ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUIMICAS
CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA
ALUMNA:
Abigail Cevallos

CURSO:
Tercero IBA ¨C¨
PERÍODO:
Abril-Agosto 2017

RIOBAMBA - ECUADOR
 INFORME 3
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO POR EL METODO DE DILUCIÓN
OBJETIVOS

Objetivo general

 Preparar medios de cultivo usando el método de diluciones para generar

microorganismos in vitro.

Objetivos específicos

 Aprender a reconocer la alta carga microbiana que existe en la muestra de suelo y como
bajar las concentraciones de la misma
 Aprender a diferenciar como cada método de cultivo influye en el crecimiento
microbiano.
 Observar si en este medio de diluciones el crecimiento de microorganismos se beneficia.

MARCO TEÓRICO

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los

microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque
las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco
exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes
que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres
tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos. Este último
aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o
sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir
comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de
agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse
por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Reactivos

 Alcohol al 96%
 Agar SS
 Agar SIM
 Agar SCA (Simmons Citrato Agar)
 Agar TSI
 Agua destilada

Materiales

 Mandil de laboratorio
 Guantes
 Papel aluminio
 Balanza electrónica o analítica
 Probetas
 Agitador magnético
 Medidor de pH
 Autoclave
 Mechero Bunsen o lámparas de alcohol
 Placas de Petri de vidrio

PROCEDIMIENTO

El profesor realizo la demostración para: envolver las cajas Petri y pipetas con papel periódico,
como elaborar tapones para tubos y matraces.

Preparación del material de vidrio y medios de cultivo

1. Lavar el material de vidrio y enjuagar con abundante agua dstilada.

2. Preparar en los Erlenmeyers los medios indicados anteriormente según los cálculos
indicados.
 3. Calentar el medio en el reverbero con agitación constante hasta ebullición, cuidar que no
se derrame.

Esterilización de materiales y medios de cultivo

1. Los medios de cultivo y materiales se esterilizaran en autoclave de acuerdo con las

siguientes instrucciones:
a. Revisar que el agua en el autoclave este limpia y el nivel coincida con la marca en el
tubo indicador. En caso de ser necesario cambiar o añadir agua destilada.
b. Conectarla y poner la perilla de control en calentamiento a 121°C. con el uso de
guantes, acomodar los medios y materiales en la canasta de la autoclave y colocarla
dentro.
c. Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121°C o 15lbs/in 2 de presión y
mantener estas condiciones durante 15 minutos. Revisar continuamente el manómetro
y regular el control de temperatura a valor medio o mínimo.
d. Apagar la autoclave y dejar que la presión baje al valor de cero. Abrir
cuidadosamente la tapa, desde la parte trasera para evitar que el vapor caliente cause
quemaduras.
2. Después de sacar el material, dejar enfriar y abrir los paquetes únicamente en área
aséptica (cerca del mechero).

Vertido de los medios en cajas Petri y solidificación

Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta una temperatura aproximada de 45-50° C,
que coincide con la posibilidad de sostener el matraz en la palma de la mano sin quemarse.

Limpiar la mesa con solución de alcohol al 70% (v/v), encender mecheros y colocarlos a una
distancia de 30cm. Verter entre 10 y 15ml de cada uno de los medios en tres cajas Petri en esta
zona aséptica. Dejar que los medios solidifiquen.

Prueba de esterilidad de materiales

1. Abrir una caja Petri de AST y AS, así como un tubo de CST durante 10 minutos en zonas
no asépticas (patio, aulas, comedor) y etiq uetarlas.
 2. Abrir una caja Petri de AST Y AS, así como un tubo de CST durante 10 minutos en zona
aséptica (cerca del mechero) y etiquetarlas.
3. Etiquetar una caja Petri de AST y AS, así
4. como un tubo de CST como control.
5. Colocar los tubos y las cajas Petri en una incubadora ajustada a 37° C durante 24-48
horas. Las cajas Petri se colocaran con la tapa hacia abajo.
6. Revisar los tubos y cajas Petri para detectar la presencia de contaminantes, por la
aparición de turbidez, nata superficial y/o depósito de material en el fondo de los tubos
con medio líquido, así como la formación de colonias microbianas en la superficie de los
medios sólidos.

RESULTADOS OBSERVADOS

En la dilución se establece que al añadir un solvente a un soluto para reducir la concentración del
soluto, esto lo logramos añadiendo más solvente. Si hablamos de un sistema de n diluciones en
serie, la concentración de soluto en cada dilución sucesiva es de 1/n de la anterior. Generalmente
se efectúan al doble, es decir, que cada dilución tiene la mitad de concentración que su antecesor.

Se hace una dilución primaria cuya finalidad es lograr obtener una muestra representativa de los
microorganismos, esto es, tanto en el aspecto cualitativo (diferentes tipos de bacterias) como en
el cuantitativo, y así lograr una distribución lo más uniforme posible, de los microorganismos
contenidos en la muestra destinada al análisis. Con este fin, se utiliza un diluyente que favorezca
la recuperación de los microorganismos presentes, para ponerlos de manifiesto cuando se
cultiven; para lograrlo, el diluyente debe tener la osmolaridad y el pH favorables para iniciar la
recuperación y actividad de las células microbianas presentes, así como para favorecer aquellas
que se buscan entre una población mixta.
  CONCLUSIONES
 Se utilizó el Agar de conteo de placa (PCA) con peptona para preparar un medio de
cultivo, en las medidas exactas de la cantidad de Agar requerida en cada caso para
luego su aplicación según la técnica indicada.
 Se reconoce con en las muestras la alta cantidad de carga microbiana que existió en la
muestra del suelo y como disminuye la concentración aplicando la técnica de dilución
de acuerdo a lo factores de 10-2 a 10-7 para que exista un aislamiento microbiano.
 El proceso de esterilización en el autoclave de los medios de cultivo se vuelve
fundamental ya que evita que la muestra se contamine, proporcionándonos un medio
adecuado para observar la carga microbiana.

RECOMENDACIONES

 Usar guantes y tapa boca para evitar contaminaciones.

 Esterilizar el área antes de iniciar el trabajo.
 No colocar materiales sobre el mesón de trabajo.
 Trabajar con el área estéril.