EJERCICIO PRÁCTICO PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO E IDENTIFICACIÓN

MICROBIANA

Materiales
1. Vidrieria (con ayuda del instructor verificar los materiales necesarios)
2. Insumos (con ayuda del instructor verificar los insumos requeridos)

Actividad en Laboratorio:

1. Parte A: Preparación y Esterilización de materiales.

2. Parte B: Preparación y Esterilización de Medios de Cultivo.

FUNDAMENTOS TEÓRICOS

Los microorganismos viven en equilibrio dinámico con el medio ambiente; este equilibrio puede ser
roto por cualquier agente físico químico. Por “control” de los microorganismos se entiende tanto la
inhibición del “crecimiento” (multiplicación) microbiano como la destrucción de aquellos.

Esterilización: Es el proceso que destruye todas las formas viables de cualquier agente
microbiológico contenido en un producto, tanto en forma vegetativa como en forma de resistencia.
La esterilidad es algo absoluto e incluye la destrucción de las esporas, las formas vegetativas, los
virus, etc.
Limpieza del Material de vidrio. La limpieza del material de vidrio tiene que ser esmerada y debe
tener siempre presente la norma de limpiarlo después de usado, de modo que quede dispuesto para
su empleo inmediato. Además si se deja largo tiempo sin limpiar, es más difícil de eliminar la
suciedad.
Métodos de esterilización: Comprende todos los procedimientos físicos, mecánicos y
preferentemente químicos que se emplean para destruir gérmenes patógenos.

PROCEDIMIENTO

Seguir las instrucciones del instructor y monitor para la desinfección, envoltura y posterior
esterilización del material de vidrio utilizado en la práctica, tener en cuenta los fundamentos teóricos.

Procedimiento de Limpieza y Desinfección de Superficies:

Previamente revisar condiciones de Bioprotección.

1. Con un paño húmedo pasar Jabón detergente y dejar actuar por 5 minutos.
2. Enjuagar con agua potable o limpia
3. Aspersar Hipoclorito de Sodio al 3% en Solución. Dejar 3 minutos
4. Enjuagar con un paño humedecido
5. Aspersar Alcohol al 70% y dejar actuar hasta evaporar

Instructor Nestor Andres Herrera Blanco

Parte A: Preparación y Esterilización de materiales.

Material de vidrio.

 Lavar material con detergente líquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al final
con agua destilada.
 Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire.
 Envolver las cajas de Petri con papel kraft de acuerdo a las indicaciones del instructor.
 En el papel de la envoltura identificar con nombre.
 Introducir el material en un horno previamente calentado a 180ºC, esperar a que la
temperatura se estabilice nuevamente y a partir de este momento contar el tiempo de
esterilización (1 hora).

Parte B: Preparación y Esterilización de Medios de Cultivo, uso de equipos.

Equipos de laboratorio utilizados (con ayuda del instructor verificar los equipos)

1. En equipos de trabajo identificar los equipos de laboratorio necesarios para la práctica de

preparación de medios de cultivo (balanza analítica, horno de esterilización, autoclave,
cabina de flujo laminar)
2. Realizar reconocimiento de uso de cada equipo, tiempo, temperatura y manipulación

Medio de cultivo sólido

1. Leer cuidadosamente la etiqueta del medio de cultivo deshidratado, para esta práctica solo
se prepara medio Agar nutritivo.
2. Calcular la cantidad necesaria para preparar según las indicaciones del instructor.
3. Tapar el erlenmeyer con un tapón de gasa- algodón, luego con aluminio y papel Kraft,
calentar hasta disolución total, para ello agitar repetidamente y evitar que el medio se
derrame.
4. Si se va a trabajar con tubos, dispensar el medio en cada uno de ellos, tapar cada uno,
etiquetarlos y esterilizarlos en autoclave a 121oC y 15 lbs. de presión durante 15 minutos.
5. Para servir en cajas Petri, autoclave a 121oC y 15 lbs de presión durante 15 minutos y
distribuir el medio de cultivo en el material solicitado (cajas de Petri estériles) en cabina o
cerca a un mechero.

NOTA. Un medio de cultivo sólido (agar) se puede preparar a partir del medio de cultivo líquido
(caldo), agregando a éste la cantidad necesaria de agar-agar (15 a 20 g agar/ 1 L medio) para el
volumen de medio de deseado.

Instructor Nestor Andres Herrera Blanco

Esquema medio de cultivo líquido, sólido y semisólido en tubos

EVIDENCIA DE LA ACTIVIDAD

1. ¿Por qué se colocan invertidas las cajas en la incubadora?

2. ¿Qué diferencia hay entre la descontaminación por calor seco y con calor húmedo?
3. ¿Qué tipos de radiaciones se pueden utilizar en procesos de descontaminación? ¿Qué peligros
pueden suponer?

Instructor Nestor Andres Herrera Blanco