ASIGNATURA

: Laboratorio de microscopide Clave:med-315 GRUPO: 002

DOCENTE:María Elena velez FECHA: 19-02-2021
PARTICIPANTE: EUNCE PALMERS PEREZ Matrícula:1-18-8813

Preparación de medio cultivos

Agar sangre:



El agar sangre es un medio de cultivo sólido
enriquecido, diferencial pero no selectivo. Es utilizado
para la recuperación y crecimiento de una gran variedad
de microorganismos provenientes de muestras clínicas
o para subcultivos.


El agar sangre clásico debe ser incluido para el
sembrado de la mayoría de las muestras clínicas
recibidas en el laboratorio; a excepción de las muestras de heces en el que no es útil, a
menos que se prepare con ciertas modificaciones.
Este medio de cultivo se compone básicamente de un agar base enriquecido y 5% de
sangre. La base de agar puede variar de acuerdo a las necesidades, pero
principalmente estará compuesto por peptonas, aminoácidos, vitaminas, extracto de
carne, cloruro de sodio, agar, entre otros.

En cuanto a la sangre, normalmente se requiere tener contacto con un bioterio para la
obtención de sangre de animales, tales como carnero, conejo o caballo. Sin embargo,
esto no siempre es posible y en ocasiones se usa sangre humana.
El medio agar sangre puede ser preparado en el laboratorio o puede comprarse ya listo
a empresas que se dedican a ello. La preparación de este medio es uno de los más
delicados, cualquier descuido en su elaboración dará como resultado un lote
contaminado.
Es por ello que deben tomarse todas las precauciones posibles y al final debe realizarse
un control de calidad incubando a 37 °C 1 placa por cada 100 que se preparen.





Preparación


Pesar y disolver

El agar base viene deshidratado (en polvo), por tanto debe disolverse en agua
destilada ajustada a pH 7,3.

Se pesa la cantidad que indique el agar base escogido y se disuelve en la cantidad de
agua correspondiente en una fiola, luego se calienta a fuego moderado y se mezcla con
movimientos rotativos hasta disolver todo el polvo.

Esterilizar

Una vez disuelto, esterilizar en autoclave a 121°C por 20 minutos.

Agregado de la sangre

Al salir del autoclave se dejar enfriar la fiola hasta que la temperatura oscile entre 40 a
50 °C; es una temperatura que la piel humana soporta y a la vez el agar aun no se ha
solidificado.

Para ello, se toca la fiola con la mano y si el calor es tolerable, es la temperatura ideal
para agregar la cantidad de sangre desfibrinada correspondiente (50 ml por cada litro
de agar). Mezclar suavemente para homogeneizar.

El paso del agregado de la sangre es crucial, pues si se realiza cuando el medio está
muy caliente los glóbulos rojos se romperán y el medio no servirá para observar
hemólisis.

Si se agrega demasiado frío, se formarán grumos y la superficie del medio no quedará
lisa para poder hacer el estriado adecuadamente.

Verter en las placas de Petri

Servir en placas de Petri estériles inmediatamente después de homogeneizar la sangre.
En cada placa de Petri se vierte aproximadamente 20 ml. Este procedimiento se realiza
en una campana de flujo laminar o cerca del mechero.

Al momento de servir el agar sangre en las placas de Petri no deben quedar burbujas
de aire en la superficie de la placa. Si esto sucede se pasa la llama del mechero de
Bunsen rápidamente sobre la placa para eliminarlas.

Las placas se dejan solidificar y se guardan en nevera (2-8°C) de forma invertida hasta
su uso. Antes de usar las placas de agar sangre se deben atemperar (dejar que tomen
temperatura ambiente) para poder ser sembradas.

Las placas preparadas tienen una duración aproximada de 1 semana.
Fórmula ( por litro)
Infusión de Corazón (a partir de 375 g)........................... 10,0 g

Peptona de Carne ...................................... 10,0 g

Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g

Agar Agar............................................................ 15,0 g

pH final: 7,3 ±0,2

Agar chocolate


El agar chocolate es un medio de cultivo sólido,
enriquecido, no selectivo y no diferencial. Es utilizado
principalmente para el aislamiento de microorganismos
exigentes desde el punto de vista nutricional, aunque en
él pueden crecer cualquier tipo de bacterias.
Es por ello que su utilidad aumenta especialmente en el sembrado de muestras que
normalmente son estériles, como LCR y líquido articular. Aunque también se incluye
dentro de los medios escogidos para siembras de muestras polimicrobianas, pero en
estos casos es necesario la adición de antibióticos que inhiban la flora concomitante.
La preparación es muy similar a la del agar sangre, solo que en este caso la sangre
debe ser calentada con la finalidad de que los glóbulos rojos se rompan.

Preparación

Se deben ver las indicaciones de preparación del agar base que se va a utilizar. Las
mismas se encuentran al reverso del envase del medio deshidratado. Generalmente
describen cuánto se debe pesar para preparar un litro de medio de cultivo.

En el laboratorio se puede preparar la cantidad exacta necesaria, puede ser más o
menos de un litro.

Cálculos

Se realiza una regla de tres para calcular cuánto se debe pesar para preparar el
volumen que se desea. Ejemplo:

Si para 1 litro se necesita pesar 40 gr y el laboratorio requiere 800 ml, se dice:

1000 ml ———————————40 gr

800 ml ———————————– X


La fórmula quedará de la siguiente manera:

Fórmula
X= 32 gr (cantidad a pesar para 800 ml).

Pesar y disolver

Se procede a pesar la cantidad necesaria y se coloca en una fiola con el agua.

Se calienta a fuego moderado y se va mezclando suavemente con movimientos
rotatorios hasta disolver completamente el medio deshidratado, dejando hervir por 1
minuto.

Esterilizar

Se introduce la fiola en el autoclave para esterilizar el medio a 121°C por 20 minutos.

Agregado de la sangre

Al salir del autoclave se deja reposar hasta que la temperatura del medio esté
aproximadamente entre 56 a 70°C para colocar la sangre y mezclar hasta que el medio
se torne color marrón.

Si se va a agregar suplementos, este es el momento de hacerlo. Posteriormente
mezclar y servir 20 ml a cada placa de Petri estéril.



















Agar macConkey:


El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido que
permite el aislamiento exclusivo de bacilos Gram
negativos. Por esta razón es un medio selectivo y además
permite distinguir entre bacilos fermentadores y no
fermentadores de la lactosa, lo que lo hace un medio
diferencial. Es uno de los medios de cultivo más utilizado en un laboratorio de
microbiología.
Este medio se usa principalmente para el aislamiento de bacilos Gram negativos
pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, incluyendo las especies oportunistas y
las enteropatógenas.
Agar MacConkey sembrado con dos tipos de bacterias. Lado izquierdo colonias
fermentadoras de lactosa, lado derecho colonias no fermentadoras de lactosa.
También se puede usar para aislar a otros bacilos entéricos que habitan en el tracto
gastrointestinal, pero que no pertenecen a Enterobacteriaceae, como Aeromonas sp,
Plesiomonas sp, entre otros. Finalmente, puede aislar otros bacilos Gram negativos no
fermentadores de glucosa que se encuentran en ambiente, agua o suelos, pero que en
ocasiones pueden ser patógenos oportunistas como Pseudomonas sp, Acinetobacter
sp, Alcalígenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, entre
otros.

Preparación

Para un litro de agar MacConkey se debe pesar 50 gr del medio deshidratado, luego se
coloca en una fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 10 minutos
de reposo se calienta mezclando constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.

Luego se coloca la fiola en el autoclave y se esteriliza a 121°C por 20 minutos.
Culminado el tiempo, se saca del autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una
temperatura de 45°C, para posteriormente servir en placas de Petri estériles dentro de
una campana de flujo laminar o frente al mechero de Bunsen.

Dejar solidificar y guardar en un portaplaquero de forma invertida y refrigerar en
nevera a 2-8°C hasta su uso.

Para obtener un agar MacConkey que inhiba el efecto swarning que produce el género
Proteus se usa un agar MacConkey bajo en sal.