METODOLOGÍA

Para la prueba de ácido nitroso para aminoácidos libres, se utilizo una solución patrón de Alanina
al 1% y la solución problema. A cada se una en un tubo de ensayo, se les añadió 0,5 mL de ácido
clorhídrico concentrado, 1 mL de nitrito de sodio al 5% y se observaron y registraron los resultados
(aparición de burbujas).

Para la prueba de ninhidrina, primero se calentó 1 mL de Ácido aspártico, de serina y de la solución

problema por separado hasta que la solución estuviera lo suficientemente caliente. A cada tubo se
les agregó 0.5 mL de la solución de ninhidrina y posteriormente se calentaron por 10 min es un
baño maría. Al finalizar este tiempo se observó el cambio en la coloración de las soluciones.

Para la prueba de sakaguchi, primero se pusieron en un baño con hielo dos tubos de ensayo que
contenían 5 mL de la solución de Arginina y 5 mL de la solución problema respectivamente. Luego
se les añadió 1 mL de hidróxido de Sodio al 10%, 1 mL de α-naftol al 0.5%; luego el contenido se
mezcló y se dejó en el baño de hilo por 5 minutos. Después se les añadió 10 gotas de hipoclorito
de sodio, se agitaron los tubos y después se les agregó 1 mL de Urea y se observo el patrón se
color que se formó.

Para la prueba de nitroprusiato, se tomaron 2 tubos de ensayo limpios y secos, a los cuales se les
agregó 2 mL de metionina y 2 mL de la solución problema respectivamente. Luego a cada uno de
les adiciono 0.5 mL de nitroprusiato de sodio, se mezclo el contenido y se les añadió a ambos 0.5
mL de NH4OH. Finalmente, se observaron y registraron los resultados.

Para la prueba del acetato de plomo, se utilizaron 2 tubos de ensayo a los cuales se les añadió 2
mL de cisteína y 2 mL de metionina respectivamente, luego a cada uno se les añadió 2 mL de la
solución de hidróxido de sodio al 40% y se pusieron a calentar por aproximadamente 5 minutos.
Posteriormente, se les añadió acetato de plomo al 10% hasta que se evidenció la aparición de un
precipitado blanco en la solución, para luego volver a ponerlos a calentar hasta que esta tomara
una coloración gris oscura, revisándola constantemente y añadiendo más acetato de plomo de ser
necesario.

Para la prueba de Pauly, en dos tubos de ensayo se añadió 1 mL ácido sulfanílico con 2 mL de
histidina y 2 mL de la solución problema respectivamente, los cuales se pusieron en un baño de
hielo por aproximadamente 7 minutos. Luego de este tiempo, se les añadió 1 mL de la solución de
nitrito de sodio al 5% y se pusieron en el baño de hielo por 3 minutos. Finalmente, se alcalinizó las
soluciones con 2 mL de NaCO3 al 5%.

Para la prueba de Biuret, primero se hicieron varias pruebas con concentraciones diferentes de
BSA y del reactivo de biuret (Tabla 1). Luego en otro tubo de ensayo se añadió 2 mL de una
solución de proteína (Ovoalbúmina) y 3 mL del reactivo de Biuret, se mezclo la solución y se
pusieron a calentar a una temperatura de 37°C por 10 minutos.

Con la curva de calibración que se hizo a partir de las pruebas descritas en la Tabla 1, se comparo
la coloración de una solución con una concentración de BSA desconocida, y con ello se encontró la
concentración de dicha prueba.

TUBO (mL) 1 2 3 4 5 6
Solución 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
 de BSA
Agua 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4
destilada
Reactivo 4 4 4 4 4 4
de Biuret
Volumen 6 6 6 6 6 6
total