FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y
FARMACIA
UNIDAD I
CÍNETICA DE REACCIONES ENZIMATICAS

NIVEL: SÉPTIMO DRA. VERÓNICA CANDO. MGS.

 LA CATALISIS ENZIMATICA
Posee características importantes:

✓ Elevada eficacia catalítica

✓ Recuperación del estado inicial

✓ Especificidad

✓ Permiten que tengan lugar las reacciones esenciales para el

desarrollo celular
 MECANISMO DE LAS REACCIONES
RX -Q
ENZIMÁTICAS
INICIA
 CINETICA ENZIMATICA

AL AUMENTAR LA (S) AUMENTA

LA VELOCIDAD DE REACCION, Y
ESTO ES LÓGICO PORQUE MIENTRAS
QUEDE ENZIMA LIBRE, A MAYOR
MOLÉCULAS DE SUSTRATO MÁS
MOLÉCULAS DE PRODUCTO
APARECERAN

VELOCIDAD CONSTANTE
Velocidad máxima que no es posible
superar
 ACTIVIDAD CATALITICA

PROCESO INCREMENTA LA VELOCIDAD FAVORECIENDO UNA RUTA

DE MENOS COSTE ENERGÉTICO
FACTORES QUE INFLUYE EN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS

PH

Se denomina pH óptimo al pico de la curva donde su

velocidad es máxima, depende:
•Naturaleza y (S)
•Naturaleza y (E)
•Presencia de activadores e inhibidores
TEMPERATURA
La v de Rx enzimática aumenta
con la temperatura entre 1.5 a
2 veces por cada 10 0C de
aumento de temperatura pero
llega un momento que se
desnaturaliza y se destruye la
enzima disminuyendo su
actividad:
• Lenta
La velocidad inicial
de la enzima
aumenta con la T
pero la linealidad
• 25 – 32 0C es ctt
• 37 0C- OPTIMA
0
 REVERSIBILIDAD

Las enzimas catalizan reacciones

bioquímicas en los dos sentidos

E+S V1/V2 ES E+P

Llegando fácilmente a su estado de

equilibrio en unas y en otras las reacciones
se desarrollan en un solo sentido
ESPECIFICIDAD DE ACCIÓN

- CUANDO LA ENZIMA CATALIZA UNA RX

EN FORMA PRECISA.

ESPECIFICIDAD DE SUSTRATO

EZ PRESENTA AFINIDAD PARTICULAR

POR EL SUSTRATO.
 EFECTORES ENZIMÁTICOS
SON SUSTANCIAS ORGÁNICAS E INORGÁNICAS
QUE MODIFICAN LA CINETICA DE LA REACCION
 ACTIVADORES

MODIFICAN CINÉTICA DE RX

MODIFICAN
CAMBIAN SU VALENCIA
ACTIVADORES
INORG. (OXI = RED)

• Forman Metal –S
• Forman E –M – S

• Altera la ctt de equilibrio de la rx

• Cu, K, Fe, Mo, Mg, Mn
 INHIBIDORES

MODIFICAN CINÉTICA DE RX

COMPETITIVOS NO COMPETITIVOS

Semejanza S Se fijan a una región de

competencia por la superficie de la ez
ocupar el centro afectando su Vmáx
activo
 Métodos de Medición Analítica en
Bioquímica Clínica
Utilidad Fase Analítica

Comprende:
❑ Diagnóstico • Técnicas analíticas
❑ Valoración del pronóstico y Procedimiento de análisis basados
del tratamiento en el comportamiento de la materia
❑ Investigación (analito)
❑ Ensayos clínicos de fármacos
• Espectrometría:::: Electroforesis

• Química Seca::::: Inmunoensayos

 • Métodos Analíticos
Son aplicaciones de las técnicas con parámetros y protocolos concretos.

• Características analíticas:
• Punto final
• Cinético
• Colorimétrico
• Enzimático
• Métodos de curva de calibración
• Reactivos usados
• Verde de bromocresol
• Glucosa oxidasa
• FASE Post-analítica
❖ Desde la obtención de resultados hasta que
el clínico solicitante tiene el informe
❖ “Fase decisiva para cumplir una calidad
Total
✓ Validación de Resultados
✓ Valoración técnica: es la aceptación de los
resultados obtenidos por las distintas técnicas.
✓ Valoración Clínica: Los resultados deben ser
coherentes con la clínica
✓ Informe de resultados
✓ Tiempo de respuesta
✓ Teoría de los valores de referencia
✓ Variaciones analíticas
✓ Variaciones extranalíticas
 MÉTODOS FOTOMÉTRICOS

• MÁS ACCESIBLES Cubre un amplio intervalo de E

radiante, desde los rayos de
• NO REQUIERE INSTRUMENTACIÓN
longitud de onda corta hasta las
ESPECIAL ondas de radio, de longitud de
• EL COMPUESTO MEDIDO PUEDE onda larga.
TENER COLOR PROPIO O SER
INCOLORO
• CURVA DE RX DE TODA ENZIMA, SE
INDICA LA FORMACIÓN DEL P ES
Región Ultravioleta: 10-380 nm
DIRECTAMENTE PROPORCIONAL AL
TIEMPO.
Región Visible: 380-780 nm
Región Infrarroja: 780-30.000 nm
 Métodos para medir la () de
una sustancia por
Espectrofotometría
 Punto final o de equilibrio

Se incuba la muestra y el reactivo durante un tiempo determinado y a una

temperatura determinada para que se complete totalmente la reacción, de
tal forma que la sustancia que buscamos debe consumirse totalmente.

Si no fuera así y quedase parte de la sustancia sin consumir, al medir el

producto, estaríamos midiendo menos cantidad de la que realmente hay.
Por lo tanto se mide al final de un tiempo fijo de incubación.
 Métodos para medir la () de una
sustancia por Espectrofotometría
 Métodos cinéticos

En ellos se mide la velocidad de la reacción mediante

la medida de la variación de la Absorbancia en el
tiempo y esto se relaciona con la concentración.

Es una medición continua, a diferencia de la del

punto final, se mide en tiempos regulares. Se puede
medir la cantidad de sustrato no transformado ó la
cantidad de producto formado.
 MÉTODOS CINÉTICOS
❑ Denominada Puntos múltiples
❑ Miden minuto a minuto la formación del producto
durante 1.8 minutos
❑ Se garantiza saturación de la enzima, ausencia de
productos secundarios que interfieren en la valoración
e inhibidores
❑Test que intervienen coenzimas ( NAD, NADP NADH,
NADPH presentan diferente Absorbancia en la zona UV
 MÉTODOS OPTIMOS

•Sociedad Alemana de Química Clínica

•Condiciones de Reacción Estandarizadas para
8 enzimas como:
• TGP, TGO, GLDH, CK, LDH, PAC, PAL, AP
(leucina aminopeptidasa).
 LA ESTANDARIZACIÓN COMPRENDE

▪Temperatura de Rx a 25°C
▪Clase y estandarización del sol. Tampón
▪Valor del pH
▪Relación del volumen de la muestra con el volumen total
de la muestra
▪[S] que permita la valoración de todas las isoenzimas.
▪Cofactores y efectores
ORIGEN DEL AUMENTO A NIVEL ENZIMÁTICO
TEORÍA NECRÓTICA

Sucede cuando existe una destrucción de células (necrosis),

haciendo que las enzimas celulares salgan al líquido extracelular.
 TEORÍA DE LA PERMEABILIDAD
La destrucción celular alrededor de la lesión

- ANOXIA
- FALTA SUSTRATO
- INTENSA
RADIACION
- DESHIDRATACION
- INTOXICACION

Significa la pérdida de energía necesaria para la

conservación de su estructura celular y actividad biológica,
haciendo que las enzimas celulares pasen al plasma
sanguíneo.
TEORÍA DEL SÍNTOMA INESPECÍFICO
• SE CONSIDERA EL AUMENTO
ENZIMÁTICO SÉRICO COMO UN
SÍNTOMA INESPECÍFICO DEL
SÍNDROME AGUDO, NO SE PUEDE
EXPLICAR COMPLETAMENTE POR UN
SOLO Y ÚNICO MECANISMO
 DETERMINACIÓN DE LAS ENZIMAS

• OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

FEMORAL
CAPILAR(OREJA, DEDO,
TALÓN)
SANGRE VENOSA
 •POSICIÓN DEL CUERPO  DIETA

•MEDICAMENTOS SUERO HEMOLIZADO CONSERVACIÓN

24 – 48 h – 4º C
6 meses a – 20º C
CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
• No utilizar muestras congeladas y descongeladas
varias veces.

• Separar lo antes posible el coágulo del suero

• Evitar trabajar con muestras hemolizadas

• Evitar estasis venosa durante la extracción

• Evitar el envejecimiento de las muestras

• El transporte de las muestras debe realizarse en frío sin

congelar, salvo que se vaya a prolongar mucho tiempo.
CONSIDERACIONES IMPORTANTES EN LOS ENSAYOS DE
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Variables que afectan al análisis clínico. EDTA y hemólisis

EDTA:
Su efecto anticoagulante se basa en su capacidad para quelar iones
divalentes como calcio o magnesio. No es posible determinar la
actividad de enzimas que requieran estos iones.

MUESTRAS HEMOLÍTICAS:
La ruptura de los eritrocitos hace que su contenido pase al plasma.
Las muestras presentan una coloración roja intensa muy característica
debida a la presencia de hemoglobina.
La hemólisis puede ser causada por una patología o, en la
mayor parte de los casos, un procesamiento
indebido de la muestra.