UNIVERSIDAD

AUTÓNOMA AGRARIA
ANTONIO NARRO
DIVISIÓN DE CIENCIA ANIMAL
DEPARTAMENTO DE PRODUCCIÓN ANIMAL

MICROBILOGÍA II
“MÉTODOS DE DETECCIÓN DE
MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS”

ALUMNA: ANDREA AQUETZALLI

RUIZ RUIZ
INGENIERO EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA EN
ALIMENTOS

01 de mayo de 2020
Métodos directos de
Se basa en la medida de evolución del número de células vivas o del número de partículas

Clasificación del
recuentro de
Recuentos en placas o de

método
colonias

Método
 Es uno de los métodos mas utilizado para medir el tamaño de la población
microbiana
 Permite contabilizar el número de células viables es en otras palabras células

directoque pueden dar una descendencia

 Es el método más usado en la microbiología de alimentos
 Este método la mayoría de veces es empleado para la estimación de bacilos
coliformes en caldo de Mac Conkey

ejemplo
s
 Filtración

 Es uno de los métodos mas utilizados en la microbiología de aguas cuando la

concentración de bacterias es muy baja en la muestra
 Para que se lleve a cabo la filtración pasan 100 ml de agua a través de un filtro
con poro muy pequeños que no pueden pasar bacterias, las cuales quedan en la
superficie del filtro, después se transfieren a una almohadilla con un medio de
cultivo, se encuban para que se desarrollen los microorganismos

Para realizar este método se realizan los siguientes pasos

 Se coloca un volumen de inóculo no superior a 01.ml, sobre la superficie
del medio de cultivo y con un asa extender por toda la placa, hasta que
el medio lo absorba por completo, encubar a una temperatura adecuada
para que crezcan las colonias y realizar el recuento

ejempl
osEste es uno de los métodos que con mayor frecuencia utilizamos en el
laboratorio, colocamos 1ml de la muestra en el centro, extendemos por a
caja Petri, encubamos para el desarrollo de las colonias
A continuación, imágenes de cómo desarrollar este método
 Placa vertida

 En una placa sin medio de cultico agregar se agregan de 0.1 – 1 ml de inóculo

después de añade el medio de cultivo a una temperatura de 45-50 °C, se agita la
placa para mezclar y esperar a que el medio de cultivo solidifique, se encuban para
que crezcan las colonias
 Este método no es recomendable ya que algunos microorganismos pueden ser
dañados por las temperaturas

 Cuando una muestra contengo 300 UFC (unidades formadoras de colonias) se

recomienda utilizar el método de disoluciones seriadas para facilitar el conteo de
los microorganismos y obtener resultados confiables
 Se prepara agua peptonada y se esteriliza, después de coloca en n numero de
tubos de ensayo (los que requieras) en el tubo 1 colocas 1ml de la muestra, del
tubo 1 tomas 1ml de muestra y la colocas al tubo 2 y así sucesivamente

ejemplo
s Este método lo utilizamos con frecuencia en el laboratorio, donde preparamos
agua peptonada, y realizamos el procedimiento que ya se describió.
Se muestra a continuación una imagen de como se desarrolla el método.
 Disoluciones seriadas

Factor de disolución

Colonias formadas
 Para saber cuantas UFC (unidades formadoras de colonias) se formaron se
multiplican las colonias formadas por el factor de disolución.

Recuento microscópico directo o método de

Breed

 Es uno de los métodos mas utilizados en la industria láctea

 Se coloca 0.1ml de muestra en un portaobjetos con un cuadro de 1cm 2, que se
va a teñir con un colorante para poder contar las células en el microscopio con
el objetivo 100X para finalizar el numero de bacterias encontrada se
multiplican por 100
 También se pueden realizar en la cámara de Petroff-Hausser, este no requiere
incubación
 La desventaja de este método es que cuentas bacterias tanto vivas como
muertas

Métodos indirectos
de recuentro de
Método
indirecto
Se basa en la medida de algún parámetro del cultivo que nos permite deducir información
sobre la evolución del número de microorganismo

Medida de consumo de
Algunos de los ejemplos son: el consumo de oxigeno y de carbónico determinado por el
respirometro de Warburg que da la producción de ácidos.
 RESPIROMETRO: es un dispositivo usado para medir la frecuencia respiratoria de
diferentes organismos vivos al evaluar la relación entre el intercambio de oxígeno y
dióxido de carbono. Estos resultados permiten investigar y analizar cómo los diferentes
factores afectan la respiración, tales como la edad, el género, o el uso de diversas
sustancias químicas. Los respirómetros son diseñados para medir la respiración a nivel de
un organismo como un todo (tal como una planta, animal o ser humano) o a nivel celular
(mitocondrial).

Clasificación del
método
Método turbidimetrico
(óptico)
 Son muy usados en los laboratorios
 El método consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a
través de un cultivo bacteriano
 La turbidimetría es un tipo de medición óptica basada en la medición de la pérdida
de transparencia que tienen las disoluciones al aparecer partículas suspendidas. Esta
técnica analítica permite medir la concentración del analito responsable de la
turbidez por la pérdida de la transmisión de la luz que atraviesa la disolución.
 Algunos aparatos utilizados para llevar a cabo este método son los siguientes:
o Espectrofotómetro
o Nefelómetro

ejempl
Este método fue utilizado en la siguiente investigación:
El test de LAL mide la turbidez formada en una disolución por la reacción de
coagulación que ocurre cuando los amebocitos extraídos del cangrejo Limulus
Polyphemus entran en contacto con endotoxinas bacterianas. Las endotoxinas
provocan el comienzo de una cascada de reacciones que provocan la precipitación
de proteínas en forma de gel. Las endotoxinas bacterianas son patógenos muy
peligrosos, por lo que es importante realizar este test a todos los productos
farmacéuticos, alimenticios o de cualquier otro tipo que vayan a estar en contacto
con humanos o animales y puedan provocar la intoxicación por endotoxinas. (Lisa
komski)
Recuento de viables en placas

 Sirve para contar células vivas

 Una célula se define como viable cuando, colocada en un medio adecuado, es
capaz de dividirse y dar descendencia
 El método consiste en sembrar la muestra en una caja Petri con agar previamente
solidificado, cada célula viable formara una colonia después del tiempo de
incubación

ejempl
 Recuento sobre filtros

 Se usa para suspensiones diluidas de bacterias

 Para llevar acabo el método se realiza lo siguiente: pasar un gran volumen de
suspensión a través de una membrana de nitrocelulosa o de nylon, el filtro con
los residuos se coloca en un medio de cultivo solido
 Las colonias se forman sobre el filtro a partir de las células retenidas
 Dichas colonias se cuentan, deduciéndose la concentración original de viables en
función del volumen de suspensión que se hizo pasar por el filtro.


Numero mas probable

 Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir
un cultivo turbio
 El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra
de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo
de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y,
pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o
más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras
que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

ejempl
Esta técnica es utilizada por la Universidad Autónoma de México, donde obtuvieron
los siguientes resultados
 Bibliografí

a
Rubi Franco, 28 de octubre de 2013, “medicion del crecimiento microbiano”,
https://es.slideshare.net/Rubizzita/medicion-del-crecimiento-microbiano
 Instituto politecnico, 17 de mayo de 2017, “métodos en microbiología”,
https://es.slideshare.net/gathycat/mtodos-en-microbiologa
 “Ciclo celular y crecimiento”,
https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm#_Toc58934323
 Camacho, A., M.Giles, A.Ortegón, M.Palao, B.Serrano y O.Velázquez. 2009. Técnicas
para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química, UNAM.
México, http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-fecales-Ecoli-
NMP_6529.pdf
 López Tevez, Leonor; Torres, Carola, 2006, “estudio cuantitativo de bacterias”,
Universidad Nacional del Noroeste, facultad de agroindustrias,
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp5.pdf