Técnicas inmunodiagnósticas

Y de screening
 Obtención de anticuerpos:
Monoclonales y Policlonales
• https://www.youtube.com/watch?v=FOXQFpG4GoQ

• Monoclonales (ratón)
• Policlonales (conejos)
• Inyectar una suspensión de antígenos en la cavidad peritoneal.
• 7 – 10 días, primera inmunización. Hay producción de anticuerpos
• Después de la 2da inmunización, se sangra al animal, para buscar
anticuerpos específicos. (anticuerpos policlonales)
• Si vamos al bazo del ratón, tendremos anticuerpos monoclonales. Ahí
tendremos clones de anticuerpos específicos e inespecíficos
• Se estimula la formación de hibridomas (fusionar linfocitos B más
células tumorales (mieloma). Mezcla la capacidad de crecimiento
permanente de la célula tumoral + la generación de anticuerpos del
linfocito B. Las células no fusionadas, mueren.

• Técnica de Dilución límite: En placas, realizan cultivos celulares de

linfocitos B (híbridos), para obtener clones de híbridos de linfocitos B.
• Se hacen réplicas de estas placas.
• Los anticuerpos se ponen en contacto con los antígenos.
• En los que hay reacción están los anticuerpos monoclonales.
• Se hace resiembra en cultivos en botellas para obtener más
hibridomas.
• Se pueden inyectar de nuevo en el animal.
• Puede tomarse líquido ascítico del anticuerpo de interés.
• El anticuerpo puede estar ya listo para reaccionar. Se puede unir a
enzimas, a sustancias radioactivas, a sustancias flourescentes.
Técnicas inmunológicas

• Precipitación
• Inmunodifusión.
• Aglutinación
 UNIVERSIDAD Técnicas precipitación
CATÓLICADE
TEMUCO
PRUEBASDEPRECIPITACIÓN
SEBASAEN:
Multivalenciadelosanticuerpos:Una Deteccióndeantígenopolivalente:
moléculapuedeunirseamasde1antígeno Masde1epítopepormoléculadeantígeno

Complejoporunionescovalente:Complejo
grandequeseseparadelasolución
precipitando

Sepuede Separaciónpor
Visiblesenmatriz
centrifugarel métodos
degel
precipitado bioquímicos
 UNIVERSIDAD Técnicas inmunodifusión
CATÓLICADE
TEMUCO
PRUEBASDEPRECIPITACIÓN

Inmunoprecipitaciónenmatricesdegel

1° 2° 3°
DepositodeAgy Comienzanadifundir Precipitaciónenlugarde
Anticuerposenpocillos radialmente encuentro

Antígeno
v

Anticuerpos
7
Precipitadovisible
Geldeagarosa
Pruebas de aglutinación
 UNIVERSIDAD
CATÓLICADE
TEMUCO
PRUEBASDEAGLUTINACIÓN
AGLUTINACIONDIRECTA:
AGLUTINACIÓNINDIRECTA:
ClasificaciónsistemaABOdeglóbulos
rojos
Aglutinaciónenlátex

Seusanantisueros(solucióncon Ellátexseusacomoelmaterialparticulado
anticuerpos)específicosparaantígenosABO queseconjugaconanticuerpospara
delosGR. detectarmoléculassolublesensuero
LosGRsonelmaterialparticulado Ejemplo:

Muestra
•ProteínaCreactiva
•Factorreumatoide

Sinaglutininas
•Toxinasbacterianas

Aglutininosanti=/

Aglutininasanti-

Aglutininasanti-A
 • ELISA SANDWICH
• https://www.youtube.com/watch?v=FmVV4e8evc8

• ELISA DIRECTA
• https://www.youtube.com/watch?v=fxyHClJ3sgo

• INMUNODIFUSIÓN RADIAL
• https://www.youtube.com/watch?v=U5fYBFgOJAE

• ELECTROFORESIS
• https://www.youtube.com/watch?v=6vKLT5mQoBM

• INMUNOCROMATOGRAFÍA
• https://www.youtube.com/watch?v=J2c1pgBC4js
 • INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)
• https://www.youtube.com/watch?v=xqvHsIWETjs
Inmunodifusión Radial
Electroforesis
Electroforesis
Inmunocromatográfia
Inmunofluorescencia indirecta