Glucosa Líquida

(Oxidasa) G-7521

Uso Recolección y Almacenamiento de la Muestra

Para la determinación cuantitativa de Glucosa en suero. Solo usar 1. Se recomienda suero no-hemolizado o plasma heparinizado
para diagnóstico in vitro. 2. El Suero debe ser separado del coágulo rápidamente ya que la tasa de disminución de
la glucosa es de aproximadamente 7% por hora en sangre entera.6
Significado Clínico 3. La Glucosa en suero es estable durante veinticuatro horas cuando se almacena
La determinación de glucosa en suero es mas comunmente efectuada refrigerada (2- 8°C).
para el diagnostico y tratamiento de diabetes mellitus. 4. Las muestras deben ser recolectadas como se indica en documento NCCLS H4-A3.7
Resumen de la Prueba Interferencias
Los primeros métodos enzimáticos para la determinación de glucosa 1. Las muestras muy lipémicas pueden causar valores de glucosa elevados falsos.
utilizan glucosa oxidasa para catalizar la oxidación de la glucosa en 2. La bilirrubina al nivel de 20mg/dl y la hemoglobina a nivel de 500mg/dl
peróxido de hidrógeno y ácido glucónico.1 El peróxido de hidrógeno que se ambos se han encontrado que exhiben interferencia insignificante (<3%) en
forma se mide por la oxidación de un cromógeno.2 Muchos cromógenos se este ensayo. Las muestras muy lipémicas pueden causar valores de glucosa
investigaron pero muchos fueron descartados debido a carcinogenicidad elevados. NOTA: Los niveles de Glucosa fueron 184mg/dl para el estudio de
posible, toxicidad, inestabilidad o porque se vieron afectados por Bilirubina y 188mg/dl para el estudio de hemoglobina.
muchas sustancias que interfieren. Trinder3 modificó a Emerson4 para 3. Young, et al8 ha publicado una amplia lista de sustancias interferentes.
desarrollar un eficiente sistema de peroxidasa-fenol-aminofenazona para la
cuantificación de peróxido de hidrógeno mediante la formulación de un Materiales Provistos
colorante quinoneimina rojo. Este método es menos influenciado por Reactivo de Glucosa.
sustancias de interferencia y no sufre de los muchos inconvenientes de los
métodos anteriores. Materiales Requeridos pero no Provistos
1. Instrumentos de pipeteo (1.0 ml & 10ul)
Principios
Glucosa Oxidasa 2. Tubos de ensayo
3. Temporizador(para medir 10 ,minutos)
D-Glucosa + H2O + O2 -------------------------------¾ H2O2 + D-Gluconato 4. Espectrofotómetro capaz de leer a 500nm
POD 5. Bloc de calentamiento(37°C)
H2O2 + 4-AAP + Phenol-----------------------¾Colorante Quinoneimine + H2O 6. Suero control con valores conocidos normal y anormal de glucosa
La Glucosa es oxidizada por la glucosa oxidasa a gluconato y peróxido de
hidrogeno. Phenol + 4-AAP + peróxido de hidrogeno, en presencia de
Procedimiento (Automatizado-General)
peroxidasa, produce un colorante de quinoneimina que es medido a Longitud de Onda: 500 nm
500nm. La absorbancia a 500nm es proporcional a la concentración de Tipo de ensayo: Endpoint
glucosa en la muestra. Muestra/Relación de reactivo 1:101
Dirección de Reacción: Creciente
Composición del Reactivo Temperatura: 37°C
Glucosa Oxidasa (microbial) 12,000 u/l, Peroxidasa (horseradish) > 1,000 Tiempo de incubación 600 seconds
u/l, 4-AAP >0.3mM, Phenol 4mM, Buffer, pH 7.4 ± 0.1, no-reactivo Bajo Normal 70 mg/dl
estabilizadores, preservativo. Ver “Precauciones”. Alto Normal 105 mg/dl

Preparation del Reactivo Procedimiento (Manual)

El reactivo esta listo para usarse. 1. Etiqueta los tubos de ensayo con “blanco”, “control”, “estandard”, “paciente”, etc.
2. Pipetee 1.0ml de reactivo de trabajo a todos los tubos y coloque en baño maria a 37°
Almacenamiento del Reactivo y Estabilidad C durante los ultimos cinco minutos.
1. El reactivo debe ser almacenado refrigerado a 2-8°C. 3. Agregue 0.01ml (10ul) de muestra a los tubos respectivos. Mezcle e incube a 37°C
2. El reactivo es estable hasta la fecha de expiración indicada cuando es durante diez minutos.
almacenado como se indica. 4. Después de la incubación, ponga el espectrofotómetro en cero con el reactivo
blanco. Lea y registre las absorbancias de todos los tubos a 500nm (500-520nm).
Precauciones 5. Para determinar resultados vea la secciòn de “Cálculos”.
1. El Reactivo es propuesto solo para uso en diagnostico in vitro.
2. El reactivo no debe utilizarse si se ha desarrollado turbidez u otra
Limitaciones
evidencia de crecimiento microbiano. 1. Los reactivos dan resultados encima del rango de 0-500mg/dl. Las muestras que
3. El reactivo no debe usarse si falla para encontrar linearidad o falla para exceden 500mg/dl deben ser diluidas con un volumen igual de solución salina y
obtener valores de control en el rango indicado. volver a ensayar. Multiplique el resultado por dos.

4. Todas las muestras y controles deben tratarse como potencialmente 2. Si usa el espectrofotometro se requiere un volumen final mayor de
infecciosos, usando los procedimientos de seguridad de laboratorio. 1.0ml para una lectura precisa, use 0.03ml (30ul) de muestra a 3.0ml de
(NCCLS M29-T2).5 reactivo. Realizar la prueba como se describe anteriormente.

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(Oxidasa) G-7521

3. Una muestra Lipémica puede dar falsamente resultados elevados. Para 3. El coeficiente de correlación fue de 0.999 y la ecuaciòn de regresión fue
corregir la lipemia se debe ejecutar un blanco de suero. Suero Blanco: Agregar y=1.02x –1.13. (Sy-x=15.43)
0.01ml (10ul) de muestra a 1.0ml de agua. Coloque el espectrofotómetro a cero 4. Precisión: Se realizaron estudios de precisión en un analizador
con agua. Leer y registrar la absorbancia y restar la lectura de la
automático a raíz de una modificación de las directrices contenidas en
absorbancia de prueba. Calcular como de costumbre.
el documento NCCLS EP5-T2.10
Calibración
Use un estandar de glucosa trazable NIST- (100mg/dl) o suero calibrador. En Pba. Pba. a Pba.
El procedimiento debe ser calibrado de acuerdo a las instrucciones del Mean S.D. C.V.% Mean S.D. C.V.%
fabricante del instrumento. Si los resultados del control se encuentran 101 1.1 1.1 86 2.1 2.5
fuera de rango, el procedimiento debe ser recalibrado 172 1.3 0.7 198 6.3 3.2
293 3.9 1.3 283 9.2 3.3
Cálculos 5. Sensitividad: La sensibilidad para el reactivo de glucosa líquida (oxidasa)
Abs. = Absorbancia se investigó mediante la lectura del cambio de absorbancia a 500nm para
una muestra de solución salina, y un suero con una concentración
Abs. (Paciente) x Concentracion de = Glucosa (mg/dl) conocida. Se realizaron diez réplicas de cada muestra. Los resultados de
Abs. (Standard) Standard (mg/dl) esta investigación indican que, en el analizador utilizado, el reactivo de
glucosa líquida (oxidasa) mostro poca o ninguna desviación en una
muestra cero. Bajos las condiciones de reacción descritas 1 mg/dl de
Ejemplo: glucosa da una absorbancia de 0.002.
Abs. (Paciente) = 0.300
Abs. (Standard) = 0.200
Referencias
Concentración de Std. = 100 mg/dl 1. Keston, A.S., Abstr., 129th Meeting Amer. Chem. Soc., p 31 (1956).
2. Teller, J.D., Abstr., 130th Meeting Amer. Chem. Soc., Atlantic City, N.J., p
69c (1956).
Entonces: 0.300 x 100 = 150 mg/dl
3. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem. 6:24 (1969).
0.200
4. Emerson, E.J., et al, J. Org. Chem. 3:153 (1938) and 8:417 (1943).
Unidades SI 5. NCCLS document “Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease
Para obtener resultados en unidades SI (mmol/L), multiplique los Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue”, 2nd Ed. (1991).
resultados en mg/dl por diez para convertir dl a litro y divida el valor por 6. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B.
180, el peso molecular de la glucosa. Saunders, p. 243 (1976).
7. NCCLS document “Procedures for the Collection of Diagnostic Blood
Specimens by Skin Puncture”, 3rd. Ed. (1991).
mg/dl x 10 = mg/dl x 0.0556 8. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
180 9. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B.
Saunders, p 155 (1970).
Ejemplo: 150mg/dl x 0.0556 = 8.34 mmol/L 10. NCCLS document “Evaluation of Precision Performance of Clinical
Chemistry Devices”, 2nd Ed. (1992).
Control de Calidad
Los controles de suero con valores de glucosa normales y anormales conocidos se
deben ejecutar de forma rutinaria para monitorear la validez de la reacción. Estos Manufactured by Pointe Scientific, Inc.
controles deben procesarse al menos con cada turno de trabajo en la que se
5449 Research Drive, Canton, MI 48188
realizan los ensayos de glucosa. Los valores de control deben estar dentro de los
rangos establecidos para los controles particulares que están en uso. Se
recomienda que cada laboratorio establezca su propia frecuencia de la determinación Rev. 12/09 P803-G7521-01
de control.

Valores Esperados9
70-105mg/dl
Se recomienda ampliamente que cada laboratorio establezca su propio rango normal.

Funcionamiento
1. Rango de Ensayo: 0 - 500 mg/dl
2. Correlaciòn: Resultados obtenidos con este reactivo (y) en 132
muestras, que varían en la concentración de glucosa a partir de
32-297 mg/dl, se compararon con las obtenidas en las mismas
muestras usando un reactivo de polvo seco (x) basado en la misma
metodología en un analizador automatizado.