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TECNICAS DE RECUENTO BACTERIANO

INTRODUCCION

Se sabe que en microbiología el crecimiento se define como el aumento de número de células. El


crecimiento de una población se mide a partir de los cambios en el número de células o en la
concentración de algún componente celular como estimación del número de células. A esta
medición del crecimiento se le conoce como recuento bacteriano. (Madigan y col., 2015)

El recuento total de células microbianas en un cultivo o en una muestra natural se puede llevar a
cabo simplemente por observación y enumeración de las células presentes. (Madigan y col., 2015).
El recuento se puede realizar por medio de técnicas directas, que es cuando se observa
directamente a la célula microbiana y se realiza su conteo, o por medio de técnicas indirectas
donde se van a observar y contar las colonias, reportando los resultados como cantidad de
Unidades Formadoras de Colonias (UFC).

El recuento bacteriano es importante pues permite conocer el estado bacteriológico de una


muestra, es decir, permite conocer la cantidad de bacterias por unidad de volumen presentes en
una muestra representativa. (Universidad Nacional de la Patagonia, 2017)

OBJETIVOS

- Realizar las principales técnicas de recuento bacteriano.


- Demostrar las principales ventajas y desventajas de las técnicas de recuento bacteriano.

MATERIALES Y METODOS

01. Recuento directo


Técnica de Breed:
Para realizar el recuento de esta técnica se inició dibujando un cuadrado de 1cm2 dearea
en una lámina porta objetos. Luego en esta misma lámina se agregó 0.01ml o 10
microlitros de muestra o suspensión bacteriana, se la extendió dentro del cuadrado
dibujado previamente y se secó con ayuda del mechero. Una vez seca la muestra se le
añadió un colorante simple, como el azul de metileno, se secó nuevamente y se llevó a
observar a inmersión para realizar el conteo bacteriano.
Se realizó el conteo en diferentes campos hasta haber contado 150 microorganismos, una
vez hecho esto, se pasó a promediar el número de gérmenes por campo y se aplicó la
siguiente fórmula

FORMULA

Nota: para conocer el área del campo microscópico se utilizó un micrómetro objetivo.
02. Recuento indirecto – Técnica de recuento en placa
a. Siembra por incorporación
Primero se realizó diluciones de la muestra, en este caso se realizaron solo dos
diluciones (10-1, 10-2). La primera dilución (10-1) se realizó tomando 1 ml de muestra
original y llevándola a un tubo con 9 ml de diluyente, en este caso el diluyente
utilizado fue Solucion Salina Fisiologica Peptonada (SSFP); la segunda dilución se
realizó tomando 1ml de la primera disolución y llevándola a un nuevo tubo con 9 ml
de diluyente.
Una vez que se tuvo las disoluciones listas se depositó 1 ml de cada una y de la
muestra original en una placa cada disolución. Una vez hecho esto se pasó a
incorporar el medio de cultivo estéril y licuado a 45°C, aproximadamente una cantidad
de 20ml de medio en cada placa. Luego se homogenizó y se dejó solidificar. Una vez
sólido se llevó a incubar a la estufa a 37°C por 24 horas, pasado este tiempo se realiza
la lectura de resultados.
b. Siembra en superficie
Para este método se realizaron disoluciones al igual que en la siembra por
incorporación, dos disoluciones: 10-1 y 10-2. Una vez listas las disoluciones se tomó
0.1 ml de estas, también de la muestra original, y se agregó a una placa con medio de
cultivo ya solidificado. Se extendió cada muestra sobre la superficie del medio con
ayuda de un extensor de vidrio, se retiró el exceso de muestra y se llevó incubar a la
estufa a 37°C durante 24 horas. Finalmente, pasado este tiempo se realiza la lectura
de resultados.

Para las técnicas indirectas hay dos formas de dar resultados:

01. Recuento estándar: Que consiste en elegir placas que tengan la cantidad de colonias
dentro de un rango de 30-300 colonias o UFC.
02. Recuento estimado: que consiste en dar resultados de placas con una cantidad de colonias
mayor a 300.

RESULTADOS

01. Recuento directo


02. Recuento indirecto
a. Recuento estandar
b. Recuento estimado

COMENTARIO

De esta práctica el método más habitual en un laboratorio es el recuento directo o también


llamado recuento celular microscópico. Este es un método fácil y rápido de estimar el número de
células microbianas ya que estas se observan directamente, además es económico y no necesita
de mucho equipo de laboratorio. Sin embargo, tiene limitaciones que restringen su utilidad a
aplicaciones específicas. Una de las limitaciones de este método es que no se pueden diferenciar
células vivas de células muertas. Además, es difícil ver las células pequeñas en el microscopio por
lo que se puede realizar un conteo erróneo o también se pueden confundir los desechos presentes
con células. (Madigan y col., 2015)

Lo que respecta al recuento indirecto, recuento en placa, se le conoce como recuento viable pues
en este cada célula viable crecerá y se dividirá para formar una colonia, de manera que el número
de colonias refleja al número de células, Unidades Formadoras de Colonias. La desventaja de este
método es que las colonias pueden crecer a partir de una célula individual o a partir de una
agrupación de células, sin embargo se toma como una sola UFC. Con respecto a los resultados,
estos pueden ser estándar o estimado. En el recuento estandar se toman las placas que tienen una
cantidad de colonias entre 30 a 300, esto ya que dentro de este rango se ha comprobado que
todas las bacterias han tenido oportunidad de desarrollarse pues no hay competencia por
sustrato. En el caso del recuento estimado se da cuando las placas tienen una cantidad de colonias
mayor a 300, se denomina recuento estimado ya que con esta cantidad de colonias mayor a 300
se sabe que no algunas células pudieron no haberse desarrollado por la competencia por sustrato.
En este recuento se divide la placa, se realiza el conteo y se saca un promedio o se puede llevar a
la cámara cuenta colonias y de esta sacar el promedio. En ambos casos los resultados se dan en
UFC por ml. (Madigan y col., 2015)

REFERENCIAS

- Madigan, M.; Martinko, J.; Bender, K.; Buckley, D.; Stahl, D. 2015. Brook. Biología de los
microorganismos. 14° edición. Madrid, España: PEARSON EDUCATION.
- Universidad Nacional de la Patagonia. 2017. Medidas cuantitativas de la población
bacteriana. Recuperado de: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-
content/uploads/2017/02/06-RECUENTOS.pdf