Cátedra de Inmunología- Dpto de Bioquímica.

FCNyCS-UNPSJB.

PRECIPITACIÓN EN
MEDIO GELOSADO.
 REPASEMOS PRECIPITACIÓN.
● Visible.
 ¿INTERACCIÓN? SECUNDARIA ● Menor sensibilidad.
● Cc de electrolitos dependiente.
● Ag soluble, multivalente y PM >10KDa.
 ¿REQUISITOS?
● Ac mínimamente bivalente.
● Especificidad Ag-Ac.
 ¿CÓMO OCURRE? TEORÍA DEL ENREJADO

OJO!! Efecto Prozona!!

Precipitación en medio gelosado.
 Soporte: semisólido Geles.
 Los geles polimerizan formándose en ellos poros, a través de los cuales los
antígenos y anticuerpos pueden migrar en todas direcciones. Al encontrarse,
interaccionan formando BANDAS DE PRECIPITACIÓN en el gel, siempre que se
cumplan las condiciones necesarias para esta interacción secundaria.

● Inerte.
 Características del soporte: ● De preferencia transparente.
● Concentración del gel. >Cc del gel= < tamaño del poro

TÉCNICAS:
● Inmunodifusión Doble (IDD) o Método de Outcherlony.
● Inmunodifusión Radial (IDR).
● Inmunoelectroforesis (IEF).
● Contrainmunoelectroforesis (CIEF)
Factores que determinan la formación
de las bandas.
Factor Efecto
Concentración del Gel >[gel] < tamaño del poro < radio difusión
<[gel] > tamaño del poro > radio difusión
Concentración sustancia > [S] > radio difusión
Tiempo > tiempo > distancia recorrida > radio
difusión
Peso molecular sustancia >PM < radio difusión
Temperatura > T° > velocidad difusión  independencia
de la temperatura
Distancia de los orificios de Deber estar a una distancia apropiada
siembra
Ley de difusión [𝑆]
𝐷=
𝑃𝑀
Doble difusión bidimensional (IDD) o
método de Outcherlony.
 Consiste en sembrar en pocillos realizados sobre una superficie de agar
solidificado, a una distancia adecuada, el anticuerpo y el antígeno
respectivamente. Esto se incuba varias horas durante las cuales migrarán
ambos componentes entre los poros del gel en todas direcciones. Si hay
especificidad del anticuerpo con el antígeno, en la zona de equivalencia se
formará una banda de precipitación.
Tipos de patrones de precipitación en IDD

 Sensibilidad: 10 – 20 ug/ml
 Cualitativo/ Semicuantitativo
Patrón de Identidad
Dos sistemas antigénicos IDÉNTICOS
enfrentados con un anticuerpo con
especificidad para ese antígeno.
Fusión de bandas en un único arco.

Ambas siembras de antígeno comparten

todos los determinantes antigénicos.
Patrón de No Identidad
Dos sistemas antigénicos
COMPLETAMENTE DIFERENTES
enfrentados con los anticuerpos con la
especificidad correspondiente para cada
uno.
Dos bandas de precipitación que no se
fusionan: se cruzan.

No se comparte ningún determinante

antigénico entre las siembras de antígenos.
Patrón de Identidad Parcial
Dos sistemas antigénicos SIMILARES (NO
IDENTICOS).

Se forma una banda fusionada y un espolón.

Ambos sistemas comparten algunos

determinantes antigénicos (banda fusionada),
pero otros no los comparten (espolón).
Ventajas de Outcherlony
 Permite conservar los resultados.
 Permite visualizar la interacción antígeno anticuerpo.
 Permite demostrar reacciones cruzadas (identidad o
identidad parcial).
 Demostrar homogeneidad de antígeno o anticuerpo
purificado.
 Estimar pesos moleculares relativos del antígeno y
anticuerpo.
 Semicuantificar: titulo como inversa de la máxima
dilución con precipitación.
Aplicaciones de Outcherlony
 Separar antígeno de una mezcla.
 Identificar antígeno por comparación con antígeno conocido en paralelo.
 Analizar pureza del antígeno luego de una separación inmunoquímica.
 Identificar tipo de inmunoglobulina en patología por hiperfunción.
 Valorar semicuantitativamente anticuerpos.
 Aplicaciones clínicas previamente usadas: Arco 5 y detección de anticuerpos
anti antígenos extraíbles del núcleo.
Inmunodifusión Radial (IDR)
 Técnica CUANTITATIVA.
 Detección de un antígeno en una mezcla de antígenos.
 Cuantifica Inmunoglobulinas (G, M y/o A) o antígenos solubles
que están presentes en muestras biológicas (C3, C4,
transferrina, haptoglobina, etc.)
 Uso de agar con anticuerpo monoespecífico disuelto.
 El antígeno difunde desde el pocillo en todas direcciones y
precipita con el anticuerpo del agar cuando se alcanza la
equivalencia.
 Medición de diámetro del halo de precipitación: proporcional
a concentración del antígeno (uso de curvas de calibración).