Benemérita Universidad Autónoma

de Puebla
Facultad de Ciencias Químicas
Licenciatura: Químico Farmacobiólogo

Actividad: Cuestionario 6 Técnica de recuento

bacteriano

Materia: Microbiología laboratorio

Alumna: Yamile Coatl Cuamani

Facilitador: Ana Bertha Escobedo López

Nrc: 20490
Fecha de entrega: 29 de septiembre de 2023
1. Investiga una Norma Oficial Mexicana (NOM) indicando el alimento, el
procedimiento de análisis y el límite de crecimiento permitido.
NOM-110-SSA1-1994, es una regulación de salud en México que establece los
requisitos sanitarios para la producción y comercialización de alimentos de soya y
sus productos, incluyendo harinas, aceites, proteínas, leche de soya, entre otros.
Procedimiento:
Preparación de la dilución primaria:
A partir de muestras líquidas: Para muestras líquidas no viscosas (agua, leche,
refrescos, etc.) en las cuales la distribución de microorganismos es
homogénea o fácilmente homogeneizable por medios mecánicos (agitación,
etc.).
Para muestras congeladas de un alimento originalmente líquido o licuable,
fundir por completo en baño de agua de 40 a 45°C un tiempo máximo de 15
minutos y homogeneizar agitando vigorosamente.
a) Agitar la muestra manualmente con 25 movimientos de arriba a abajo en un
arco de 30 cm efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 1 ml de la
muestra y diluir con 9 ml del diluyente el cual debe encontrarse a una
temperatura similar a ésta, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.
b) Siempre que la cantidad de muestra lo permita, tomar alícuotas mayores, por
ejemplo volúmenes de 10 u 11 ml, diluidos con 90 o 99 ml, de la misma
forma que se describió anteriormente.
Preparación de las diluciones decimales adicionales.
 Transferir 1 ml o un múltiplo, por ejemplo, 10 u 11 ml de la dilución primaria
1 + 9 (10-1), en otro recipiente conteniendo nueve veces el volumen del
diluyente estéril a la temperatura apropiada, evitando el contacto entre la
pipeta y el diluyente.
 Mezclar cuidadosamente cada botella de diluyente siempre de la misma
manera que se describe en muestras líquidas
 La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se
van a inocular, dependen del número esperado de microorganismos en la
muestra, con base a los resultados de análisis previos y de la información
que se obtenga del personal de inspección que la haya colectado. En
ausencia total de información, trabajar con las diluciones de la primera a la
sexta.
 Utilizar pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las
cajas que se hayan seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe
ser menor al 10% de la capacidad total de la pipeta.
 Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su
capacidad total, escurrir aplicando la punta de la pipeta una sola vez en un
área de la caja Petri sin líquido.
 Mientras se afora el líquido de la pipeta, la punta de ésta debe apoyarse en el
interior del cuello del frasco y mantenerla en posición vertical, para lo cual
este último debe inclinarse lo necesario.
 En estudios donde se busca la presencia o ausencia de una determinada especie de
microorganismos en 0,1 ml o 0,1 g, no es necesario preparar diluciones mayores.
El criterio para seleccionar las diluciones a preparar de acuerdo con el número de
microorganismos esperado es:
Para la técnica del número más probable utilizar tres tubos: donde sea posible
demostrar el microorganismo en 10 ml de la dilución más alta.
Para la técnica de cuenta en placa, considerar aquellas en las que se puedan contar
de 25 a 250 colonias en un mínimo de una de tres diluciones en el método de cuenta
de bacterias aerobias en placa. En el caso de otros grupos microbianos, considerar
el número especificado de colonias en la Norma Oficial Mexicana correspondiente.
2. Enuncia cuatro técnicas usadas para el recuento microbiano
indicando si permiten una cuenta total o viable.
o Recuento en placa (método de dilución seriada): permite el recuento de
microorganismos viables, ya que solo se cuentan las colonias que tienen la
capacidad de crecer en el medio de cultivo utilizado. Se basa en la dilución
de una muestra y la siembra en placas de agar para que las colonias de
microorganismos crezcan y puedan ser contadas. Proporciona una cuenta de
microorganismos viables por unidad de volumen o peso.
o Microscopía de recuento: Permite la cuenta total de microorganismos,
incluyendo tanto los microorganismos vivos como los muertos. Se realiza
mediante el uso de un microscopio y una cámara de recuento que permite
contar microorganismos en una muestra, vivos o muertos. Si se tiñen todas
las células, se obtiene una cuenta total.
o Técnica de filtración por membrana: Permite una cuenta viable, ya que
solo las células vivas que pasan a través de la membrana y crecen en el
medio de cultivo se cuentan.
o Técnica de citometría de flujo: Puede utilizarse tanto para una cuenta total
como viable, dependiendo de si se utilizan marcadores específicos para
distinguir entre células vivas y muertas.
o PCR cuantitativa (qPCR): Permite la detección y cuantificación de material
genético microbiano, por lo que puede utilizarse para determinar la
presencia y cantidad de microorganismos, tanto vivos como muertos,
dependiendo de las condiciones de la muestra y el diseño de la prueba.

3. Según tu criterio ¿cuáles son las ventajas y desventajas del método

de dilución y vertido en placa para la determinación del crecimiento
microbiano?
a. Ventajas:
i. Permite la cuantificación precisa de microorganismos viables.
ii. Es aplicable a una amplia variedad de muestras.
iii. Es una técnica estándar y ampliamente aceptada.
iv. Proporciona una representación visual de las colonias, lo que facilita la
identificación y el estudio de microorganismos individuales.
 b. Desventajas:
i. Requiere tiempo para realizar el cultivo y contar las colonias.
ii. No detecta microorganismos no cultivables o en estado de latencia.
iii. Puede ser inadecuado para muestras con una carga microbiana extremadamente
baja o extremadamente alta.
4. ¿Cuántas diluciones decimales deben realizarse para realizar el
recuento microbiano? Explica tu respuesta.
La cantidad de diluciones decimales necesarias para realizar el recuento microbiano
depende de la concentración esperada de microorganismos en la muestra y del rango de
conteo deseado. La regla común es realizar diluciones decimales en serie, donde cada
dilución es de 10 veces. Por ejemplo, hacer una dilución inicial 1:10, seguida de una
segunda dilución 1:100 de la primera, y así sucesivamente. Esto permite abarcar un rango
amplio y obtener una concentración adecuada de colonias en al menos una de las placas de
agar. Lo importante es asegurarse de que las placas resultantes contengan una cantidad de
colonias que se puedan contar con precisión
5. Si se espera que el contenido microbiano de la muestra (carga
microbiana) sea muy bajo. ¿Qué procedimiento usarías para efectuar
el recuento? Explica tu respuesta
Se pueden emplear medidas adicionales para aumentar la sensibilidad de la detección,
como la concentración de la muestra o el uso de técnicas de enriquecimiento previo al
recuento. El enriquecimiento implica incubar la muestra en un medio de cultivo
específico durante un período prolongado para permitir que las bacterias se
multipliquen antes de realizar el recuento. Esto puede ayudar a aumentar la
concentración de bacterias a un nivel detectable. Sin embargo, es importante tener en
cuenta que el enriquecimiento también puede aumentar el riesgo de contaminación
cruzada y debe realizarse con cuidado y siguiendo las pautas de seguridad
microbiológica.

Bibliografía
Tovar, F. (2012) Técnicas y métodos de aislamiento y selección de microorganismos.
Recuperado de
https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-deaislamiento-
y-seleccion-de-microorganismos.