DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE

1. OBJETIVO:

Establecer los procedimientos para la cuantificación de niveles de Glucosa

en sangre

2. ALCANCE:

Área: Química Sanguínea

Responsable del área.

3. RESPONSABILIDADES:

 Jefe de Laboratorio
 Bioquímico responsable de área
 Bioquímico de base
 Responsable de toma de muestra

4. FRECUENCIA.

El presente documento se deberá tomar como referencia única, cada vez

que se realice una evaluación por la técnica aplicada en el laboratorio de
Bioquímica Clínica en el ámbito de la salud.

5. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
4. Guyton A. Tratado de Fisiología Médica. Octava edición Mc Graw-Hill
Interamericana S.A., Madrid. 1992.
5. Balcells A. La Clínica y el Laboratorio. Barcelona, Masson, S.A. 18.a edición

6. Todd Sanford Davison, Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 8° Edición

Editorial Salvat. España. 1981.

6. CONTENIDO
 a. FUNDAMENTO
La cuantificación de glucosa se realizó con el método enzimático-
colorimétrico de la glucosa oxidasa/ peroxidasa, empleando el reactivo
comercial Glucosa (BioSystem; Barcelona, España). La técnica se
fundamenta en el uso de dos reacciones acopladas catalizadas por las
enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa que convierten la glucosa en
quinoneimina.

1ra reacción: La glucosa oxidasa (enzima específica para el sustrato)

cataliza la oxidación de la glucosa a ácido glucónico y peróxido de
hidrógeno.

2da reacción: El Peróxido de hidrógeno es oxidativamente acoplado con la

4-AF y fenol, en presencia de la enzima peroxidasa (enzima específica para
el sustrato) para rendir un marcador rojo de tipo quinoneimina. La cantidad
del complejo coloreado formado es proporcional a la concentración de
glucosa y que puede ser medido a 505 nm.

b. DEFINICION
H202 peróxido de hidrogeno
H20 agua
GOD (glucosa oxidasa)
POD (peroxidasa)

c. MATERIALES

6.3.1 MUESTRA
Tipo: Suero o plasma

Cantidad: 2.0 mL de sangre venosa

 Recolección: El paciente debe estar en ayunas de 8 a 12 horas antes
de la toma de muestra.

Conservación: El suero puede ser almacenado por 5 días 275,15-

281,15 º (2 a 8 ºC), o hasta 30 días a 253,1ª K (-20ºC). Congelar y
descongelar solamente una vez. Al descongelar una muestra ser
homogeneizada. Eliminar el material particulado por centrifugación o
filtración.

6.3.2 ESTANDAR
Estándar glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L) según las norma de calidad
Internacional Organization for Standarization (ISO).

6.3.3 CONTROL
Humatrol –N, es un suero control universal liofilizado preparado de
suero bovino con valores asignados para todos los componentes
importantes del suero humano.
Humatrol- P, es un suero control universal liofilizado preparado de
suero bovino con valores asignados para todos los componentes
importantes del suero humano.

6.3.4 . REACTIVOS

Reactivo de Glucosa GOD-PAP

1. Fosfato 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L,glucosa oxidasa menor a 10 U/mL,
peroxidasa mayor 1 U/mL, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L, pH 7,5.

Reactivos no provistos:
1. Agua destilada

Preparación de reactivos
2. Reactivo de Glucosa GOD-PAP y Estándar listos para usar.

Conservación
Los reactivos provistos son estables hasta las fechas de espiración
señaladas en las etiquetas individuales cuando se almacenan a
275,15-281,15 ºK. Después de abiertos, los reactivos deben
almacenarse a 275,15-281,15 ºK. y utilizarse dentro los 90 días.
 6.3.5 MATERIALES
1. pipetas de 5 mL
2. Equipo de protección personal (guantes de látex, gorro, barbijo)
3. Reloj o cronometro
4. Marcador indeleble

6.3.6 EQUIPOS:
- Analizador de Química Sanguínea Stat Fax 1945.
4. Filtro de longitud de Onda Extendida de 630 nm
5. Rango de medición lineal 0.00 a 2.50 unidades de Absorbancia (A).
6. Precisión fotométrica –(1 % de lectura mas 0,0051) a 1,5
7. Precisión fotométrica –(2 % de lectura mas 0,0051) a 1,5- 2.0 A
8. Fuente de luz lámpara halógena de tungsteno
9. Longitudes de onda 340, 405,505,545,600,630 nm.
10. Vortex
11. Micropipetas de volumen fijo 10 ul y 1000uL

d. PROCEDIMIENTOS

TECNICA:

BLANCO ESTÁNDAR MUESTRA

ESTÁNDAR ------ 10 uL ------
MUESTRA ------ ------ 10 uL
REACTIVO 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
CONDICIONES:
LONGITUD DE ONDA: 500 nm.
TEMPERATURA : 37 °C
TIEMPO DE INCUBACION: 5 MINUTOS
TIPO DE MUESTRA SUERO O PLASMA
BLANCO: REACTIVO
ESTABILIDAD DE LA 2 HORAS
REACCION :

DATOS ADICIONALES:

INTERVALO BIOLOGICO DE 70 – 105 mg/dL

 REFERENCIA:
LINEALIDAD: 500 mg/dL
CONCENTRACION DEL 100 mg/dL
ESTÁNDAR:

6.4.2. CALCULO DE LOS RESULTADOS:

Se usa para interpolar la concentración de Glucosa God-Pad en las
muestras desconocidas, la misma que es trazada con los datos
obtenido por el equipo Analizador de Química Sanguínea Stat Fax
1945

6.4.3 VARIABILIDAD BIOLOGICA DE REFERENCIA:

Niños prematuros 25-80 mg/dL

Ninos- Recien Nacidos 30-90 mg/dL
Niños-Adultos 70-105 mg/dL

6.4.4 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Los valores elevados de glucosa se dan en varios tipos de Diabetes
primarias, en los estados de intolerancia a la glucosa y en la diabetes secundaria a
diferentes patologías (hipertiroidismo, hiperpituitarismo, hiperradrenocorticismo,
etc.). Los valores disminuidos se dan en las hipoglucemias que se pueden deber a
varias causas como el hiperinsulinismo endógeno y exógeno, tumores extra
pancreáticos, síndrome auto inmune, insuficiencia suprarrenal y o hipofisiaria,
alcoholismo entre otras.

6.4.5 LIMITACIONES PARA EL PROCEDIMIENTO:

Interferencias: Ictericia y hemolisis

Precauciones: Utilizar guantes, gorro barbijos y utilizar la indumentaria
adecuada para las áreas de trabajo, para el uso del reactivo debe utilizarse
dispositivos pipeteadores mecánicos o automáticos.

6.4.6 CONTROL DE CALIDAD:

Control cruzado con laboratorio externo, confirmación mediante
paquete estadístico Medlab, reglas de Westergard.

6.4.7 FORMULARIO Y REGISTRO:

Libro de registro de pruebas, libro de registro de pacientes por
prueba como se registra en anexos 1.

7. ANEXOS
 Anexo 1. LIBRO DE REGISTRO DE PRUEBAS
CAJA NACIONAL DE SALUD
AREA DE BIOQUIMICA CLINICA
CUADERNO DE REGISTRO DE PRUEBAS

NOMBRE
NRO CODIGO EDAD PRUEBA RESULTADOS DIAGNOSTICO MEDICO
PACIENTE

NACHO
QUISPE
20 DIABETES INSULINO MARCO
2 28843 CARLA GLUCOSA
MABEL DEPENDIENTE GUTIERREZ