PREPARACIÓN MEDIOS DE CULTIVOS

La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de

nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio
osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar o caldo que
sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos. La preparación de los
medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el control regular de los
microorganismos descomponedores y patógenos en las muestras microbiológicas.

Los medios de cultivo microbiológico deben proporcionar condiciones de crecimiento

óptimas para todos los microorganismos o para tipos específicos de microorganismos. La
composición precisa de un medio depende de la especie que vaya a cultivarse y del objetivo
de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en función de los microorganismos. Los
medios de cultivo microbiológico se clasifican en función de diversos parámetros, como los
componentes químicos, su característica física y su función (Merck, 2023).

I. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
 Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos, haciendo un primer acercamiento a la manipulación de
microorganismos y adquiriendo la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad
en el laboratorio de microbiología.

II. METODOLOGÍA

1. Seleccionar los materiales que vamos a utilizar, estos deben ser de material
autoclavable Boro 3.3 ya que serán debidamente esterilizados. (Cajas Petri, pipetas
10cm3 ò 10ml, 6 tubos de ensayo con sus respectivas tapas, vaso de precipitación de
500ml, frasco autoclavable de 1000 y 500ml, 1 probetas de 100ml).

2. Esterilizar los materiales de laboratorio, envolviendo completamente con papel

aluminio de manera individual.

3. Pesar los ingredientes principales en la balanza digital para una adecuada exactitud
y precisión, como paso inicial se taró/enceró, posteriormente se colocó la luna de
reloj las cuales se utilizan para pesar muestras sólidas.
 4. Calcular la cantidad de ingrediente conforme al volumen necesario de medios de
cultivo, para ello se procedio a pesar 7,5 g de Agua peptonada.

5. Añadimos 11,25 gramos de Agar nutriente dentro de un frasco autoclavable,

después vertemos agua destilada hasta llenar el contenido del frasco autoclavable de
500 ml.

6. Colocamos las soluciones al agitador magnético con placa de cerámica de

calentamiento, estas son utilizadas para calentar y agitar logrando la
homogeneización de muestras líquidas.

7. Etiquetar cada frasco autoclavable con su correspondiente cultivo.

8. Esterilizar los materiales en el autoclave a 121°C durante 15 minutos, una vez

hayamos realizado todo el procedimiento.

9. Lavar los materiales que se utilizaron para el pesaje, con detergente líquido,
enjuagar con abundante agua y colocarlo en su respectivo lugar.

10. Documentar los resultados

III. PARTE EXPERIMENTAL

1. Esterilizar los materiales. - De manera inicial, se procedió a envolver con papel

aluminio los materiales de laboratorio (Cajas Petri, pipetas, tubos de ensayo, vasos de
precipitación, frascos autoclavables y probetas), para esterilizarlos y así para evitar el
crecimiento de contaminantes. Los materiales de laboratorio deben ser en vidrio
borosilicato 3.3 de alta resistencia ya que se llevarán a esterilizar al autoclave (121ºC)
durante 15 minutos.

3. Pesaje. - Al seguir las instrucciones de medios de cultivo impartidas por nuestro docente,
debemos asegurarnos de usar la cantidad correcta de cada ingrediente, así como de que se
han añadido todos los ingredientes. El uso de la balanza digital en el proceso de preparación
de medios de cultivo, son de gran ayuda en el laboratorio para medir y pesar con precisión.

4. Disolver los componentes del medio en agua destilada. Siguiendo las instrucciones del
profesor, procedimos a pesar sobre la luna de reloj 7,5 gramos de agua peptonada en la
balanza digital, después lo colocamos dentro de un frasco autoclavable añadiéndole agua
destilada hasta los 500 ml del frasco con la ayuda de un embudo. Una vez conseguida la
concentración hacemos su debida etiqueta o rotulo para identificarla. Posterior a eso,
colocamos al agitador magnético, para calentar y agitar logrando su homogeneización.

El siguiente medio de cultivo lo hicimos de manera colectiva entre compañeros guiados por
nuestro profesor, procedimos a pesar sobre la luna de reloj 11,25 gramos de Agar
nutriente en la balanza digital, después lo colocamos dentro de un frasco autoclavable
añadiéndole agua destilada hasta los 500 ml del frasco. De igual manera hicimos su debida
etiqueta o rotulo para identificarla. Finalmente lo colocamos al agitador magnético, hasta la
completa disolución de la misma.

5. Documentación. - Etiquetamos por completo los medios de cultivo para evitar cualquier
mezcla, se deben registrar y almacenar de forma segura todos los datos relacionados con los
medios de cultivo para poder consultarlos y monitorizarlos en el futuro.

6. Uso del autoclave. - Abrir la tapa superior, verificar que las válvulas de vapor y desagüe
están cerradas, Comprobar que el nivel del agua alcanza la gradilla añadir agua
preferentemente destilada, Seleccionar la temperatura de esterilización teniendo en cuenta
la relación entre la temperatura y la presión de vapor saturado, Introducir el material a
esterilizar, Cerrar la tapa del autoclave mediante giro del volante hacia el fondo y ejercer
una ligera presión. Finalmente seleccionar el tiempo de esterilización.

IV. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Las medidas de Seguridad en los laboratorios son un conjunto de medidas preventivas

destinadas a proteger la salud y evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su
ámbito de trabajo, como hacia el exterior. Es por eso que la aplicación de las normas de
bioseguridad en el laboratorio de microbiología, es de gran importancia para obtener unos
resultados óptimos durante cada práctica y no presentar accidentes inesperados…………….
 V. CONCLUSIONES

 La práctica en el laboratorio de microbiología tuvo buen desempeño ya que los

medios de cultivos fueron adecuadamente elaborados y rotulados para seguir con lo
que respecta a su análisis microbiano.

Bibliografía
Merck. (2023). Preparación de los medios de cultivo microbiológico. Obtenido de Soluciones
Sigma-Aldrich: https://www.sigmaaldrich.com/EC/es/applications/microbiological-
testing/microbial-culture-media-preparation