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• Título.
• Objetivos de la práctica.
• Desarrollo de las tareas de aprendizaje.
• Procedimientos plasmados por medio de diagramas de flujo.
• Bibliografía consultada.
El Cuaderno de Laboratorio debe ser exclusivamente para esta actividad, debe ser grapado o cosido,
no argollado, puede ser un cuaderno de 50 hojas. Un cuaderno con estas características tiene un
valor en el mercado de aproximadamente $ 900. Es de resaltar que este cuaderno debe contener la
identificación de su dueño, las páginas deben estar numeradas, debe diligenciarse únicamente con
tinta indeleble y no debe contener tachones, esto en contexto de las Buenas Prácticas de
Documentación.
• Título de la Práctica.
• Lugar de realización.
• Fecha de realización de la práctica.
• Nombre de los integrantes del grupo (si aplica).
• Resultados en tablas de datos, gráficas y observaciones.
• Cálculos (si aplica).
• Análisis de resultados.
• Conclusiones.
• Bibliografía según normas APA.
UNIVERSIDAD EL BOSQUE
GUÍAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA
Objetivos:
• Reconocerán los diferentes pasos del proceso de esterilización por calor húmedo.
• Conocerán la manera apropiada de empacar los materiales que deben esterilizarse por calor
húmedo.
• Aprenderán a elaborar medios de cultivo para muestreo microbiológico.
Materiales:
Lavado
c. Enjuagar con abundante agua de la llave y al final con agua destilada por lo menos tres
veces.
a. Envolver con papel Kraft las cajas de Petri (2 por estudiante o grupo) como lo indique el
profesor, colocar el indicador de esterilidad, anotar en el papel el número de equipo y fecha
de preparación.
b. Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodón, de tal manera que el aire pase
libremente a través de esta.
c. Envolver con papel Kraft cada pipeta (1 pipeta de 10 mL y 1 pipeta de 1 mL
independientemente por estudiante), marcando en la envoltura el volumen de cada una de
ellas y la dirección en la que se debe romper la envoltura, así como el número de equipo y
fecha de preparación. Colocar el indicador de esterilidad.
d. Abrir un cuarto de giro las tapas de los tubos de ensayo y colocar los tubos en un cesto de
alambre o en un bote y cubrirlos con papel Kraft (3 tubos por estudiante o grupo).
e. Envolver con papel Kraft los hisopos, marcando en la envoltura la dirección en la que se
debe romper la envoltura, así como el número de equipo y fecha de preparación. Colocar el
indicador de esterilidad (4 hisopos por estudiante o grupo, envolverlos por pares).
f. Todo el material debe ser identificado con su correspondiente etiqueta.
La cantidad de medio de cultivo que deberá de emplearse por litro está especificada en cada frasco,
se hacen los cálculos necesarios para las cantidades deseadas y a continuación se pesan.
Colocar el polvo en un matraz Erlenmeyer y añadir poco a poco el agua destilada; agitando
constantemente para evitar que se formen grumos; para efectuar la agitación se utiliza una plancha
de agitación o varilla de vidrio; la cantidad completa de agua se añade cuando todo el polvo se haya
mojado bien; los medios líquidos o caldos se disuelven bien a temperatura ambiente.
Los medios de agar tienen que calentarse hasta punto de ebullición para que se disuelvan por
completo. Esto puede realizarse de varias formas; el mejor procedimiento es calentar el matraz
manteniendo el contenido bien agitado para impedir que se queme.
Otro método satisfactorio que reduce el tiempo de calentamiento del medio es hervir tres cuartas
partes de agua destilada y suspender el medio deshidratado en el resto de agua fría, teniendo
cuidado de que todo el medio sea suspendido uniformemente, entonces la suspensión se añade al
agua hirviendo hasta que la solución sea completa; también debe tenerse cuidado de que la
ebullición no sea demasiado fuerte y en un momento dado pueda ocasionar que el medio se derrame.
Los medios de agar y gelatina tienen que estar en una completa solución antes de verterlos en los
recipientes en los que habrán de esterilizarse.
Cuando se logra la disolución completa de los medios se prepara una torunda de algodón y gasa
para el matraz en el cual se encuentra contenido el medio, se introduce en la autoclave para
esterilizarlos; previamente marcados para su identificación.
Los medios de cultivo de agar están propensos a mostrar un precipitado, bajo una esterilización o
calentamiento prolongado. La repetida fusión del agar solidificado o el mantenerlo en fusión a alta
temperatura pueden, así mismo, causar la formación de un precipitado en el medio de cultivo.
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GUÍAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA
Un medio que contenga agar también puede formar un precipitado floculante si el medio líquido se
mantiene en un baño de agua (baño María), a una temperatura de 43 a 45 oC, por un tiempo superior
a los 30 min. Este precipitado de agar floculante, no obstante, puede disolverse calentando de nuevo
el medio.
4. Esterilización
a. Este proceso se aplica al material que no resiste temperaturas arriba de135° C (material de vidrio
con torunda de algodón, jeringas desarmadas –no agujas-, recipientes con tapón de rosca –no
cerrados fuertemente-, tapones de hule envueltos en papel).
b. Todo material para tratar en forma individual o conjunta debe cubrirse perfectamente con
material permeable, resistente al calor, no debe usarse papel aluminio o celofán.
c. Operar el esterilizador (autoclave) de acuerdo con las instrucciones del equipo. De manera
general el procedimiento es el que se indica a continuación: meter el material en la autoclave,
cerrarla, dejar calentar con la válvula abierta y esperar a que el aire del interior de la autoclave
sea desplazado totalmente por el vapor de agua, lo que se habrá conseguido cuando a través
de la válvula salga una columna continua de vapor de agua. Cerrar la válvula y esperar a que la
presión suba hasta 15 lb/in2 (15 psi) y una temperatura de 121 °C. Mantener estas condiciones
de 15 a 20 minutos (condiciones generales requeridas para esterilizar el material).
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GUÍAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA
Objetivos:
• ¿Cómo puede garantizar que un área de trabajo pueda ser apropiada para disminuir la
probabilidad de contaminación microbiológica de un producto?
• ¿Qué es una cabina de flujo laminar, que tipos de cabinas de flujo laminar existen?
• ¿Cuál es la utilidad de las cabinas de flujo laminar?
Materiales:
Hisopo estéril X 4
Tubo de ensayo con tapa con 5 mL de caldo neutralizante X 1
Caja de Petri con Agar nutritivo X 5
Toallas de papel desechable
Jabón para manos.
Marcador indeleble (p.e. Sharpie).
Cinta de enmascarar
Regla
Alcohol en aspersor
Gasas estériles: 5 paquetes X 6 gasas
Mechero.
Beaker 50 mL X 1
Gradilla X 1
Encendedor
Lavado de manos
1. Elegir un compañero y sobre las manos sin lavar tomar muestras de la siguiente manera:
a. Tomar un hisopo estéril impregnado con caldo neutralizante y frotar la palma de la mano
para obtener la muestra.
b. Frotar el hisopo sobre toda la superficie del agar neutralizante de la caja de Petri.
c. Incubar a 35 ºC por 48 horas.
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GUÍAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA
2. Aplicar el procedimiento de lavado de manos con jabón y enjuagar con agua potable.
Secarse las manos con gasa estéril.
1. Escoger un mesón o superficie del laboratorio y delimitar, con cinta de enmascarar dos áreas
de 10 cm X 10 cm cercanas la una de la otra.
2. De una de las zonas delimitadas (10 cm X 10 cm), tomar una muestra representativa con un
hisopo impregnado con caldo neutralizante así:
a. Frotar un hisopo impregnado con caldo neutralizante sobre una de las áreas
enmarcadas de 10 cm X 10 cm, de la zona delimitada del mesón.
b. Frotar el hisopo sobre toda la superficie del agar nutritivo de la caja de Petri.
c. Incubar a 35 ºC por 48 horas.
4. Después del período de incubación, hacer las lecturas de los recuentos antes y después de
los procesos de lavado y desinfección.
Procesamiento de datos
Los recuentos se reportan en UFC/m 2. En consecuencia, se calculan los recuentos con base en el
área muestreada.
Muestreo ambiental
3. Destapar la caja de Petri con Agar nutritivo en el lugar elegido para la toma de la muestra
durante un lapso de 3 horas.
Objetivos:
• ¿Por qué algunas bacterias se tiñen como Gram positivas y otras se tiñen como Gram negativas?
• ¿Por qué algunas bacterias no se pueden clasificar de acuerdo con la tinción de Gram?
• ¿Se pueden teñir con la técnica de Gram microorganismos diferentes a bacterias?
• ¿Cuál es la manera apropiada de mantener los objetivos y oculares de los microscopios ópticos
limpios?
• ¿Cómo se deben limpiar los objetivos que se encuentran cubiertos con aceite de inmersión?
Materiales:
Portaobjetos
Cubre objetos
Asa bacteriológica circular
Mechero bunsen
Papel seda
Material biológico
Reactivos
Equipo
1. Esterilice el asa.
2. Ponga una gota de agua en el portaobjetos con el asa y mézclelo con la muestra.
3. Esterilice el asa.
5. Fije la preparación pasándola varias veces sobre la llama del mechero, procurando no
sobrecalentarla
Tinción de Gram
Por otro lado, cuando la concentración de microorganismos en una muestra es muy grande, es
necesario realizar procesos de dilución para poder cuantificarlos.
Objetivos:
• Desarrollar la habilidad de diluir adecuadamente, de manera seriada, una muestra para análisis
microbiológico.
• Mejorar la experticia en el uso de la técnica aséptica para el correcto manejo de muestras para
análisis microbiológico.
• Aprender la técnica de muestreo por extensión en medios de cultivo sólido.
• Reconocer la técnica de siembra por estría de colonias bacterianas.
• ¿Qué consideraciones deben tenerse en cuenta para obtener una adecuada técnica aséptica?
• ¿Cuál es el fundamento de la técnica de siembra por estría y cual es su utilidad?
• ¿Cuál es el objetivo de la siembra por extensión y cual es su utilidad?
1. Tomar tres tubos de ensayo con tapa rosca ESTÉRILES y ponerlos en una gradilla e
identificarlos respectivamente con las diluciones 10-1 a 10-3.
3. Con una pipeta ESTÉRIL de 1 mL, tomar 1 mL de la muestra de agua de charco y adicionar
al tubo identificado como 10-1. Mezclar el contenido del tubo con ayuda de la pipeta de 1 mL
y el pipeteador.
4. Con la misma pipeta ESTÉRIL de 1 mL del paso 3, tomar 1 mL del tubo identificado como
10-1 y verterlo en el tubo marcado como 10-2. Mezclar el contenido del tubo con ayuda de la
pipeta de 1 mL y el pipeteador.
5. Con la misma pipeta ESTÉRIL de 1 mL del paso 3, tomar 1 mL del tubo identificado como
10-2 y verterlo en el tubo marcado como 10-3. Mezclar el contenido del tubo con ayuda de la
pipeta de 1 mL y el pipeteador.
6. Con la misma pipeta ESTÉRIL de 1 mL del paso 3, tomar 0,5 mL del tubo identificado como
10-3 y verterlo en la caja de Petri con Agar nutritivo, extender rápidamente la muestra en la
caja de Petri por medio de un asa de Digralsky ESTÉRIL.
https://www.google.com/search?q=dilucion+microbiologia&client=firefox-b-
d&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwiOzZeZ59DrAhXlqFkKHRCYDuoQ_AUoAXoECAsQAw&biw=1920&bih=978#imgrc=mg21F_VLFhnNSM&imgdii=DQW39yqfM8KirM
Aislamiento
1. De la muestra, tomar una porción con ayuda del asa bacteriológica circular ESTERIL.
2. Sembrar la colonia por agotamiento de estría en una caja de Petri con Agar Nutritivo.
https://www.pinterest.es/pin/309481805623500136/
Recuperada 25 ago 2020
UNIVERSIDAD EL BOSQUE
GUÍAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA
Introducción:
Objetivos:
• ¿En Colombia, las Buenas Prácticas de Elaboración se aplican para que tipo de
Establecimientos Farmacéuticos?
• ¿Cuál es la definición de preparación magistral?
• ¿Cuál es la función del Agar MacConkye II y el Agar Patata-Glucosa?
Materiales:
• Asa de Digralsky X 1
• Caja de Petri con Agar MacConkey II X 1.
• Caja de Petri con Agar Patata-Glucosa X 1.
• Mechero.
• Mortero y Pistilo.
• Bolsa de Dextrosa 5% de 500 mL X 1.
• Jeringa 10 mL X 2.
• Jeringa 5 mL X 2.
• Marcador indeleble X 1.
• Encendedor X 1.
• Paquetes de gasas estériles: 5 paquetes (en las droguerías se venden paquetes que contienen
6 unidades de gasa estéril por un precio aproximado de $800 cada uno).
• Blíster acetaminofén tableta 500 mg.
• Alcohol antiséptico frasco 250 mL.
•
• https://insumedicosdelvalle.com/insumos-medicos/bata-quirurgica-5-und/
• Guantes estériles X 1 (preferiblemente sin talco).
• Guantes de látex o nitrilo (par) X 1
• Zapatones (par) X 1.
• Tapaboca X1.
• Monogafas X 1.
• Esfero.
• Cuaderno de laboratorio con el pre-informe.
Nota: La bata quirúrgica de manga larga desechable (tiene un precio aproximado de $ 7.000), los
guantes estériles y los zapatones se pueden conseguir en las tiendas de dispositivos médicos que
se encuentran en frente de la Universidad, sobre la Carrera 7 B bis
Alistamiento previo
1. Antes de ingresar al área limpia verificar que se cuenta con todo el material necesario para
la práctica.
2. Antes de ingresar al área limpia, vestirse con la bata quirúrgica y los zapatones.
2. Con ayuda de gasa estéril y alcohol antiséptico realizar limpieza aséptica del área de trabajo
de la Cabina de Flujo Laminar.
1. Tomar 0,5 mL de la preparación magistral y realizar una siembra por extensión en la caja de
Petri con Agar MacConkey.
2. Tomar 0,5 mL de la preparación magistral y realizar una siembra por extensión en la caja de
Petri con Agar Patata-Glucosa.
3. Colocar las dos cajas de Petri sembradas en incubación a 35°C durante 48 horas.