QUIMICA CLINICA

REACCIONES: PUNTO FINAL, CINETICA DE DOS PUNTOS, CINETICA ENZIMATICA

LIC. JUAN PABLO RODAS CRUZ

 REPASO
TIPO DE MUESTRA Y LÍQUIDOS
BIOLÓGICOS EN QUÍMICA CLÍNICA
TIPOS DE MUESTRA EN QUÍMICA
CLÍNICA (ORINA)
DIFERENCIA ENTRE SUERO Y
PLASMA
ALGUNOS TIPOS DE TUBOS DE EXTRACCIÓN
REACCIONES EN QUIMICA CLINICA
 FOTOMETRÍA
La fotometría se basa en la medición de la luz mediante un
fotodetector.
• La luz puede ser absorbida por una sustancia disuelta en
una solución (absorbancia)
• Dispersada o refractada por las partículas suspendidas en
solución (turbidimetría o nefelometría)
• Emitida por una sustancia que absorbe la luz a una
longitud de onda y la emite a otra longitud de onda
diferente (fluorescencia).
 LONGITUD DE ONDA
• Se eligen longitudes de onda de luz específicas para cada análisis en función
de las propiedades de la sustancia que se está midiendo.
• Una fuente de luz típica (lámpara) genera una amplia gama de longitudes de
onda de luz. Una lámpara de luz visible genera luz de longitudes de onda de
400 nm (luz ultravioleta) a 700 nm (luz infrarroja).
• Una lámpara de luz ultravioleta genera luz de longitudes de onda de
aproximadamente 200 a 400 nm.
 ESPECTROFOTOMETRÍA
• Se refiere a los métodos cuantitativos de análisis químico que
utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias
químicas

• Los métodos espectrofotométricos en química se les conoce

de absorción visible (colorimetría), absorción invisible
(ultravioleta e infrarroja y dependen de la longitud de onda)

• Cada color tiene la capacidad de absorber diferente longitud de

onda Esto lo aplicamos en química clínica para leer cada prueba
REGIÓN DE LUZ
 ABSORBANCIA
• Cuando un analito tiene un color intrínseco (o genera un
color tras una reacción química), la luz visible es absorbida
cuando pasa a través de una solución que contiene el
analito (o sus productos de reacción).
• La absorbancia selectiva de determinadas longitudes de
onda de luz del espectro de luz blanca proporciona a la
solución su color.
 ABSORBANCIA
• Los compuestos que no tienen ningún color visible a menudo absorben la
luz en la región del ultravioleta y esta absorbancia se puede utilizar de la
misma forma que la absorbancia de la luz visible.

• La elección de la longitud de onda de luz específica se basa en las

propiedades de absorción del compuesto que se está midiendo.

• A medida que aumenta la cantidad de una sustancia en solución, disminuye

la cantidad relativa de luz que pasa a través de la solución y alcanza el
detector. La disminución de la luz se denomina
absorbancia.
RELACIÓN COLOR / ENERGÍA
• Líquidos coloreados absorben selectivamente cierta
longitud de onda y trasmiten las otras.

• El agua pura es incolora y permite que todas las longitudes

visibles pasen a través de ella.
– Solución blanco = 0 (cero) de Absorbancia
 LEY DE BEER
• La absorbancia de una solución
coloreada y homogénea es
directamente proporcional a la
concentración

• Mayor COLOR mayor CONCENTRACION

• Menor COLOR menor CONCENTRACION

• Una sustancia coloreada sigue la Ley

de Beer al graficar
EL PROCESO ANALÍTICO DEBE INCLUIR
1. BLANCO
No contiene la sustancia que se esta analizando (solo el
reactivo)

2. ESTANDAR O CALIBRADOR
• Contiene una concentración exacta y conocida de la
sustancia a determinar.
• Se utiliza para estandarizar el método o calibrar el equipo
• La absorbancia de la muestra (concentración no conocida) se
compara con la absorbancia del estándar (concentración
conocida)1
 DIFERENCIA ENTRE ESTÁNDAR Y CALIBRADOR

• Calibrador: espécimen del • Estándar: espécimen del

que conocemos la que conocemos la
concentración exacta de concentración exacta del
un analito; este nos sirve analito pero a diferencia
para calibrar múltiples del calibrador con este
pruebas. solo podemos calibrar
una prueba.
3. CONTROL (SUERO CONTROL)
Es similar ó igual que las muestras y se conoce
el limite y promedio de la concentración del
analito a medir (rangos conocidos).
Ej: Suero control de Glucosa
85-110 mg/dL (media de 97.5)
4. MUESTRA
-Provienen de pacientes
-Es una mezcla de proteínas y analitos de los que no se
conoce la concentración.
 Reacciones
Químicas

Punto Final Cinética

Enzimática
Enzimática
Colorimétrica Enzimática
multipuntos
(FACTOR)
REACCION PUNTO FINAL (COLORIMETRICA)
Las reacciones de punto final son especialmente
adecuadas para las reacciones químicas que se
completan en un tiempo relativamente corto y son
«estequiométricas», lo que significa que producen una
molécula producto o un complejo para cada molécula
de analito.

Reacciones Colorimétricas
• USA ESTANDAR
• ES LINEAL

-Se incuba por un periodo de tiempo ya establecido

-Lectura Absorbancia

– Proteínas
– Calcio
 PUNTO FINAL (ENZIMATICA)
Utiliza un catalítico (enzima ) que es un acelerador de la reacción.

La reacción es mas especifica

– Usa estándar
– Es lineal

• Ejemplos:
– Glucosa : método glucosa oxidasa
– Colesterol
– Triglicéridos
 REACCIÓN CINÉTICA (MULTIPUNTOS)
Ensayos enzimáticos que miden cambios 2puntos
en la concentración del sustrato (que va
decreciendo), o del producto (que va
aumentando)

• Multipuntos: Varias lecturas de Abs. en

el transcurso de la reacción en un
periodo de varios minutos)

• Usa Std (estandar)

– Ejemplo: Creatinina
REACCION CINETICA (ENZIMATICA)

•Cinética multipuntos
•Usa factor
•Se lee en Región UV
•No es completamente lineal
•Mide extinción de la Abs
•Se expresan en:
Unidades de Actividad enzimática = UI/L

•Ej: Transaminasas, Fosfatasa alcalina, otros.

¿DUDAS?