Proteínas catalíticas-enzimas

Bioquímica y Biología molecular

M.C.Q. Adriana Y. Mtz Garay
FUNCIÓN
acelerar reacciones

casi todas las

a 37 °C y con un
enzimas son
pH neutro
proteínas

disminuye la energía
de activación de la
reacción.
REACCIONES ENZIMÁTICAS

Factores que afectan a las

reacciones
enzimáticas
 Efecto de la temperatura

catalizador
enzimas
inorgánico

temperatura
la velocidad de reacción constante
aumenta con la (ambiente o
temperatura del sistema corporal)
 Toda enzima tiene un pH
óptimo, puesto que en las
reacciones catalíticas
Efecto del pH participan aminoácidos
ionizables (como histidina,
glutamato y cisteína)

Las enzimas citosólicas La pepsina, secretada por las

células gástricas y que actúa
tienen un pH óptimo en en el jugo gástrico, tiene un pH
el intervalo de pH 7-8 óptimo de 1,5-2,0;

la tripsina y la las enzima lisosomales

quimiotripsina tienen tienen un pH óptimo
un pH óptimo alcalino ácido
Definición de actividad enzimática
ENZIMA

A + B C
REACTIVOS PRODUCTOS

la actividad de una enzima

• La tasa o velocidad (v) de una
se mide bajo condiciones reacción enzimática bajo estas
definidas (temperatura, condiciones se define como la
pH, concentración de velocidad de conversión del sustrato
en producto por unidad de tiempo.
tampón, sustrato y
coenzima)
 Unidad de medición

unidad
internacional katal
(UI)

• Cataliza la conversión
de un micromol de 1 mol de sustrato en 1
sustrato en producto mol de producto por
por minuto (1 UI = 1 segundo (1 kat = 1
mmol/ min). mol/s).
 Especificidad
La mayoría de las enzimas son muy
específicas tanto para el tipo de reacción que
catalizan como para el tipo de sustrato.

está determinada químicamente por los

residuos aminoácidos que se encuentran en el
centro catalítico de la enzima.
 Especificidad
La especificidad de sustrato está determinada por el
tamaño, la estructura, las cargas, la polaridad y el
carácter hidrófobo de su lugar de fijación.
La especificidad de
Especificidad
sustrato está
determinada por:
tamaño

carácter
hidrófobo de su estructura
lugar de fijación

Polaridad
 Especificidad
• El primer paso de la reacción, el sustrato debe
fijarse al centro activo y preparar así la
catálisis.
 Isoenzimas
• Las isoenzimas son enzimas que catalizan la
misma reacción, pero tienen una estructura
primaria y/o composición subunitaria
diferentes. Pero actúan en diferentes sitios.
Ejemplos de enzimas
Nomenclatura de las enzimas
 Funciones de las coenzimas
• Las moléculas facilitadoras conocidas como
coenzimas desempeñan un cometido esencial
en las reacciones catalizadas por enzimas.
• Las enzimas con coenzimas unidas mediante
enlace covalente o no covalente se
denominan holoenzimas.
• Una holoenzima sin coenzima se denomina
apoenzima.
Apoenzima + Coenzima = Holoenzima
 COFACTORES

Grupo
Coenzima
prostético

Las coenzimas solubles se unen de forma reversible a la fracción proteica de la

enzima.
Con frecuencia se modifican durante la reacción enzimática, después se
disocian de la enzima y son recicladas por otra enzima; las oxidorreductasas
tienen coenzimas que pueden ser oxidadas por una enzima, y después
reducidas y recicladas por otra.
 Las coenzimas
La mayoría de coenzimas son derivados de las
vitaminas.
Los derivados de las vitaminas B (niacina y
riboflavina) actúan como coenzimas en las
reacciones de las oxidorreductasas.
 Grupos prostéticos
Los grupos prostéticos están firmemente unidos
a una enzima, a menudo de forma covalente, y
permanecen asociados a la enzima durante todo
el ciclo catalítico.
 Cofactores
• Para su actividad, algunas enzimas necesitan
iones inorgánicos (metálicos) denominados
con frecuencia cofactores, por ejemplo, las
enzimas de la coagulación sanguínea que
requieren Ca2+ y las oxidorreductasas, que a su
vez utilizan hierro, cobre y manganeso.
Enzimas de interés diagnóstico
• ■ Creatina cinasa:
marcador de lesión
muscular e infarto agudo de
miocardio.
• ■ y-glutamiltranspeptidasa:
marcador sensible, pero no
específico, de lesión
hepática.
• ■ Lipasa: indicador de
lesión celular en la
pancreatitis aguda.
 Enzimas de interés diagnóstico
COLINESTERASA
Normalmente interviene en el proceso de conducción
neuromuscular, pero es capaz de hidrolizar el suxametonio
(succinilcolina) utilizado como relajante muscular en la
anestesia general. Los pacientes con una colinesterasa
anómala pueden ser incapaces de hidrolizar el fármaco con
normalidad y sufrir, en consecuencia, una parálisis
prolongada tras una intervención quirúrgica.

La determinación de colinesterasa también es útil para

diagnosticar la intoxicación por pesticidas inhibidores de la
colinesterasa.
 Determinación de isoenzimas
Los isoenzimas tienen distinta estructura pero
ejercen las mismas funciones catalíticas.
Las isoenzimas son formas estructuralmente
diferentes de una enzima pero que presentan
parecidas propiedades catalíticas.
 Determinación de isoenzimas
• Diferentes tejidos pueden producir distintas
isoenzimas, por lo que su detección específica
puede orientar acerca de la localización de un
proceso patológico.
• Las isoenzimas de la fosfatasa alcalina sirven
para diferenciar la enfermedad ósea de la
hepática, especialmente en pacientes en que
se sospecha la existencia de metástasis de
hueso o hígado.
Fosfatasa alcalina
 ACTIVIDAD
• La fosfatasa alcalina es una hidrolasa con muy
poca especificidad de sustrato. Se encuentra
presente en casi todos los tejidos del cuerpo,
especialmente, en epitelio intestinal, túbulos
renales, hueso, hígado y placenta. Su
localización celular es la membrana.
 Determinación de isoenzimas
Una isoenzima específica de la creatina cinasa [CK-
MB] es útil para la detección precoz del infarto de
miocardio.

El músculo cardíaco contiene proporcionalmente

más cantidad de esta isoenzima que el músculo
esquelético, por lo que los niveles elevados de
CKMB son indicadores de la existencia de un
infarto de miocardio.
CREATINA CINASA
CK
CK- TOTAL VALORES NORMALES ADULTOS

• Mujeres: 39 - 238 U/L   (0,66 - 4,0 µkat/L)

• Varones: 51 - 294 U/L   (0,87 - 5,0 µkat/L)

• CK-MB: Fracción de actividad total (por

electroforesis): 0 - 4,0 %
• Es preferible emplear el límite del índice de CK-MB
del 6% de la concentración de CK total como valor
discriminante.
 TRANSFERASAS
• Los cambios de concentración
de GOT (glutamato-oxalacetato transaminasa),
también llamado AST (amino aspartato
tranferasa), y GPT (glutamato piruvato
transaminasa), también llamado ALT (alanina
amino transferasa), en la sangre pueden
orientarnos sobre posibles daños en el hígado
 TRANSAMINASAS
• Por otro lado, hay que tener en cuenta que
tanto el corazón como los músculos producen
una GOT (AST) relativamente alta, con lo que
daños en estos órganos pueden también
conducir a un aumento de la GOT en sangre.
ACTIVIDAD
ELEVACIÓN DE TRANSAMINASAS
 LDH
• La LDH es una enzima tetramérica formada por dos
subunidades diferentes de 35 kDa.
• A partir de estas subunidades pueden formarse cinco
tipos de isoenzimas tetraméricas: H4 (LDH1), H3M1
(LDH2), H2M2 (LDH3), H1M3 (LDH4) y M4 (LDH5).
• Dado que las distribuciones de las isoenzimas difieren
entre los distintos tejidos, es posible diagnosticar la
lesión de un tejido haciendo un análisis de la LDH total
seguido de la determinación de isoenzimas.
 Un rango de
valores normales
es de 105 a 333
unidades
internacionales
por litro (UI/L)
Resumen de proteínas en suero
 CUESTIONARIO
• 1.- Menciona las funciones de las enzimas
• 2.- Que es la energía de activación
• 3.- Cual es la diferencia entre catalizador
inorgánico y enzima
• 4.- Como afecta el pH a la enzima
• 5.- Que es el centro catalítico
• 6.- Que es la especificidad enzimática
• 7.- Que es la especificidad enzimática
• 8.- Que es una isoenzima
• 9.- Menciona 3 ejemplos de isoenzimas
• 10.- Que es una coenzima
• 11.- Diferencia entre apoenzima y holoenzima
• 12.- Que es un grupo prostético
• 13.- Que es un cofactor
• 14.- Que es la FA y donde se ubica
• 15.- Menciona las 3 isoformas de la CK
• 16.- Enzimas que se aumentan en una
pancreatitis
• 17.- PFH que son
• 18.- Actividad de las transaminasas
• 19.- Función y ubicación de la LDH
CINÉTICA ENZIMÁTICA
 Ecuación de Michaelis-Menten: un modelo
simple de una reacción enzimática

• Las reacciones enzimáticas tienen múltiples

pasos y comprenden varias reacciones
parciales.
• En 1913, mucho antes de conocerse la
estructura de las proteínas, Michaelis y
Menten elaboraron un modelo simple para
examinar la cinética de las reacciones
catalizadas por enzimas
 Ecuación de Michaelis-Menten
Michaelis-Menten supone que el sustrato S se une a la
enzima E, formando un intermediario esencial, el
complejo enzima-sustrato (ES), que luego reacciona en
la superficie de la enzima y se descompone en E +
producto (P).
El modelo presupone que E, S y ES se encuentran
todos en equilibrio rápido uno respecto a otro, que se
alcanza rápidamente una concentración estacionaria
de ES y que la descomposición del complejo ES en E +
P es el paso limitante de la velocidad de catálisis.
 Ecuación de Michaelis-Menten
• La constante catalítica, kcat es una constante
de velocidad que describe la rapidez con que
una enzima cataliza una reacción.
• La kcat se define como el número de moléculas
de sustrato que pueden convertirse en
producto por molécula de enzima y por
unidad de tiempo.
 Ecuación de Michaelis-Menten
• La proporción de ES, en relación con el número total de
moléculas de enzima [E]t, es decir, la relación [ES]/[E]t, limita
la velocidad (v) de una enzima, de manera que:
Propiedades de la glucocinasa y de la hexocinasa.

La glucocinasa y la hexocinasa catalizan la misma reacción: la fosforilación de la glucosa a

glucosa-6-fosfato (Glc-6-P). Las enzimas presentan diferencias en sus propiedades
cinéticas y tienen distribuciones hísticas y funciones fisiológicas diferentes.
 La hexocinasa
La hexocinasa cataliza en todas las células el primer paso del metabolismo
de la glucosa, la reacción de fosforilación de la glucosa por el trifosfato de
adenosina (ATP) para formar glucosa- 6-fosfato (Glc-6-P):

Glucosa + ATP → glucosa 6-fosfato + ADP

Esta enzima tiene una baja Km para la glucosa (0,2 mmol/l) y es inhibida
alostéricamente por su producto, Glc-6-P. Puesto que las concentraciones
normales de glucosa en sangre son de aproximadamente 5 mmol/l y las
concentraciones intracelulares de 0,2-2 mmol/l, la hexocinasa cataliza de
modo eficaz esta reacción (50-90% de Vmax) bajo condiciones normales (p.
ej., en el músculo).
 Glucocinasa
Los hepatocitos (que almacenan glucosa en forma de glucógeno) y
las células b del páncreas (que regulan el consumo de glucosa en los
tejidos y su almacenamiento en el hígado mediante la secreción de
insulina), con tienen una isoenzima denominada glucocinasa.

La glucocinasa cataliza la misma reacción que la hexocinasa, pero

tiene una Km más alta para la glucosa (10 mmol/l) y no está inhibida
por la Glc-6-P.
Dado que la glucocinasa tiene una Km muy superior a la hexocinasa,
a medida que las concentraciones de glucosa en sangre aumentan
después de una comida, la glucocinasa fosforila la glucosa de un
modo cada vez más eficaz .
 Glucocinasa
Una de las funciones fisiológicas de la glucocinasa en el hígado es
proporcionar Glc-6-P para la síntesis de glucógeno (una forma de
almacenamiento de la glucosa).

En las células b del páncreas, la glucocinasa funciona como sensor de

glucosa y determina el umbral de secreción de la insulina (su función es la
de favorecer la incorporación de glucosa de la sangre hacia las células:
actúa siendo la insulina liberada por las células beta del páncreas cuando
el nivel de glucosa en sangre es alto).

Los ratones que no tienen glucocinasa en las células b pancreáticas

mueren a causa de hiperglucemia profunda durante los primeros 3 días
tras nacer.
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Naturales o sintéticos, muchos fármacos actúan
como inhibidores enzimáticos. Además, los
metabolitos de estos compuestos también
pueden inhibir la actividad enzimática.
Aunque la mayor parte de los inhibidores
enzimáticos tienen una acción reversible,
también existen inhibidores irreversibles que
modifican permanentemente las enzimas diana.
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Mediante las representaciones de Lineweaver-
Burk es posible distinguir tres formas de
inhibición reversible: competitiva, acompetitiva
y no competitiva.
 Los inhibidores competitivos producen un aumento aparente
de la Km, sin modificar la Vmax

Una enzima puede ser inhibida competitivamente por sustancias

cuya estructura química es similar a la del sustrato.
Estos compuestos se unen en el centro activo y compiten con el
sustrato por el centro activo de la enzima; causan un aumento
aparente en Km, pero ningún cambio en Vmax .

La inhibición no es el resultado de un efecto sobre la

actividad enzimática, sino del acceso del sustrato al
centro activo.
 Los inhibidores competitivos
La constante de inhibición (Ki) es la constante de
disociación del complejo enzima-inhibidor (EI) y
cuanto menor es la Ki, más eficiente es la inhibición de
la actividad enzimática.
Sin embargo, independientemente de la Ki, la
velocidad de la reacción catalizada por una enzima en
presencia de un inhibidor competitivo puede
aumentar al incrementarse la concentración de
sustrato, porque el sustrato, a una concentración más
alta, compite de forma más eficaz con el inhibidor.
Metabolismo de metanol y etanol
 En la inhibición acompetitiva disminuyen
tanto la Km como la Vmax

Un inhibidor acompetitivo se fija al complejo

enzima-sustrato, pero no a la enzima libre. La
siguiente ecuación muestra el esquema de
reacción de la inhibición acompetitiva.
En este caso, Ki es la constante de disociación
para el complejo enzima-sustrato-inhibidor
(ESI).
 Inhibición acompetitiva
El inhibidor causa una disminución de la Vmax,
puesto que una fracción del complejo enzima-
sustrato es desviada por el inhibidor hacia el
complejo ESI inactivo.
La unión del inhibidor y el aumento del complejo
ESI también pueden afectar a la disociación del
sustrato, causando un descenso aparente de la
Km, es decir, un aumento aparente de la
afinidad por el sustrato.
 En la inhibición no competitiva disminuye
la Vmax

Un inhibidor no competitivo puede fijarse tanto a la

enzima libre como al complejo enzima-sustrato. Por
tanto, la inhibición no competitiva es más compleja que
otros tipos de inhibición. La siguiente ecuación muestra
el esquema de reacción observada para la inhibición no
competitiva.
 Muchos fármacos y venenos inhiben
las enzimas de modo irreversible

Las prostaglandinas son unos mediadores

fundamentales de la inflamación. Bajo
condiciones de inflamación, su síntesis es
iniciada por una oxidación (mediada por la
ciclooxigenasa) y posterior ciclación de
araquidonato.
Los compuestos que inhiben la ciclooxigenasa
presentan actividad antiinflamatoria.
 ejemplo
El ácido acetilsalicílico, uno de los fármacos más
conocidos, inhibe la actividad de la ciclooxigenasa
acetilando la Ser530, lo cual bloquea el acceso
del araquidonato al centro activo de la enzima.
Otros antiinflamatorios no esteroideos (AINE),
como la indometacina, inhiben a la ciclooxigenasa
de modo reversible
bloqueando el lugar de unión del araquidonato.
 CUESTIONARIO
• 1.- Que es cinetica enzimática
• 2.- Que es la Kcat
• 3.- Describe la ecuación de Michaelis Menten
• 4.- Cual es la diferencia con la ecuación de
Lineawever Burke
• 5.- Diferencia entre la Hexocinasa y la
glucocinasa
• 6.- Tipos de inhibidores
• Que es un inhibidor competitivo y da un
ejemplo
• Que es la inhibición acompetitiva
• Que es la velocidad de reacción y como se
mide