Clase 4

Unidad I
 ENZIMAS

• Son proteínas celulares que catalizan

reacciones químicas intra y extracelulares.

• Las enzimas son altamente específicas.

• El reactante en una reacción catalizada es

llamado de sustrato.
 ENZIMAS
• Las reacciones químicas en los sistemas biológicos
ocurren en presencia de proteínas catalíticas llamadas
enzimas.

• Las características de las enzimas son su poder

catalítico y su especificidad.
 Propiedades de las Enzimas
 Disminuyen la energía de activación
requerida en la reacción.
 Poseen una alta especificidad
(estereoespecificidad) por el o los sustratos.
 Actúan en bajas concentraciones.
 Incrementan la velocidad de la reacción entre 103
- 106 veces.
 No alteraran la constante de equilibrio de la
reacción de la reacción.
• No se modifican químicamente durante la
reacción.
 *

(*) velocidad reacción catalizada/velocidad de reacción no catalizada

(sentido de la reacción)
•Cuando la reacción es catalizada por una enzima, el valor
de la energía de activación disminuye y la reacción ocurre a
mayor velocidad.
• Poseen una alta especificidad
(estereoespecificidad) por el o los sustratos.
• Ejemplo: las aminoacil-tRNA sintetasas sólo
unen -Laminoácidos para la síntesis de
proteínas.

• Catalizador químico inespecífico

 Sitios en la molécula de enzima
• a) sitio de unión, sitio de la enzima,
compuesto por residuos de aminoácidos, al
que la molécula de sustrato se une en la
orientación apropiada.
• b) sitio activo o catalítico, sitio específico
de la enzima, en el cual los residuos de
aminoácidos que lo forman estabilizan el
sustrato y realizan la transformación del
sustrato en producto.
La estructura tridimensional de la enzima se “amolda” a la forma del
sustrato adquiriendo una nueva conformación ideal para la catálisis.
Catálisis ácido-básica, covalente o por iones metálicos.
1) La enzima está disponible, con su sitio activo libre.
2) El sustrato se une a la enzima.
3) El sustrato es procesado (hidrólisis en este ejemplo)
4) Los productos de la reacción son liberados
 Términos
• Apoenzima
Enzima inactiva, no funcional, debido a que no posee un cofactor
no protéico esencial para su actividad como catalizador. El término
apoenzima se aplica a la porción proteica de una holoenzima.

• Holoenzima
Enzima funcional que posee todos los factores no proteicos
necesarios para actuar como un biocatalizador.

• Metaloenzima
Enzima que posee un ion metálico localizado en el sitio activo,
con la función de actuar como un centro electrofílico (afinidad por
grupos ricos en electrones) durante la catálisis, formando un complejo
de coordinación con el sustrato. Ejemplos: Fe+2 ; Co+2 ; Cu+2 ; Zn+2 .
• Proenzima
Proteína precursora de una enzima, que es sintetizada
con un tamaño mayor al de la enzima funcional.

• Zimógeno
Forma inactiva o proenzima en que son sintetizadas
las enzimas proteolíticas en una célula.

• Cofactores
Moléculas no protéicas, esenciales para que una
apoenzima se transforme en una holoenzima o enzima
catalíticamente activa. La naturaleza química de los
cofactores puede ser orgánica (coenzimas y grupos
protéticos) o inorgánica (iones metálicos).
• Cofactores enzimáticos: Mg 2+, Mn2+,
Co+, Cl- , etc.
• se requieren para que la reacción enzimática
ocurra .
• La reacción ADN polimerasa (Mg2+)
COENZIMAS: TRANSPORTADORES TRANSITORIOS DE GRUPOS FUNCIONALES
VITAMINAS FUNCIONES Enfermedades
carenciales en humanos
C (acido ascórbico) Coenzima de algunas peptidasas.
Interviene en la síntesis de colageno Escorbuto
B1 (tiamina) Coenzima de las descarboxilasas y de
las enzima que transfieren grupos aldehidos Beriberi
B2 (riboflavina) Constituyente de los coenzimas FAD y FMN Dermatitis y
lesiones en las
mucosas
B3 (acido pantoténico) Constituyente de la CoA Fatiga
B5 (niacina) Constituyente de las coenzimas NAD y NADP Pelagra
B6 ( piridoxina) Interviene en las reacciones de transferencia
de grupos aminos. Depresión,
anemia
B12 (cobalamina) transferencia de grupos metilo. Sintesis HEMO Anemia,
Biotina grupos carboxilo, en metabolismo de Fatiga, dermatitis.
aminoácidos.
Ac. Fólico sintesis de acidos nucleicos deficiencias en feto
NADH:coenzima transporta H, la reacción es
catalizada por la Lactato deshidrogenasa una
enzima tipo oxidoreductasa.
Clasificación sistemática de las enzimas
 Clasificación de las enzimas
GRUPO Tipo de reacción
Oxidoreductasas redox
Transferasas transfieren un grupo funcional -NH3.
Hidrolasas el agua rompe un enlace
Liasas adición de grupos a dobles enlaces o
formación de dobles enlaces.
Isomerasa rearreglo de grupos funcionales
Ligasa une 2 moléculas , gasto de ATP
 Clasificación de las enzimas
• Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry
and Molecular Biology (www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme).

• Enzyme Commission number (E.C) Ej: E.C 2.7.1.1

Clase: 2 (transferasa)
Subclase:7 (fosfotransferasa)
Aceptor: 1 fosfotransferasa con un grupo hidroxilo como aceptor.
Aceptor: 1 D-glucosa como aceptor de fosfato.
Nombre común : hexoquinasa
Enzima Hexokinasa de la Vía
Glicolítica (transferasa)

Mg++
 ISOENZIMAS
• Diferentes formas (secuencia primaria) de una misma enzima que
catalizan la misma reacción.
• Presentan diferente estructura depediendo del tejido u organelo donde
se encuentren.
• Da cuenta de cambios metabólicos en el desarrollo en los seres vivos.
Por ej: variaciones de lactato deshidrogenasa en el desarrollo de
mamífero (ratas).
• Isoenzimas (isozimas)
– Son enzimas que catalizan la misma reacción química en tejidos diferentes
– Las diferentes formas de una isoenzima se localizan preferentemente en
tejidos diferentes.
– Existen más de una forma molecular de ella en el mismo organismo.
– El caso más estudiado es el de la enzima láctico deshidrogenasa, LDH
,compuesta de 4 subunidades, que pueden asociarse de diferente manera
(HHHH, HHHM en corazón y MMMM en músculo):
• existen 2 formas:
» M, encontrada principalmente en el músculo esquelético
» H, encontrada principalmente en el músculo cardiaco.
» Estas formas son productos de 2 genes relacionados.
» Cada gen codifica una cadena polipéptidica de PM 35000.

– Las diferencias cinéticas (valores de KM y Vm) permiten su separación e

identificación y, además, comprender el rol funcional de ellas en los
diversos tejidos.
•Diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus propiedades, de
forma que cada isozima esta adaptada la función que debe realizar. Así, podemos
observar la existencia de isoenzimas en función de:

•Tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isozimas

distintos en músculo y corazón.
•Compartimento celular donde actúa: Por ejemplo, la malato
deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria.
•Momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo, algunos
enzimas de la glicólisis del feto son diferentes de los mismos enzimas en el
adulto.
• Complejos multienzimáticos. Unidad catalítica
compuesta de varias enzimas, funcional y estructuralmente
diferentes, que catalizan reacciones sucesivas en una ruta
metabólica.
• Las enzimas en el complejo pueden encontrarse unidas
entre sí covalentemente o a través de otro tipo de
interacción.
• Ya que los sitios activos de las enzimas integrantes del
complejo están físicamente muy cercanos, los productos
formados en una reacción no difunden fuera del complejo,
sino que quedan disponibles como sustratos para la
siguiente etapa.
COMPLEJO MULTIENZIMATICO COENZIMAS Nº SUBUNIDADES

Piruvato deshidrogenasa (46.080 kDa):

piruvato deshidrogenasa tiamina pirofosfato 24
dihidrolipoamida aciltransferasa ácido lipóico; CoA 24
dihidrolipoamida deshidrogenasa FAD; NAD+ 12

alfa-cetoglutarato deshidrogenasa (46.750 kDa):

-cetoglutarato deshidrogenasa tiamina pirofosfato 24
dihidrolipoamida trans-succinilasa CoA; ácido lipoico 24
dihidrolipoamida-succinil deshidrogenasa FAD; NAD+ 12

acetil-CoA carboxilasa (277 kDa):

proteína portadora de biotina y grupo

carboxilo biotina 2
biotina carboxilasa -------------- 2
transcarboxilasa -------------- 4
• Reacción acoplada
Dos o más reacciones enzimáticas se encuentran
acopladas cuando el producto de la primera
reacción es el sustrato para la siguiente reacción.
Cinética enzimática
LA CINÉTICA ENZIMÁTICA es el área
de la enzimología que estudia la velocidad
de las reacciones catalizadas por enzimas,
proporcionando información sobre:
– los mecanismos de la reacción,
– la especificidad de las enzimas y
– otros parámetros que caracterizan a las
enzimas.
En 1913, Michaellis y Menten desarrollaron
la teoría y el tratamiento matemático para la
velocidad que rige la acción de la gran
mayoría de las enzima (cinética
Michaeliana), considerando que la reacción
ocurre en dos etapas:
Leonor Michaelis (1875-1949) Maud Leonora Menten (1879-1960)
 k1 k2
E + S  ES  E + P ,
k-1
Donde k1 , k-1 y k2 son las constantes
microscopicas de velocidad de la formación
y ruptura del complejo
La primera etapa
de la reacción enzimática,
se forma rápida y reversiblemente
el complejo enzima-sustrato

E + S  ES
La segunda etapa,
el complejo ES se transforma más lenta e
irreversiblemente en producto, siendo la
etapa limitante de la velocidad de la
reacción.

ES  E + P
• En 1925, Briggs y Haldane publicaron la
ecuación que describe la relación entre la
velocidad inicial de la reacción y la
concentración de sustrato
• A baja S v proporcional S (Vmax/KM), orden 1
• A alta S v proporcional Vmax , orden 0
 A baja [S], vo es de primer orden con respecto a
[S] (la formación de producto es directamente
proporcional a [S]).
 A alta [S], vo es de orden cero con respecto a
[S] y se alcanza la velocidad máxima de la
reacción (la enzima está completamente
saturada e incrementos de [S] no afectan la
velocidad).
Constante de Michaellis- Menten (KM)
• Parámetro cinético que caracteriza la interacción de
una enzima con su sustrato
• Corresponde a una relación entre aquellas constantes
cinéticas microscópicas de velocidad involucradas en
la formación y ruptura del complejo enzima-sustrato.
• En la práctica, “el valor de KM equivale a la
concentración de sustrato necesaria para que la
reacción catalizada por la enzima alcance la mitad
de la velocidad máxima”.
• Los valores de KM para los sustratos naturales de las
enzimas están en el rango de 10-2 a 10-7 M.
 Velocidad máxima
• Velocidad que alcanza una reacción catalizada por una
cantidad fija de enzima saturada con su sustrato.
• En estas condiciones, todas las moléculas de enzima
están formando el complejo enzima-sustrato (ES) y
todos los sitios activos están ocupados.
• Un incremento en la concentración de sustrato no
produce un aumento en la velocidad, por lo que la
reacción es de orden cero con respecto al sustrato y la
velocidad es máxima.
 Eficiencia catalítica de las enzimas
Para estudiar la eficiencia catalítica de las enzimas se
define una constante catalítica:
k cat
también se la llama número de recambio “turnover
number” que corresponde a la cantidad máxima de
moléculas transformada por unidad de tiempo, se mide
en s-1 en condición de V máx (concentración saturante de
sustrato).
kcat=Vmax/Et
.
 K cat / KM

Las unidades son M-1 *s-1

Permite establecer la eficacia catalítica del enzima con su

afinidad por el sustrato.

Bajo valor :- Kcat bajo o Km alto

- Kcat bajo y Km alto

Alto valor: - Kcat alto y Km bajo