐿
𝑏𝑐 0.03 5.4
Estándar KMnO4
Abs
(M)
0.03 0.162
0.06 0.330
0.09 0.499
0.12 0.670
0.15 0.840
100
100

3. Estándares de 𝐶𝑜 𝑁𝑂3 2 ∙ 6𝐻2 𝑂 − 2𝑥10−3 𝑀 (Patrón)
Cx10-3M 0.6 0.8 1.0 1.2 1.8
A 0.1784 0.2291 0.2924 0.3233 0.4948
Determinar la concentración en las muestras de A1=0.203 y
A2=0.279.
Aplicando: 𝐴 = 𝜀𝑏𝑐
0.1784
𝜀1 = 0.6𝑥10−3 = 297.3 1. Muestra A1=0.203
0.2924
0.203 = 𝜀𝑏 ҧ 1 𝐶1
𝜀2 = 0.8𝑥10−3 = 286.3 0.203
𝐶1 = 284.04 = 7.14𝑥10−4 𝑀
0.2924
𝜀3 = 1.0𝑥10−3 = 292.4 2. Muestra A2=0.279
0.3233 0.279 = 𝜀𝑏 ҧ 1 𝐶1
𝜀4 = 1.2𝑥10−3 = 269.4 0.279
𝐶2 = = 9.82𝑥10−4 𝑀
0.4948 284.04
𝜀5 = 1.8𝑥10−3 = 274.8
101
101
4. Una disolución 5𝑥10−4 𝑀 de un colorante M produce una

absorbancia de 0.301 a 530 nm y de 0.046 a 680 nm. Una
disolución 5𝑥10−4 𝑀 de un colorante N, tiene una absorbancia
de 0.046 a 530 nm y 0.602 a 690 nm. Una mezcla de ambos
colorantes dio una absorbancia de 0.125 a 0.398 a 530 y 690,
respectivamente. Determinar la concentración de M y N en la
mezcla.
𝐴𝜆1 = 𝜀𝑀 𝑏𝐶𝑏 + 𝜀𝑁 𝑏𝐶𝑁
𝐴𝜆2 = 𝜀𝑀 𝑏𝐶𝑏 + 𝜀𝑁 𝑏𝐶𝑁
𝐴 0.301 𝐴 0.046
530: 𝜀𝑀 = 𝐶𝑀 = 5𝑥10−4 = 602 𝜀𝑁 = 𝐶𝑁 = 5𝑥10−4 = 92
𝑀 𝑁
𝐴𝑀 0.046 𝐴𝑁 0.602
690: 𝜀𝑀 = = = 92 𝜀𝑁 = = 5𝑥10−4 = 1204
𝐶𝑀 5𝑥10−4 𝐶𝑁
102
102

Reemplazando:
0.125 = 602𝑏1 𝐶𝑀 + 92𝑏1 𝐶𝑁
0.398 = 92𝑏1 𝐶𝑀 + 1204𝑏1 𝐶𝑁
0.125 92
𝐶𝑀 = 0.398 1204 = 0.125 1204 − 0.398(92) = 0.158 𝑀
602 92 602 1204 − 92(92)
92 1204
602 0.125
602 0.398 − 92(0.125)
𝐶𝑀 = 92 0.398 = = 0.318 𝑀
602 92 602 1204 − 92(92)
92 1204
103
103
PROBLEMAS PROPUESTOS PARA

DESARROLLO EN CLASE
104
104

I. El amoniaco puede determinarse espectrofotométricamente
por reacción con fenol en presencia de hipoclorito (OCl–)
Una muestra de 4.37 mg de proteína se digiere químicamente

para convertir en amoniaco todo el nitrógeno presente, después
de este tratamiento, el volumen de la muestra es de 100 mL.
105
105
Luego, 10 mL de esta solución se colocan en un matraz

volumétrico de 50 mL y se tratan con 5 mL de solución de fenol
más 2 mL de solución de hipoclorito de sodio. La muestra se
diluye a 50 mL y la absorbancia se mide a 625 nm en una celda
de 1.00 cm de espesor después de 30 minutos.
Como referencia se prepara una solución patrón a partir de
1x10-2 gr de NH4Cl disueltos en 1.000 L de agua.
106
106

Después, 10 mL de esta solución patrón se coloca en un matraz
volumétrico de 50 mL y se analizan en la misma forma que la
muestra problema. El blanco se prepara utilizando agua
destilada en lugar del problema.
(a)Determinar la absortividad molar
Absorbancia
Muestra observada a 625
nm
del producto azul.
Blanco 0.140
(b)Calcular el % en peso de Nitrógeno
Referencia 0.308
Problema 0.592 en la proteína.
107
107
II. Calcular las incógnitas (X1 a X6) de la tabla si las absorbancias

de los solventes 1 a 4 se realizaron en celdas con camino óptico
de 1.0 cm y los compuestos i y j cumplen la ley de Beer.
Solución iM jM A(394 nm) A(502 nm) A(610 nm)

1 2.0 x 10-4 0 0.973 0.364 0.102
2 0 3.0 x 10-4 0.084 0.546 1.076
3 X1 X2 0.776 X3 0.934
4 X4 X5 0.812 0.602 X6
108
108

Sesión 02. Espectroscopía UV-VIS Componentes Ópticos 2024-A

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ESCUELA PROFESIONAL DE

CURSO : ANÁLISIS DE PRODUCTOS PESQUEROS POR

MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Se define Métodos Ópticos de análisis aquellos, que miden la

MÉTODOS ÓPTICOS ESPECTROSCÓPICOS

Basados en la medida de la Intensidad y la Longitud de onda de

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

No miden espectros, ni están relacionados con las transiciones

Einstein: La radiación electromagnética está constituida por

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Longitud de onda (). Distancia en línea recta a lo largo de la línea

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Color. Respuesta a una serie de estímulos combinados.

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

La radiación electromagnética, puede considerarse como una forma

1022Hz Frecuencia 103 Hz

Rayos  Rayos X UV IR Radio

UV Violeta Azul Verde Anaranjado Rojo IR

400 500 600 700 nm

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Para comprender cualitativamente la absorción de la radiación se

Estas longitudes de onda residuales que se transmiten se ven como

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

P0 haz de radiación de potencia, incide en el bloque perpendicular a la

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

S = rayo transversal en cm2.

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

LEY DE BEER (1852)

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Absorbancia (A): log en base 10el poder de radiación que incide

transmitido por la muestra (P) y

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

UV lejano (10 – 200 nm)

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Todos los enlaces múltiples C = C, C  C, C=N poseen electrones  y

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Máximos de Absorción de ∥ത⟶∥෨ ∗ y 𝓷 ⟶∥෨ ∗ para grupos

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

los electrones  están cada uno asociado a su átomo y un aumento

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Sistema con electrones 

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

–CC–C=C– 220 21 000

–C=C–C=C–C=C– 260 35 000

–C=C–C=O 240 320

–C =C–C=C–C=O 270 350

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Grupo de átomos responsables de bandas de absorción en las

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Comportamiento individual de los cromóforos:

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Banda de Absorción  →*

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

El hecho de que la mayoría de los compuestos saturados que

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

– Br CH3Br 204 200

La espectroscopia molecular de absorción UV. Es muy útil en la

Ing. Mg. Ricardo Rodriguez Vilchez

Son determinaciones de: