PRUEBA DEL AZUL DE METILENO

OBJETIVO: determinar la presencia de microorganismos en leche de vaca, mediante el tiempo de reducción del
azul de metileno.
FUNDAMENTO TEORICO
El método mide en intervalo de tiempo requerido, la decoloración producto del cambio de estado del colorante
azul de metileno (azul estado oxidado a blanco estado reducido) por acción de actividad microbiana. La mayoría
de los gérmenes de la leche cuando se multiplican elaboran enzimas reductasas que modifican el potencial de
óxido-reducción de la misma. Para demostrar ese fenómeno basta añadir a la leche una sustancia que se decolore
al pasar de la forma oxidada a la forma reducida. La rapidez con que cambia de color está en función de la
población bacteriana y, por ello, puede ser un índice del grado de contaminación de la leche. El colorante más
empleado en la industria láctea para realizar esta prueba es el azul de metileno, pero también se pueden utilizar
la resazurina y el cloruro de 2, 3, 5, trifenil-tetrazolium, ya que son colorantes fácilmente absorbibles por las
células vivas y se decoloran a una velocidad proporcional a la actividad de las reductasas microbianas.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Tomamos 4 tubos de Añadimos 1 ml de azul

ensayo limpios y de metileno a cada
añadimos a cada uno 10 tubo de ensayo, sin
ml de leche fresca, con dejar que la punta de
cuidado de no humedecer la pipeta entre en
uno de los lados del contacto con la leche.
interior de los tubos.

Colocamos lo tubos de
Tapamos los tubos de ensayo en baño maría a
ensayo con un tapón de temperatura de 37 o 38 °C,
caucho o algodón conservando la
tomando precauciones temperatura lo mas
asépticas, invertir uniforme posible mediante
lentamente dos veces al el termorregulador. El
tubo para que la columna aguan del baño maría se
de aire s quede arriba del debe conservar arriba del
nivel de la leche. nivel de la leche en el tubo
de ensayo.

El interior del baño s e debe conserva

completamente oscuro.

Controlar la muestra cada hora y se considera

decolorada cuando la columna entera de leche esta
totalmente decolorada o lo está hasta 5mm de la
superficie.
CÁLCULOS

MATERIALES

 Solución de azul de metileno

 Tubos de ensayo con tapón de caucho o algodón
 1 pipeta graduada de 10 ml
 1 pipeta graduada de 5 ml
 Equipo de baño maría

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Se pueden calcular aproximadamente los resultados de la prueba del azul del metileno de la siguiente forma:

Calidad de ela leche Tiempo de decoloración Número estimado de

bacterias por mL
Pésima Menos de 1 hora
mala 1 a 2 horas 2 a 10 millones
regular 2 a 3 horas 200 000 a 2 000 000
buena 3 a 5 horas 100 000 a 200 000
Muy buena 5 horas a mas

RESULTADOS:

Tiempo de decoloración: 2 a 3 horas , regular

OBSERVACIONES

 La superficie apareció incolora

 Estuvo aproximadamente 2 o 3 horas, considerando que es regular
 Se produce una modificación del color del azul de metileno, pasando de color azul intenso a azul claro,
pudiendo desaparece totalmente de acurdo a la carga microbiana presente. Una leche con un contenido
bajo en microorganismos, no modifica el tinte azul del colorante o tarda mucho tiempo en modificarlo.

CONCLUSIÓN

A lo largo de este objeto de aprendizaje se ha descrito el método para la realización de la prueba de la

decoloración del colorante azul de metileno o prueba de la reductasa bacteriana. Esta prueba resulta muy útil a la
hora en la industria láctea puesto que la velocidad a la que se produce el cambio de color del indicador azul de
metileno es directamente proporcional al número de gérmenes presentes. De esta manera se puede determinar
de manera indirecta la calidad higiénica de la leche.

BIOGRAFIA

NMX-F- 700-COFOCALEC-2004. Sistema- producto leche-alimento-Lácteo- lechecruda de vaca- Especificaciones

fisicoquímicas, sanitarias y métodos de prueba.

LINKOGRAFIA

https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/38380/Eva%20García.%20Calidad%20leche-
2014.pdf#targetText=La%20prueba%20de%20la%20reductasa,decoloración%20debida%20al%20metabolismo%2
0bacteriano.

https://es.scribd.com/doc/80233401/azul-de-metileno