DETERMINACION DE GLUCOSA EN SUERO

CONTENIDO

I. METODO UTILIZADO
II. FUNDAMENTO
III. MATERIALES Y REACTIVOS
IV. PREPARACION
V. PROCEDIMIENTO
VI. RESULTADOS
VII. VALORES DE REFERENCIA
VIII. BIBLIOGRAFIA

I. METODO UTILIZADO

 Fotometrico, sistema óptico basado en la medición de la extinción

o decaimiento del flujo de fotones de un haz de luz que atraviesa
una suspensión compuesta por material particulado y agua.

II. FUNDAMENTO

La glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una

mezcla de las enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y Peroxidasa (POD).
En la primera etapa la Glucosa es oxidada a Ac. Glucónico por la acción
de la enzima GOD, liberándose como producto H 2O2, el cual en una reacción
mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-Hidroxibenzoico y 4-
Aminoantipirina produciendose un compuesto coloreado con un máximo de
absorción a 505 nm., en cantidad proporcional a la cantidad de Glucosa
presente en la muestra.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

Material

 Micropipeta de 10- 100 microlitros

 Micropipeta de 100- 1000 microlitros
 Tubo de ensayo de 12 milímetros de diámetro y 7.5 centímetros de largo
 Puntas amarillas
 Puntas azules
 Marcador permanente
 Cronómetro

Reactivo

 Glucosa Oxidasa y Peroxidasa

IV. PREPARACION DE LA MUESTRA

1. .- Dejar coagular la sangre en el tubo rojo por espacio de 10 minutos.

2. Centrifugar el tubo a 2500 rpm por 5 minutos.
3. Rotular un tubo eppendorf con apellidos del paciente y estudio a realizar.
4. Utilizar una pipeta pasteur de plástico para traspasar el suero del tubo
rojo al tubo eppendorf.

V. PROCEDIMIENTO

Equipo

 EMPEROR 1127 espectrofotómetro semiautomático.

Preparación de la reacción

1.- en el tubo de ensayo rotular número de paciente y abreviatura de la

reacción que se realiza.
2.- en el tubo de ensayo pipetear 600 microlitros de reactivo enzimático de
glucosa y 6 microlitros de suero.
3.- dejar reaccionar 5 minutos a temperatura ambiente, siendo estable 30
minutos.

Aparato EMPEROR

Encendido del equipo de química clínica

1. Presionar botón de encendido ubicado en la parte trasera del aparato.

2. Esperar 1 minuto aproximadamente para realizar auto chequeo.
3. En la pantalla aparecerá la indicación de aspirar agua destilada,
succionar agua al presionar el botón, aproximadamente 1 minuto, y
acceder a la pantalla de inicio.

Lectura de glucosa

1. Seleccionar en pantalla “PRUEBA” dando clic derecho con el Mouse.

2. Seleccionar prueba “GLU”.
3. Aspirar agua destilada por la manguera presionando el botón para
absorber.
4. Cuando aparezca “testear de nuevo blanco de reactivo”, seleccionar que
no.
4. Anotar resultado en la libreta correspondiente.
5. Aspirar muestra por la manguera, esperar 5 segundos aprox. Y se
presentara la absorbancia y concentración de glucosa de la muestra en
el extremo inferior derecho.
6. Proceder a aspirar la siguiente muestra hasta terminar con la lectura de
glucosa.

Termino de lectura
 1. Si se requiere proseguir a la lectura de otro reactivo, dar clic en
“PRUEBA”.
2. Para apagar el equipo seleccionar la flecha azul, llevando a la pantalla
inicial y dando clic derecho en “APAGAR”.
3. Enjuagar aspirando agua destilada sin quitar el frasco hasta que el
aparato indique que puede ser apagado.
4. apagar el interruptor directamente.

VI. RESULTADOS

El reporte de los resultados se realizara siguiendo los lineamientos del

manual REPORTE DE RESULTADOS E IMPRESIÓN EN EL SISTEMA
PASTEUR.

VII. VALORES DE REFERENCIA

Los valores de referencia oscilan entre 60 – 110 mg/dL.

VIII. BIBLIOGRAFIA

 Inserto del grupo MexLab GLUCOSA (GOD –PAP) Reactivo líquido para
la determinación fotométrica de Glucosa en suero o plasma y otros
fluidos biológicos.
 Salinas-Salas, G., Stintz, M. and Wessely, B. (2005). Aplicación del
Método Fotométrico para la Detección de la Distribución de Tamaño de
Micro Partículas. Información tecnológica, [online] 16(4), pp.59-68.
Available at: http://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0718-07642005000400010 [Accessed 17 Aug.
2016].