Práctica No 1: Flujo de masa a través de la membrana.

FUNDAMENTO TEÓRICO:

La membrana plasmática de una célula, además de permitir la comunicación intercelular,

de ser un soporte para diferentes reacciones químicas y proteger a la célula frente
cambios osmóticos, establece una barrera semipermeable entre el contenido intracelular
y extracelular, la cual se encarga de controlar estrictamente la migración e intercambio de
sustancias disueltas entre ambos medios, como nutrientes, iones, productos de desecho y
otros compuestos, los cuales son necesarios para el sostenimiento de las funciones vitales
de relación, nutrición y comunicación de toda célula.

Se conocen diferentes procesos mediante los cuales dichas sustancias pueden moverse a
través de la membrana sin que se requiera un consumo energético también conocido
como transporte pasivo, entre ellos se tiene la difusión simple a través de la bicapa
lipídica, difusión simple a través de una proteína de canal y difusión a través de una
proteína transportadora, otro de estos mecanismos es el transporte activo, el cual
requiere un gasto energético para la activación de una bomba con capacidad de
transportar sustancias en contra del gradiente de concentración [1].

La energía que una célula necesita puede obtenerse a partir de procesos coordinados
entre el transporte de sustancias a través de la membrana y transformaciones
metabólicas como la síntesis de moléculas complejas a partir de precursores más
pequeños (anabolismo) y la degradación de moléculas grandes y complejas hasta
productos más pequeños y sencillos (catabolismo) con la subsecuente liberación de
energía al sistema que puede ser empleada para llevar a cabo reacciones anabólicas [2].

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

 Evidenciar experimentalmente el transporte de sustancias a través de la

membrana mediante cuantificación de sustratos y productos a lo largo del tiempo
de incubación del cultivo celular.

EQUIPOS:

- Aireador de pecera o jeringa de 10 mL (debe ser llevada por el estudiante)

 - Plancha de calentamiento
- Espectrofotómetro
- Microcentrifuga – centrífuga con capacidad para 2000 rpm

MATERIALES:

- Erlenmeyer de 500 mL
- Erlenmeyer o Beaker de 10 mL
- Bureta
- Beaker de 600 mL
- 2 mangueras para venoclisis (la debe llevar el estudiante, se puede conseguir
fácilmente en farmacias, en este link podrá encontrar un ejemplo de estas
https://cimexcolombiasas.com/producto/equipo-de-venoclisis-macrogoteo/)
- Tapón de caucho con 2 orificios.
- Pipeta volumétrica de 2 y 10 mL
- 2 Peras
- Tubos de ensayo para centrifuga
- Varilla de vidrio
- Vidrio reloj
- Matraz aforado
- Pipetas de 1000 μL, 100 μL y 10 μL

REACTIVOS (Cantidades sugeridas por grupo de trabajo):

- HCl 0,1 M (15 mL)

- Reactivo DNS (2 mL)
- Levadura fresca liofilizada (15 g) (la debe llevar el estudiante).
- Glucosa al 4% (200 mL)
- Glucosa (sólida) (2 g)
- Glicina 0,3% (200 mL)
- Glicina (solida) (2 g)
- Nihidrina 1% (2 mL)
- Nihidrina (sólida)
- NaOH 0,1 M (75 mL)
- Fenolftaleina

NOTA: Las soluciones de glucosa y glicina, deben ser preparadas por el monitor con
antelación.
PROCEDIMIENTO:

1. Pesar 10 g de levadura seca y fresca y adicionarlos en 200 mL de agua destilada

a una temperatura de 45°C por 20 minutos o hasta que se generen gases en la
mezcla, la solución se debe homogenizar constantemente ¿por qué se debe
realizar este procedimiento, puede superar los 45 C?
2. Se mezcla la suspensión resultante en un erlenmeyer de 500 mL con 150 mL de
glucosa al 4% y 150 mL de glicina al 0,3% aireando neumáticamente o
eléctricamente el medio haciendo burbujear los gases de salida a través de 50
mL de NaOH 0,5 M contenido en un beaker de 500 mL tal y como se muestra
en la figura 4.1. Las mangueras de entrada al medio alimenticio y la solución de
NaOH deben de llegar hasta el fondo del recipiente (Se debe evitar que estas
sean demasiado largas o anchas, ya que esto dificulta la difusión de los gases
hacia el beaker recolector para su posterior titulación).

Figura 4.1: Montaje de sistema de flujo

3. Agitar fuertemente el medio alimenticio con la varilla de vidrio y tomar una

muestra de 2 mL del medio alimenticio inmediatamente y por periodos de 30
minutos durante 2 horas, simultáneamente tomar una muestra de 2 mL de la
solución de NaOH inmediatamente y por periodos de 30 minutos durante 2
horas, valorando la muestra con HCl 0,1 M.

4. Centrifugar cada muestra por 2 minutos a 2000 rpm, luego se diluye 1 mL de

 sobrenadante con 4 mL de agua destilada y se centrifuga nuevamente.

5. Cuantificar el contenido de glucosa y glicina en esta solución de acuerdo con el

siguiente procedimiento.

Se deben realizar curvas de calibración para glicina y para glucosa bajo las siguientes
condiciones:

Curva de calibración a 540nm: 20 a 1500 ppm de glucosa.

Curva de calibración a 570nm: 50 a 200 ppm de glicina.

 Cuantificación de Glucosa
Se mezclan 250 μL de muestra con 50 μL de reactivo DNS, dicha mezcla se calienta en
baño maría hasta ebullición por 10 minutos y se le adicionan 2 mL de agua destilada. Se
lee absorbancia a 540 nm.

 Cuantificación de Glicina
Se mezclan 1900 μL de muestra con 10μL de nihidrina al 1% y se lleva a baño maría a
ebullición durante 10 minutos y se lee absorbancia a 570 nm.

CUESTIONARIO

1. Explique en términos energéticos ¿Qué es lo que sucede en el proceso de

activación de la lavadura?
2. Mencione una ruta catabólica y una anabólica en la que intervenga la glucosa.
Explíquelas.
3. ¿Qué sustancias ácidas son las que predominantemente se producen durante
este proceso y qué procesos de producción industrial se usa para la producción
de este?
4. Realice un análisis detallado de los resultados.

BIBLIOGRAFÍA

[1] Karp, G. Cell and molecular biology concepts and experiments, 7 Ed. Wiley
(2013) p851.

[2] McKee, T.; McKee, J. R.; Bioquímica, las bases moleculares de la vida, 5 Ed.
McGraw Hill (2014) p769.