INMUNODIFUSIÓN RADIAL

Villano Barrial Viviana Villar Portuguéz Jocelyn

INMUNODIFUSIÓN RADIAL
Para la realización de estas técnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitación del complejo Ag-Ac.

La inmunodifusión radial (IDR) es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es una técnica sensible que es usada clínicamente para detectar niveles de inmunoglobulinas Ig.G, M y A ó antígenos solubles (C3, C4, transferrina, etc) presentes en muestras biológicas

creada  Jacques oudin. En 1946. ( dreux 1908-paris 1985) « doctor en medicina en 1946 escribió algunas notas y clasicos en el que se describen las soluciones de antígenos y anticuerpos de inmunodifusion en gel de agar» Recibió premio nobel en 1984 por las teorías en cuanto a la especificidad del desarrollo y control del sistema inmuno y el descubrió del principio para la producción de anticuerpos monoclonales. oudin descubre la precipitación .

Orjan ouchterlony ( Estocolmo 19142004)  Medico sueco ouchterlony desarrollo en su tesis un nuevo método analítico para la inmunodifusion. Modifica la teoría de oudin dando lugar a la doble inmunodifusion   . El método se usa en todo el mundo. Este método se llama a menudo el método de ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de la inmunología durante décadas.

Inmunodifusion radial simple (IDRS. o técnica de Mancini) .

se calienta hasta 100 °C La agarosa debe enfriarse a 52°C antes de que se le agregue el antisuero . la concentración del agar es de alrededor 10 g/ L. los geles de poliacrilamida no son recomendadas.INMUNODIFUSIÓN RADIAL  ALGUNOS ASPECTOS A TENER EN CUENTA El gel de agarosa es el mas utilizado en las pruebas de inmunodifusion.

La T° de las placas de IDR debe ser de 2 a 8°C Las placas en posicion invertida El volumen a dispensar es de 5 microlitros Es mas recomendable utilizar microtip Incubar en camara húmeda .

INMUNODIFUSIÓN RADIAL principio La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico. a medida que el antígeno difunde.. se alcanza la relación Ag-Ac que permite la formación precipitados visibles. con el objeto de construir una curva de calibración. .

la presencia y cantidad de antígeno en las muestras desconocidas pueden ser determinadas. .• Generalmente toma de 24 a 48 horas • Para cada antígeno. se formará una precipitación final en anillo de cierto diámetro • concentración de antígeno vs mediciones de diámetro de los anillos • A partir de esta curva de calibración lineal.

en un comienzo esta presente en una concentración relativamente alta y forma complejos solubles El halo de precipitacion es directamente proporcional a la concentracion del antigeno hasta que se alcanza el punto en el cual los reactantes están más cerca de las proporciones óptimas (zona de equivalencia). .

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INMUNODIFUSION DOBLE (IDRD. O TÉCNICA DE OUCHTERLONY) .

es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión doble) . De modo que al encontrarse en proporciones optimas. produciendo una banda de precipitación visible. Constituye un método mas completo por que permite obtener una información mas completa que las anteriores. interaccionen.fundamento  Empleando el medio adecuado (agar gel).  .

principio  La precipitación ocurre con la mayoría de los antígenos. debido a que éstos tienden a ser multivalente. a su vez.  . Cada anticuerpo. tiene por lo menos dos sitios de unión para los antígenos.

. que distaran 1 cm entre si En los distintos orificios enfrentados se agregaran 10 ul de Ag y 10 ul del suero.procedimiento En una placa Petri estéril se depositara 15ml de agar y enfriado a 50°C. Se dejara solidificar y se confeccionaran pares de orificios 5 mm de diámetro. Se detectaran las correspondientes bandas de precipitación en el espacio que separan los orificios. Las placas se mantendrán en cámaras húmedas  Las lecturas de los resultados se efectuaran a las 24-72 hs.

Difusión simple Difusión doble Una dimensión Dos dimensiones .

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La distancia a la que una sustancia difunde está:  en relación DIRECTA con su CONCENTRACION. Concentración de equivalencia Exceso de Ac .

Reacciones de precipitación .

Patrones de precipitación por IDRD  Sistema con tres reservorios pueden generar bandas de precipitación que han recibido nombres específicos IDENTIDAD: los dos sistemas antigénicos son iguales. . por lo tanto se funden en una banda de precipitación.

NO IDENTIDAD: los dos sistemas antigénicos son distintos. cada uno origina bandas de precipitación independiente que se cruzan. .

IDENTIDAD PARCIAL: los dos sistemas antigénicos comparten algún componente (banda que se funde). pero no son iguales (espolón o prolongación). .

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