AUTOMATIZACION EN

HEMATOLOGIA
Milena Vanegas MSc
Facultad de Ciencias-UNAH
LABPRO

Automatizacion-Dra Milena Vanegas 1

OBJETIVOS
• ACTUALIZAR CONCEPTOS DE
AUTOMATIZACION:
– 1. METODOS DE MEDICION
– 2. NUEVOS PARAMETROS
HEMATOLOGICOS GENERADOS DE
EQUIPOS DEL SIGLO XI

• DISCUTIR LA UTILIDAD Y
RELEVANCIA CLINICA DE LOS
PARAMETROS GENERADOS POR
LOS EQUIPOS AUTOMATIZADOS

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 CONSULTA

“Un cardiólogo de nuestro

Hospital percibe que los
niveles de Hb de sus
pacientes disminuye 1.5 a 2
g/dL en las primeras 24 horas
después de la admisión.

El piensa que estos resultados

se deben a errores del
laboratorio u otros problemas,
tales como la toma de
muestras”
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 …..“El control de calidad de
nuestro analizador de Hematología
es muy bueno. Algunos de los
pacientes en cuestión han sido
nuevamente sangrados para
verificar los resultados y no hemos
identificado errores del lab o
problemas en la flebotomía”
“Cuánta variación
fisiológica puede causar la
hospitalización en los …..“Se ha explicado al Dr
niveles de Hb en un que la inmovilización de
paciente?” Sabemos que pacientes puede afectar
hay muchas variables que los resultados de Hb,
considerar tales como pero él continua
medicación, fluidos insatisfecho por la
intravenosos, fiebre y cantidad de casos
función renal…. observados”
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Que opinan?

a)Problema pre-analitico
b)Problema Analitico
c)Problema Post-analitico

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• Variaciones fisiológicas
Mayor concentración a inicios de la manaña y
menos concentrada durante la noche, cuando
está recostada.

Cambios de 1.0-1.5 g/dL de Hb no son raros.

• Otros recuentos celulares también muestran variación
diurna. Ej. El ejercicio e ingesta de alimentos están
asociados con un aumento de neutrófilos circulantes.

Recuentos celulares ordenados en la admisión de un hospital?

• gran variedad de problemas:
• perdida sanguínea,
• inicio Tx (ej. liquidos IV), los recuentos 
• Transfusión sanguínea
• Stress
• etc

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• Es correcto establecer que la calibración y
procedimientos de Control de Calidad (CC)
son excelentes! Y por lo tanto, los
resultados obtenidos son correctos

• Únicamente un adecuado CC puede

descartar errores de instrumentación

• Las variables preanalíticas afectan el

volumen del compartimento plasmático y
secundariamente la concentración de la Hb.

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EVOLUCION TECNOLOGICA:
ultimas 2 decadas

MAYOR INFORMACION
CUANTITATIVA:
Ej. RECUENTO DIFERENCIAL
EVOLUCION EXTENDIDO (ECD), FRACCION
IMADURA DE RETICULOCITOS (IRF),
PROGRESIVA VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO DE
DE SOFTWARE RETICULOCITOS (VCMr),
ERITROCITOS FRAGMENTADOS
(FRBC), FRACCION INMADURA DE
NUEVOS METODOS DE PLAQUETAS (IPF).
MEDICION CELULAR

CUALITATIVA:
ALARMAS, AUTOVERIFICACION

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Automatizacion-Dra Milena 9
 PARAMETROS PRINCIPALES

• HEMATOCRITO
• HEMOGLOBINA
• RECUENTO DE ERITROCITOS
• RETICULOCITOS
• RECUENTO DE LEUCOCITOS
• RECUENTO DIFERENCIAL DE
LEUCOCITOS
• RECUENTO DE PLAQUETAS
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 PARAMETROS DERIVADOS

• VCM
• HCM INDICES
• CHCM
• RDW: DISTRIBUCIÓN DE ERITROCITOS POR TAMAÑO
• PDW: DISTRIBUCION DE PLAQUETAS POR TAMAÑO
• VPM (MPV): VOLUMEN PLAQUETARIO MEDIO
• PCT: plaquetocrito
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PARAMETROS DERIVADOS cont..
• CHr: concentracion de Hb de reticuloctitos
• VCMr: VCM de reticulocitos
• CHCMr: CHCM de reticulocitos
• RDWr: distribución de reticulocitos por
tamaño
• IRF: fracción inmadura de reticulocitos
• FRBC: eritrocitos fragmentados
• IPF: fracción inmadura de plaquetas
• ECD: recuento diferencial extendido
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OPERATIVIDAD

• Microaspiración
• Alícuotas de la muestra
• Cámaras de recuento
• Dilución y homogenización
• Análisis
• Sistema de limpieza
• Duración: 1 minuto en
promedio
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PRINCIPIOS DE MEDICION
• Impedancia electrónica ó Detección de
resistencia (DC) ----bajo voltaje

• Radiofrecuencia (RF) ------alto voltaje

• Absorbancia óptica (optical scatter)

• Espectrofotometría

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Impedancia electrónica
Coulter 50’
• Ley de Ohm E= I X R
E= voltaje
I= corriente eléctrica
R= resistencia

• Pulsos eléctricos: CAMBIO DE

VOLTAJE ➔RECUENTOS

• Amplitud del pulso: ➔VOLUMEN

CELULAR

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 Aplicaciones de Impedancia
electrónica
• GR
• GB
• Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos,
Eosinófilos,Basófilos
• Plaquetas
• Reticulocitos
• Histogramas basados en datos
obtenidos 2 parámetros:
1. Recuentos celulares
• Comúnmente en conjunto con otros 2. Volumen celular: tamaño

métodos

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 HISTOGRAMAS DE LA DISTRIBUCION DE
ERITROCITOS

Volumen de GR (eje X) vs. Recuento celular (eje Y).

CURVA B: GR normociticos VCM 88 fl

CURVA A: Microcitos caen en la porción izquierda de la
curva
CURVA C: Macrocitos caen en la derecha de curva

El VCM es el valor medio de la distribucion en el

histograma

El RDW (ancho de distribucion de GR) es el coeficiente

de variacion de la curva. Medida cuantitativa del
tamaño celular.

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Radiofrecuencia (RF)

• Impedancia electrónica de alto

voltaje
• RF y DC: diagrama de dispersion
en dos dimensiones
• Detecta la densidad del interior
celular (volumen nuclear)
• Proporcional al tamaño del pulso

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 Absorbancia óptica

Sistema
óptico

~ al # de Emisión
células de luz

Impulso
Registro
electrico

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 Absorbancia óptica
(Optical scatter )

• Como metodología primaria o en combinación con otros,

generalmente impedancia electrónica
• Usa luz Laser: citometría de flujo ó No-Laser: citoquímica
• Citómetros de flujo
• Diferencial de Leucocitos
• Reticulocitos
• Células sanguíneas inmaduras

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 Citometría de flujo-Fluorescencia

• Mayor precisión en recuentos

• Reticulocitos: Tinción
fluorescente del ARN
• Leucocitos: Tinción
fluorescente del ADN

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 Sistema
óptico Citometríade flujo
~ al # de Emision
células de luz

Impulso
Registro
electrico

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Diagrama de dispersion normal de leucocitos
(dispersograma)

Eje y- representa datos obtenidos

a partir del ángulo 0o :
TAMAÑO CELULAR

Eje x- representa datos obtenidos

90°: cada punto representa
UNA célula .

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 Espectrofotometría

• Hemoglobina
• Reactivo libre de cianuro
-Sulfato de Lauril de sodio
Menos interferencia con mx lipémicas e ictéricas

HB-Fe+2……HB-Fe +3….. META-HB SLS-HB (555 nm)

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 DESEMPEÑO ANALITICO

Recuentos de Reticulocitos o
Plaquetas en recuento
Recuentos de GB
concentraciones plaquetario,
y GR, hemoglobina
normales o especialmente a
y VCM
levemente concentraciones
reducidos bajas,

Generalmente Menos satisfactorio

EXCELENTE bueno y aún no óptimo

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 Metas analiticas
Parameter (TAE, %) (TE, %)

CBC count
• Leukocytes 16.5 5.4-8.8
• Erythrocytes 3.75 1.5-1.8
• Hemoglobin 4.0 1.2-1.9
• Mean cell volume (VCM) 2.23 2.0-2.4
• Platelets 6.32 5.2-9.8
Leukocyte differential count
• Neutrophils 23.4 3.06-7.0
• Lymphocytes 15.0 4.0-11.9
• Monocytes 14.8 13.4-58.7
• Eosinophils 26.0 16.0-37.3
• Basophils 15.7 35.5-155.5
• Reticulocyte count 13.0 8.9-41.3

• TAE, total allowable error54; TE, total current error.1,55

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 INDICE DE DISTRIBUCION DE GLOBULOS ROJOS (RDW): SU APLICACION
EN LA CARACTERIZACION DE ANEMIAS MICROCITICAS E
HIPOCROMICAS
JORGE ROMERO ARTAZA, CLAUDIO D. CARBIA, MARIA FERNANDA CEBALLO, NORMA B. DIAZ
Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Hospital de Clínicas
José de San Martín, Universidad de Buenos Aires
MEDICINA (Buenos Aires) 1999; 59:17-22

RESUMEN: Con el advenimiento de los contadores hematológicos se introduce un nuevo parámetro complemen-
tario de los valores hematimétricos, el RDW (Red distribution width o Indice de distribución de glóbulos rojos)
que mide el grado de anisocitosis. Se estudiaron 90 pacientes con los siguientes resultados: 1) Para el grupo
control constituido por voluntarios sanos (n = 50) los valores RDW fueron (X- ± ES) 13.90 ± 0.10% y VCM
(X- ± ES) 90 ± 5 fl. 2) Los pacientes ferropénicos (n = 20) presentaban un VCM (X- ± ES) 68.60 ± 1.77 fl., y
RDW (X- ± ES) 20.20 ± 1.21%. 3) Los pacientes b-talasémicos (n = 20) VCM (X- ± ES) 66.45 ± 1.95 fl y
RDW (X- ± ES) 17.08 ± 0.40%. Se compararon los valores obtenidos de VCM entre los pacientes
ferropénicos y talasémicos entre sí y con respecto al control normal obteniéndose los siguientes resultados:
control vs. ferropénico y control vs talasémicos se obtuvieron diferencias significativas con un p < 0.01. No
obteniéndose diferencias significativas cuando se compararon ferropénicos vs talasémicos. Se compararon
los valores obtenidos de RDW entre los pacientes ferropénicos y talasémicos entre sí y con respecto al
control normal obteniéndose los siguientes resultados: control vs ferropénico y control vs talasémicos se
obtuvieron diferencias significativas con un p < 0.001. También se obtuvieron diferencias significativas
cuando se compararon ferropénicos vs talasémicos entre sí con un p < 0.001. Los datos estadísticos se
obtuvieron aplicando el test estadístico de análisis de la varianza de una vía (ANOVA). Los resultados
indican que el RDW es un indicador más sensible que el VCM en delinear el posible origen de las
anemias microcíticas hipocrómicas y deberían utilizarse conjuntamente en el diagnóstico precoz de
las mismas.
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27
 RDW
RDW bajo o normal (~14%):
población homogénea y
un histograma de
distribución por tamaño
de carácter gaussiano
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28
Un RDW alto (generalmente
mayor de 18%):
poblaciones celulares
heterogéneas
directamente
relacionadas con el grado
de anisocitosis
observados en el frotis de
sangre periférica.
*población dimórfica
 UTILIDAD DEL RDW

• Clasificación de ANEMIAS: en conjunto al VCM, RDW

• Detección temprana de deficiencia de hierro en conjunción con otros

estudios más específicos como la ferritina sérica.

• Diferenciación de las anemias microcíticas hipocrómicas (anemia

ferropénica) y la b-Talasemia heterocigota.

Ferr´pénica
Anemia
B-talasemia

VCM  VCM 
RDW N RDW 

Automatizacion-Dra 29
 Anemia Ferr´pénica
B-talasemia
VCM  VCM 
RDW N RDW 

Automatizacion-Dra Milena 30
Nuevos parametros
Diferencial extendido

Fracción immadura de reticulocitos (IRF)

Contenido de Hb reticulocitaria (CHr )

Indices Reticulocitarios, ej VCMr

Recuento de eritrocitos fragmentados (FRBC)

Fracción inmadura de plaquetas (IPF)

Granulocitos inmaduros (IG)

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Significado clínico:
Recuento diferencial extendido (EDC)

• Blastos y celulas inmaduras: granulocitos inmaduros (IG)

• Células atípicas: linfocitos atípicos, células hematopoyéticas
progenitoras (HPCs), y NRBCs.
• Objetivo:
– reducir la revision microscopica
– obtener un recuento más preciso y exacto de las poblaciones
celulares raras con respecto al conteo manual y dejar éstos
exclusivamente a materiales más complejos como la Medula ósea

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Fracción inmadura de reticulocitos (IRF)

• Indice TEMPRANO y SENSITIVO de la

eritropoyesis

• Transplantes de MO: identificación temprana de

regeneración de MO

• Aumento de IRF predice el éxito del transplante

aún antes del aumento de neutrófilos y
reticulocitos
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 Indices VCMr y Contenido de Hb
(CHr)
• Ultima generación de analizadores.
• CHr:
– síntesis de Hb en MO y
– disponibilidad de Fe
• Reducción: eritropoyesis x def de Fe
– Aunque Ferritina y trasferrina estén adecuados (casos de inflamacion
o anemia de enf crónicas)
• Util también en el monitoreo de respuesta temprana a Fe intravenoso
pues CHr aumenta en tan solo 48 horas

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Recuento de eritrocitos
fragmentados (FRBC)

• “esquistocitos“
• Indicativos de anemia hemolítica
microangiopática (MAHA)
• Otras causas de hemólisis intravascular
• CID

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Fracción de Plaquetas
inmaduras

• Objetivo: optimizar la decisión de transfusión Pk.

• Citometría de flujo:
– Colorante tiñe ARN de plaquetas jóvenes

• Un aumento de plaquetas reticuladas demuestra una recuperación

plaquetaria
• Buena reproducibilidad y estabilidad
• La fase de recuperación en la trombocitopenia por quimioterapia y
px transplantados es precedida por un aumento de IPF muchos días
antes de la recuperación

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Recuento diferencial automatizado

https://www.youtube.com/watch?v=bNGvOxZezAk
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Conclusiones: puntos claves
“El conocimiento de los límites de los analizadores es
de vital importancia para una correcta interpretacion
de resultados”.
“Estas consideraciones requieren que los laboratorios
clinicos que realizan diagnosticos en Hematologia
cuenten con un personal con un entrenamiento
especifico y profundos conocimientos en hematologia
clinica”

Mauro Buttarello, MD, and Mario Plebani, MD

Am J Clin Pathol 2008;130:104-116

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Conclusiones ….cont
• Muchos problemas deben aun
resolverse para alcanzar las
metas analíticas, por lo tanto el
Microbiólogo debe estar alerta a
los avances tecnológicos para
emplearlos apropiadamente
basados en evidencias clínicas

• Eso le debemos a nuestros

pacientes……..
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39
• Debe recordarse que a pesar del rol importante
de la automatización en el laboratorio de
Hematología moderno, el control microscópico
de muestras patológicas permanece
indispensable y en algunos casos es
diagnóstico por sí solo.

Automatizacion-Dra 40
 MUCHAS GRACIAS
PREGUNTAS ?
Debes explicar
claramente tu
problema

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